免疫组织化学染色分析检测结果 ICAM-1及VCAM-1:土黄色区域为阳性信号,主要分布于主动脉内膜,而中膜也有少量表达。NC组主动脉ICAM-1及VCAM-1蛋白表达很低;MS组ICAM-1及VCAM-1表达明显增强;HLJDT组ICAM-1及VCAM-1表达较MS组明显减弱。 以各视野IOD值作为反应ICAM-1及VCAM-1蛋白表达的定量指标结果:与NC组比较,MS组主动脉ICAM-1及VCAM-1表达升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组ICAM-1及VCAM.1表达降低(P＜0.01)。 5.实时定量RT-PCR检测结果 与NC组比较,MS组主动脉MMP-2、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、TNF-αmRNA表达明显升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组MMP-2、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、TNF-αmRNA表达降低(P＜0.01～0.05)。 6.三组大鼠磷酸化p38MAPK、ATF-2及MMP-2蛋白表达水平检测结果 与NC组比较,MS组主动脉磷酸化p38MAPK、磷酸化ATF-2及MMP-2蛋白表达明显升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组磷酸化p38MAPK、磷酸化ATF-2及MMP-2蛋白表达明显降低(P＜0.01～0.05)。 结论 1.MS大鼠存在主动脉肥厚性重构,且主动脉炎症反应增强,这可能是MS血管并发症发生率较高的基础。

2.炎症通过激活p38MAPK,上调MMP-2表达,加速MS大鼠血管重构的发生发展。 3.黄连解毒汤通过抗炎抑制p38MAPK激活,进而减少ATF-2及MMP-2的表达,起到干预MS大鼠主动脉重构的作用。
ADAM 没有 (A Disintegrin And Metalloproteinase)是一类含有七个功能结构域并在细胞间相互识别和相互作用中发挥重要作用的跨膜糖蛋白家族。ADAM15作为该家族唯一在去整合素结构域(disintegrin)含有RGD(Arg-Gly-Asp)基序的成员,在细胞外基质降解、细胞粘附、细胞内信号转导和肿瘤的病理变化等过程中发挥重要作用,但是其抗肿瘤机理需进一步阐释。本文在成功获取高表达水平的重组人ADAM15去整合素结构域蛋白片段(rhddADAM15)的基础上,以小鼠黑色素瘤细胞(B16)为研究模型,研究rhddADAM15对B16细胞体外增殖、粘附和迁移等细胞行为的影响,通过筛选rhddADAM15特异结合的12肽以及rhddADAM15在B16细胞上相互作用的靶点蛋白,探讨rhddADAM15干预肿瘤细胞行为的生理机制。主要研究结果如下: 查找更多 1)为获得大量具有生物活性的rhddADAM15蛋白,在详尽分析目标蛋白的cDNA序列的基础上,(1)选择能为大肠杆菌稀有密码子提供额外tRNA的大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)作为宿主菌,将目标蛋白以GST(Glutathione-S-transferase)融合蛋白形式表达,在最佳诱导表达条件下融合蛋白GST-ADAM15浓度为298 mg/L,最佳凝血酶酶切条件下,rhddADAM15浓度为42 mg/L; (2)采用PCR体外定点突变技术将凝血酶识别序列附近稀有密码子GGA(Gly)替换为GGC,同时消除Pro-Glu-Phe残基,构建突变表达质粒,提高凝血酶酶切效率。在相同的表达和酶切条件下获得GST-△-ADAM15和rhddADAM15蛋白浓度分别为326

mg/L和68mg/L,比野生型分别提高9.4%和61.9%。这一结果表明,在充分认识目标蛋白特性的基础上定向选择表达宿主并改造表达质粒能实现外源蛋白高水平表达; 2)采用MTT法测定rhddADAM15对B16、MCF-7/W以及HMEC-1细胞体外增殖的作用,采用创伤愈合实验、Matrigel基质胶以及Transwell侵袭小室法观察rhddADAM15对B16细胞体外迁移、粘附和侵袭的影响;采用台盼蓝染色法分析细胞活力、流式细胞仪检测rhddADAM15对B16细胞周期的影响。结果表明rhddADAM15对肿瘤细胞和正常内皮细胞生长均有一定的抑制作用(其IC50分别为9.5、11.8和14.9μg/mL),且明显抑制B16细胞的体外增殖、迁移、粘附和侵袭。台盼蓝染色法表明低剂量的rhddADAM15并不能导致B16细胞出现坏死,且rhddADAM15并不导致B16细胞出现典型的凋亡峰,而是将细胞阻滞于G2/ M期,并且这种作用呈剂量依赖关系; 3)采用亲和甄别磁珠技术筛选rhddADAM15在B16细胞上的结合蛋白。将rhddADAM15采用蛋白生物素化方法标记生物素,借助生物素-亲和素系统,将生物素化的rhddADAM15固定于亲和素标记的免疫磁珠。从B16细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白,经浓缩富集后,采用双向电泳分离技术分离获得主要的结合蛋白点,然后对这些蛋白点进行电喷雾串联质谱技术(ESI-MS)分析,在蛋白数据库中检索,共鉴定了8个蛋白质,按功能可分为如下三类:(1)临床应用的肿瘤标志物(苹果酸脱氢酶、磷酸甘油醛脱氢酶和谷氨酸脱氢酶);(2)能量代谢相关蛋白(烯醇酶、磷酸丙糖异构酶、原肌球蛋白和血红蛋白);(3)信号转导通路成员(p38MAPK激酶)等。在此基础上通过分子对接软件molsoft

ICM模拟计算获得rhddADAM15与p38激酶相互作用的最佳模式和重要的结合位点; 4)采用噬菌体展示技术筛选与rhddADAM15特异性相互作用的多肽序列。采用噬菌体随机十二肽库对固定有rhddADAM15的亲和磁珠系统进行生物淘洗,获得4条与rhddADAM15特异结合的12肽。将获得的12肽与蛋白质库进行序列比对,发现细胞周期相关蛋白如Cdc25和p53,信号通路相关蛋白/受体,如整合素αvβ3的胞外区,丝裂原活化蛋白激酶p38α等与所获得的4条12肽具有高度同源性; ZD6474分子重量 5)基于上述研究所获得的rhddADAM15在B16细胞上潜在的靶点蛋白,进一步研究rhddADAM15与p38MAPK激酶的体外相互作用,结合rhddADAM15对B16细胞行为的抑制作用,采用蛋白点杂交和激酶活性测定方法分析rhddADAM15在体外与重组p38激酶蛋白的结合情况,同时研究不同剂量rhddADAM15对B16细胞中p38MAPK激酶磷酸化水平的影响,并观察rhddADAM15对p38激酶活性受到部分抑制的B16细胞的增殖和细胞周期抑制作用的变化。发现:(1)rhddADAM15在离体低温条件下能够和重组p38激酶蛋白结合,但rhddADAM15(0-10μg/mL)在体外对p38MAPK激酶活性没有影响;(2)同样剂量的rhddADAM15作用于B16细胞24 h后,细胞中p38MAPK激酶的磷酸化水平提高(被激活);(3)p38激酶的特异性抑制剂SB203580(0.5 mmol/L)预处理B16细胞30 min后,rhddADAM15对细胞增殖的抑制作用减弱(IC50由未经处理的9.5μg/mL增加到11.4μg/mL),对细胞周期的阻滞作用也减弱(G2/M期细胞比率从未经处理的的28.

5倍和1.25倍。应用特异性阻断剂后,钛颗粒诱导的磷酸化p38蛋白水平升高和MMP-2

mRNA水平升高的效应完全被抑制。 结论钛颗粒通过p38丝裂原活化蛋白激酶信号在转录水平诱导成骨细胞MMP-2表达增多。
研究目的： 硼替佐米(万珂,Bortezomib/velcade)是一种二肽硼酸衍生物,是第一个由美国食品药物管理局(FDA)批准上市的蛋白酶体抑制剂,对多发性骨髓瘤的治疗具有较高的总体有效率和完全缓解率。Bortezomib抗瘤谱广,研究表明Bortezomib能诱导急性髓性白血病细胞(AML)发生凋亡,且单药或联合其他化疗药物治疗白血病均具有一定的临床疗效,但其作用机制阐释尚不明确。随着对细胞分化异常在恶性肿瘤发病学和治疗学上的意义认识的日益加深,肿瘤的分化治疗成为当今肿瘤学研究的热点之一。其中,全反式维甲酸(ATRA)诱导分化治疗急性早幼粒白血病(M3, Ivacaftor细胞系 APL)疗法,已列为诱导缓解APL的首选方案之一,但ATRA耐药、严重毒副反应以及复发等仍是当前迫切需要解决的问题。因此,寻找高效低毒的新型分化诱导剂或寻找有效的药物联用方案是解决上述问题的关键途径。 基于此,本研究探讨了Bortezomib单药或联合ATRA在诱导分化治疗AML中的药效及其作用机制。研究内容主要包含了两个部分：(1) Bortezomib对急性髓性白血病细胞的诱导分化作用及其作用机制研究；(2) Bortezomib联合ATRA对急性髓性白血病的协同治疗作用,并探究了维甲酸受体RARα通路在该过程中所发挥的作用。 研究方法： 1)选用人白血病细胞株HL60和U937为主要研究对象,人原代急性髓性白血病细胞为辅助研究对象,考察了Bortezomib对AML细胞的分化诱导作用：采用台盼蓝染色结合血细胞计数板计数观察细胞增殖情况,描绘细胞增殖曲线；应用吉姆萨染色观察细胞形态学改变；采用硝基四氮唑蓝(NBT)测试细胞还原能力；细胞经CD14-FITC或CD11b-PE抗体孵育后采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD14或CD11b表达；应用Western blotting检测MAPK家族蛋白表达及活化水平(p-MEK、p-ERK、p-JNK、p-p38、MEK、JNK2、p38),检测分化启动因子STAT1表达及活性水平(p-STAT1 Try701、STAT1);应用Realtime PCR检测细胞STAT1 mRNA表达水平,并利用CHX抑制蛋白合成研究Bortezomib引起的STAT1蛋白上调的原因；用携带shRNA-STAT1的慢病毒载体转染HL60细胞,通过沉默STAT1研究其在Bortezomib诱导的AML细胞分化中的关系。利用MEK特异性抑制剂PD98059、JNK特异性抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580研究MAPK通路在Bortezomib诱导的AML细胞分化中的关系；采用Annexin Proteasome 抑制剂 V-FITC/PI染色结合流式细胞术测定Bortezomib对AML细胞的凋亡率及初步探讨Bortezomib诱导的细胞分化与凋亡的关系。

2)选用人白血病细胞株HL60和NB4为主要研究对象,人原代急性髓性白血病细胞为辅助研究对象,考察Bortezomib与ATRA对AML细胞的联合治疗作用：采用台盼蓝染色结合血细胞计数板计数观察细胞增殖情况和细胞存活率,描绘细胞增殖曲线；应用吉姆萨染色观察细胞形态学改变；采用硝基四氮唑蓝(NBT)测试细胞还原能力；细胞经CD11b-PE抗体孵育后采用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CDllb表达；采用HL60细胞裸小鼠移植瘤模型考察Bortezomib与ATRA在体内的联合治疗作用；采用免疫组化法检测瘤组织切片C/EBPε的蛋白表达含量；采用TUNEL法考察瘤组织切片中凋亡情况；应用Western blotting检测RARα蛋白表达情况,检测相关分化转录因子的表达(p-STAT1 Try701、STAT1、c-Myc、C/EBPε、p-27),检测MAPK家族蛋白表达情况(p-MEK、p-JNK);应用Realtime PCR检测细胞RARα、STAT1 mRNA表达水平；采用免疫荧光法检测p65和STAT1在细胞内的定位；采用非放射性凝胶迁移法检测STAT1与DNA的结合能力；用慢病毒介导的STAT1 shRNA转染HL60细胞,通过沉默STAT1研究其在Bortezomib与ATRA联用治疗AML中的作用。

研究结果： 第一部分：Bortezomib通过上调MEK/ERK-JNK p46通路活性,激活STAT1从而诱导AML细胞向单核/巨噬系细胞分化。 1) Bortezomib具有诱导人急性髓性白血病细胞向单核/巨噬系细胞分化成熟的能力。 用细胞增殖抑制率、细胞形态学、生化指标、分子标志等指标观察Bortezomib对AML细胞的诱导分化成熟能力。结果显示Bortezomib (5 nM)能诱导人急性髓性白血病(AML)细胞向单核／巨噬系细胞分化。Bortezomib (5 nM)可显著抑制HL60和U937细胞增殖,第3天的抑制率分别为44.6%和60.6%。吉姆萨染色结果表明Bortezomib (5 nM)作用72小时后,HL60细胞和U937细胞分化成为幼稚单核细胞或成熟单核细胞,形态学上表现为胞体变小,核／浆比例下降,细胞核固缩,部分呈半月核,细胞中核仁减少或消失。Bortezomib作用后的HL60和U937对NBT的还原能力增强,并呈现剂量依赖性关系。同时Bortezomib诱导的分化抗原CD11b/CD14的表达也呈现剂量依赖性和时间依赖性关系。 {TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂|TNF alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂| 购买TNF-alpha抑制剂|TNF-alpha抑制剂半抑制浓度|TNF-alpha抑制剂 价格|TNF-alpha抑制剂 花费|TNF-alpha抑制剂溶解度|TNF-alpha抑制剂购买|TNF-alpha抑制剂制造商|TNF-alpha抑制剂研究购买|TNF-alpha抑制剂订单|TNF-alpha抑制剂小白鼠|TNF-alpha抑制剂化学结构|TNF-alpha抑制剂分子量|TNF-alpha抑制剂分子重量|TNF-alpha抑制剂数据表|TNF-alpha抑制剂供应商|TNF-alpha抑制剂体外|TNF-alpha抑制剂细胞系|TNF-alpha抑制剂浓度|TNF-alpha抑制剂核磁共振|TNF-alpha抑制剂体内|TNF-alpha抑制剂临床试验|TNF-alpha抑制剂s|TNF-alpha signaling抑制剂|TNF-alpha pathway抑制剂|TNF-alpha signaling pathway抑制剂|TNF-alpha signaling抑制剂s|TNF alpha pathway抑制剂s|TNF-alpha signaling pathway抑制剂s|TNF-alpha抑制剂 library|TNF-alpha activity inhibition|TNF-alpha activity|TNF-alpha inhibition|TNF-alpha抑制剂s library|TNF alpha抑制剂 libraries|TNF-alpha抑制剂 screening library|TNF-alpha high throughput screening|TNF-alpha抑制剂s high throughput screening|TNF-alpha phosphorylation|TNF-alpha screening|TNF-alpha assay|TNF-alpha animal study| 此外,Bortezomib对人原代急性髓性白血病细胞(M3-AML, APL)增殖也有显著的抑制作用,吉姆萨染色表明Bortezomib具有诱导人原代急性髓性白血病细胞成熟分化的能力。 2) Bortezomib诱导AML细胞分化成熟的机制研究 Western blotting检测结果显示,Bortezomib能激活MAPK通路(包括MEK/ERK级联反应、JNK p46通路和p38通路),p-MEK、p-ERK、p-JNK p46、p-p38均呈现上调趋势,并呈现时间依赖性关系,而其相应的原型蛋白表达水平不变。当给予MEK特异性抑制剂PD98059或JNK特异性抑制剂SP600125时,Bortezomib引起的MEK、ERK或JNK p46的活化被抑制,同时CDl4和CD11b的表达分别从Bortezomib单药组的27.3%和35.8%下降到对照组水平。此外,PD98059同时抑制了Bortezomib引起的JNK p46的活化,但SP600125对MEK活性无影响。当给与p38特异性抑制剂SB203580时,Bortezomib诱导的CD14和CD11B的表达率为42.6%和56.

05),且5-Fu+PHA组裸鼠的瘤体体积显著低于5-Fu组、PHA组(P<0.05)。5-Fu组、PHA组、5-Fu+PHA组3组裸鼠的E-cadherin蛋白OD值显著高于对照组(P<0.05);5-Fu+PHA组裸鼠的E-cadherin蛋白OD值显著高于5-Fu组、PHA组(P<0.05);5-Fu组、PHA组、5-Fu+PHA组3组裸鼠的Ki-67蛋白OD值显著低于对照组(P<0.05);5-Fu+PHA组裸鼠的Ki-67蛋白OD值显著低于5-Fu组、PHA组(P<0.05);5-Fu+PHA组裸鼠的AI值显著高于5-Fu组、PHA组(P<0.05)。[结论]c-Met抑制剂PHA665752联合5-Fu对人结肠癌细胞SW620生长的抑制有协同作用,其机制可能与上调E-cadherin、下调Ki-67表达有关。
目的建立对吉非替尼(gefitinib)耐受的NSCLC细胞株,并观察其药理学特性。方法采用HGF和浓度递增的gefitinib处理HCC827细胞以诱导细胞耐药;MTT法测试细胞活力和药物敏感性;克隆形成和Edu染色验证gefitinib对细胞的生长抑制作用;qRT-PCR和Western

那个 blot实验检测细胞中c-Met表达。结果 HGF的使用可缩短HCC827GR耐药细胞的诱导时间;gefitinib可明显抑制HCC827亲本细胞的细胞活力、克隆形成和细胞增殖,而对HCC827GR细胞的生长抑制作用很弱;HCC827GR细胞c-Met高表达,对c-Met抑制剂高度敏感。结论成功并高效诱导了对gefitinib耐药的HCC827GR细胞,该细胞生长依赖c-Met蛋白活性,对c-Met抑制剂较敏感,可作为c-Met抑制剂的表型筛选模型。
目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对缺氧损伤的人肺微血管内皮细胞(HPMECs)的保护作用,提高肺血管内皮细胞对缺氧的耐受性,增加损伤后的存活率,改善其功能,为防止缺氧导致的肺动脉高压提供实验依据。方法体外培养HPMECs,用物理方法建立缺氧损伤模型。实验分为空白对照组、缺氧损伤组、HGF组、PHA665752组(HGF抑制剂组)。采用免疫荧光法鉴定第7代HPMECs,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,倒置显微镜下计数在不同干扰条件下HPMECs的贴壁细胞数量,Western

blot法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达情况。结果缺氧损伤组细胞贴壁率下降,ICAM-1的表达量明显高于空白对照组(P<0.01);HGF组细胞存活率较缺氧损伤组明显提高(P<0.01),细胞贴壁率较缺氧损伤组明显增加(P<0.01),ICAM-1的表达量明显下降(P<0.01);PHA组细胞存活率较缺氧损伤组和HGF组均有明显差异(P<0.01),细胞贴壁率较缺氧损伤组明显下降(P<0.01),ICAM-1的表达明显上升(P
乳腺癌分子亚型中基底细胞样乳腺癌预后较差,尚无有效的全身治疗措施,研究发现其分子表型有明显的特异性。该文综述近年来基底细胞样乳腺癌的分子病理学研究,分析其特异性的分子学特征,探讨肿瘤发生机制以及潜在的有效治疗靶点。
[目的]探讨肝细胞生长因子受体(c-Met)可溶性形式(sMet)在鼻咽癌患者血浆中的水平变化及临床意义。[方法]收集84例鼻咽癌患者和84名正常人的血浆标本,ELISA检测血浆中sMet水平,并以ROC曲线评价sMet水平对鼻咽癌发生风险的临床预测价值。[结果]鼻咽癌Ⅰ～Ⅱ期患者血浆中sMet的水平[(293.6±15.8)ng/ml]及鼻咽癌Ⅲ～Ⅳ期患者血浆中sMet的水平[(343.8±12.6)ng/ml]分别为正常对照组表达水平[(224.2±13.5)ng/ml]的1.31、1.53倍(P<0.01)。ROC曲线分析显示,血浆sMet水平和发生鼻咽癌的风险存在密切相关性,具有明显的临床诊断价值。[结论]sMet可能是鼻咽癌早期诊断的一个潜在的血浆标志物。
目的探讨Ezrin、c-Met和CD44v6在胃癌中的表达情况,分析其相关性以及与胃癌生物学特性的关系。方法采用免疫组织化学方法检测Ezrin、c-Met和CD44v6在130例胃癌组织中的表达情况。结果

Selleckchem LBH589 还有 130例胃癌组织中Ezrin阳性表达率为61.0%;c-Met阳性表达率为58.0%;CD44v6阳性表达率为53.0%。Ezrin和CD44v6的表达情况与临床分期、淋巴结转移以及TNM分期有关(P<0.05);c-Met的表达与浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期有关(P<0.05)。胃癌组织中Ezrin分别与c-Met、CD44v6表达水平呈正相关,且c-Met与CD44v6表达呈正相关(P
目的探讨重组粒细胞集落刺激因子(G-SCF)联合携带肝细胞生长因子(HGF)基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对野百合碱诱导的实验性肺动脉高压(PAH)大鼠的治疗效果。方法取3周龄雄性SD大鼠骨髓,经贴壁筛选法体外培养并纯化MSCs,利用腺病毒(Ad)介导的基因转染方法,将HGF基因导入MSCs。将50只SD大鼠随机分为5组(每组10只):PAH组,采用腹腔注射野百合碱(60mg/kg)复制PAH模型后,经颈内静脉移植1ml低糖伊戈尔培养基(L-DMEM);MSCs组,复制PAH模型后,移植5×106/L的空腺病毒载体转染的MSCs细胞悬液1ml;G-CSF组,经腹腔注射G-SCF[100μg/(kg.d)],连续5d;HGF组,移植5×106/L携带HGF基因的MSCs细胞悬液1ml;HGF+G-CSF组,移植5×106/L携带HGF基因的MSCs细胞悬液1ml并且经腹腔注射G-SCF[100μg/(kg.d),连续5d。21d后,观察各组血流动力学指标、右心室(RV)与左心室(LV)重量比值(RV/LV比值)、血管密度及血浆中内皮素-1(ET-1)的表达情况。结果 PAH大鼠治疗21d后,实验各组间全身动脉血压无明显差异;HGF+G-SCF组及HGF组中平均肺动脉压较其他各组显著下降(P0.

78%、104.08%、108.97%,亦即在formalin注射后5分钟出现了P-p38的表达峰值,随后恢复正常,但又在formalin注射后1天再次出现P-p38的表达增加之后恢复正常。 哪里 在此基础上,我们又分别观察了外周或鞘内给予第一组代谢型谷氨酸受体的拮抗剂CPCCOEt或MPEP之后P-p38的表达情况。在formalin注射前15分钟分别在外周或鞘内给予CPCCOEt(100 nmol)、MPEP(50 nmol)或者HEPES(100mM,pH7.4)作为对照,之后在formalin注射后5分钟和1天,取出动物腰膨大部位进行Western

blot检测。结果发现,在外周或鞘内给予CPCCOEt或MPEP之后,可以抑制formalin注射后5分钟时的P-p38的表达增加。而对于formalin注射后1天的P-p38增加,只有在外周给予CPCCOEt时表现出抑制作用。 本实验结果提示:1.formalin外周注射可以引起脊髓p38MAPK的活化,表现为磷酸化的p38MAPK表达增多,提示p38MAPK可能是介导formalin痛反应的主要信号通路;2.外周应用第一组代谢型谷氨酸受体拮抗剂可以抑制脊髓p38MAPK的磷酸化;3.脊髓应用第一组代谢型谷氨酸受体拮抗剂可以抑制脊髓p38MAPK的磷酸化;4.以上结果提示提示第一组代谢型谷氨酸受体(包括外周和脊髓)通过活化脊髓p38MAPK信号通路在formalin引起的慢性痛中发挥重要作用。据我们掌握的文献,这是首次报道第一组代谢型谷氨酸受体通过脊髓(可能是小胶质细胞)p38MAPK在细胞水平介导其功能反应。 结论:1.formalin外周注射可以引起长时程痛敏(持续时间在10天以上),同时伴有脊髓小胶质细胞的活化;2.外周第一组代谢型谷氨酸受体的激活参与了长时程痛敏的发生和脊髓小胶质细胞的活化;3.脊髓第一组代谢型谷氨酸受体的激活参与了formalin诱导的长时程痛敏的发生和脊髓小胶质细胞的活化;4、外周和脊髓的第一组代谢型谷氨酸受体通过脊髓(可能是小胶质细胞)的p38MAPK通路介导上述作用;5、结合我们以往观察到的第一组代谢型谷氨酸受体在formalin急性痛反应中的作用结果提示,第一组代谢型谷氨酸受体(包括外周和脊髓)在痛信号产生和传递及由此引起的痛反应(包括急性痛反应和慢性持续性痛反应)中发挥重要作用。
β_2肾上腺素受体(β_2-AR)激动剂用于哮喘的对症治疗已有60多年的历史。SPFF[2-(4-amino-3-chloro-5-trifluomethyl-phenyl)-2-tert-butylamino-ethanol 很少 hydro-chloride]是沈阳药科大学制药工程学院合成开发的新型β_2肾上腺素受体激动剂,前期研究工作已证实它具有强大的支气管扩张作用和相对较高的β_2-AR选择性,同时还具有作用时间较长等特点,目前已处于Ⅱ期临床试验阶段。SPFF的结构中含有一个手性碳原子,因而存在一对对映异构体。由于具有不同立体构象的对映异构体在生物活性、毒性、药物代谢动力学等方面常有很大差异,因此,我们比较研究了SPFF的对映异构体((-)-SPFF和(+)-SPFF)的抗哮喘的作用特点,并初步探讨了它们的作用机制。

首先用离体实验考察了(±)-SPFF及其对映异构体对豚鼠气管平滑肌的扩张作用。结果显示,(±)-SPFF及其对映异构体都能够浓度依赖性的松弛静息张力和被气管致痉剂(组胺和乙酰胆碱)收缩的豚鼠气管条,(-)-SPFF的作用强度强于(±)-SPFF和(+)-SPFF。但是,单一对映体和(±)-SPFF松弛离体豚鼠气管平滑肌的最大效应彼此接近,表明三者的内在活性是相似的。同时我们通过对选择性β_2受体阻断剂ICI-118551拮抗(±)-SPFF、(-)-SPFF和(+)-SPFF作用的分析,还证实了SPFF的单一对映体扩张离体气管平滑肌的作用都是通过B_2受体介导的。离体豚鼠肺支气管灌流实验结果显示了(-)-SPFF在扩张整个气道作用中的显著优势,(-)-SPFF与(+)-SPFF的作用强度差别为23.2倍。此外,(+)-SPFF对(-)-SPFF的影响实验结果显示,(+)-SPFF与豚鼠气管条孵育20分钟对(-)-SPFF松弛静息张力气管条的量效曲线几乎没有影响。

ABT-263临床试验 其次,通过整体动物的不同模型,考察了(±)-SPFF及其对映异构体扩张在体气管平滑肌的作用。结果显示,灌胃给药时,(-)-SPFF(0.0625,0.25 and 1 mg·kg~(-1))对组胺和乙酰胆碱混合喷雾引起豚鼠窒息的保护作用与同剂量(±)-SPFF的作用相似:经十二指肠内给药时,(-)-SPFF对组胺诱导麻醉豚鼠肺溢流量增加的抑制作用分别强于(±)-SPFF和(+)-SPFF1.6倍和6.3倍:在肺机械功能实验中,单一对映体(-)-SPFF和(+)-SPFF与(±)-SPFF对肺顺应性的降低具有同等作用强度的抑制作用,(-)-SPFF抑制肺阻力升高作用强于(+)-SPFF约3.5倍。此外,SPFF、(-)-SPFF和(+)-SPFF(0.01、0.1和1μM)对致敏大鼠肺组织接触过敏原时释放组胺具有相似的抑制作用,在不影响小鼠气道粘液分泌的情况下,(-)-SPFF(0.04、0.10mg.kg~(-1))和(±)-SPFF(0.10、0.25 mg.kg~(-1))明显促进家鸽气道纤毛的转运功能,而(+)-SPFF(0.04、0.10和0.25 mg.kg~(-1))对家鸽气道纤毛的转运没有促进作用。静脉注射和口服(-)-SPFF对小鼠的LD_(50)(95%confidence limits)分别为55.7(51.6～59.8)和468.3(393.0～543.6)mg.kg~(-1),而静脉注射和口服(+)-SPFF对小鼠的LD_(50)分别为36.2(33.4～39.2)和297.5(257.5～343.7)mg.kg~(-1),提示(-)-SPFF的毒性低于(+)-SPFF。 此外,我们从激动剂在细胞外与受体的结合特征及在细胞内产生的效应([Ca~(2+)]_i)两方面初步探讨了(±)-SPFF及其对映异构体的作用机制。分别以豚鼠肺和心房组织作为β_2-AR和β_1-AR的来源,以碘标左旋吲哚洛尔((-)[~(125)Ⅰ]pindolol,IPIN)作为标记性配基的放射配基结合实验结果显示,(-)-SPFF对β_2-AR的亲和力分别高于(±)-SPFF 6倍和(+)-SPFF 164倍,这可能是(-)-SPFF扩张气道作用强度较高的原因之一。(-)-SPFF、(±)-SPFF和(+)-SPFF的选择指数(K_(i(atri))/K_(i(lung))分别为24.72、7.43和2.

05）。（6）经台盼蓝染色，5组细胞活力分别为97.2%、96.9%、96.3%、96.5%和95.8%，细胞活力无明显变化。

很少 结论：（1）iRGD肽对SPIO标记胰腺癌细胞具有影响，在适宜浓度范围内可提高SPIO标记效果，T2WI- FRFSE为较好显像序列；SPIO标记浓度与iRGD肽浓度以12.6μg/ml和1μg/ml为最佳组合。（2）不同浓度SPIO系列，iRGD肽适宜浓度或浓度范围：SPIO浓度为12.6μg/ml，iRGD肽适宜浓度范围为0.25μg/ml-1.25μg/ml；SPIO浓度为14.7μg/ml，iRGD肽适宜浓度为0.25μg/ml。
目的： 牙周病是口腔中两大主要疾病类型之一,也是人类最古老最普遍的疾病之一,在当今世界范围内患病率依然很高,在我国牙周病的患病率及其危害远高于龋病。一般认为,因牙周炎拔牙占拔牙总数的30%-44%。对于牙周病的病因学研究是个古老而复杂的领域,近一个多世纪以来,世界各国的学者对此进行了大量而深入的研究,牙周炎发生的根本机制至今仍未完全明确。有研究证实咬合创伤参与了牙周炎的发生与发展,并且对牙周组织的改建产生了直接的影响。适当的咬合力可以使牙周膜中主要的感受性和效应性细胞——牙周膜成纤维细胞发生增殖、分化和凋亡,从而参与牙周组织的改建过程。本次实验拟在成功构建人牙周膜成纤维细胞体外培养—力学刺激模型的基础上,通过细胞计数试剂——8和RT-PCR等细胞检测技术,从分子和基因水平探讨周期性张应力对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响,初步阐述p38MAPK信号通路在此影响过程中的作用,明确p38MAPK信号通路、周期性张应力和成纤维细胞增殖三者之间的关系,为进一步诠释咬合创伤在牙周炎发病过程中的作用提供新的思路,为探寻咬合创伤的干预治疗提供理论依据。 方法： 本实验以体外培养的人牙周膜成纤维细胞为研究对象,构建人牙周膜成纤维细胞体外培养—力学刺激模型,利用多通道细胞牵张应力加载系统,以静态组为对照,实验组分别加以1h,6h,12h,24h的张应力刺激,频率为0.1Hz,所加力值以加力板底部硅胶薄膜拉伸的形变率表示,形变率越大,则对细胞施加的张应力越大,本次实验的细胞形变率为10%。以细胞计数试剂—8检测细胞的增殖情况,采用RT-PCR技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达；同时设计加力+p38MAPK特异性抑制剂组(Oh,12h),加力前对细胞加以p38MAPK抑制剂SB203580,再对细胞施以张应力后,再次检测细胞增殖情况和PCNA的表达。通过SPSS17.0统计软件对实验所得数据进行统计分析。 一般 结果： 1.体外培养稳定的人牙周膜成纤维细胞,成功地构建了人牙周膜成纤维细胞体外培养—力学刺激模型。 2.在频率为0.1Hz,形变率为10%的条件下,同对照组比较,加力1h时细胞增殖减少,6h时细胞增殖开始上升,12h细胞增值达到高峰,24h细胞增殖受到抑制；加入抑制剂SB203580能够抑制细胞增殖和PCNA的表达。

结论： 1.成功的构建了人牙周膜成纤维细胞体外培养—力学刺激模型。 2.在应力加载条件下,在一定时间内可促进成纤维细胞的增殖,加力时间过长会导致细胞增殖受到抑制。 3. p38MAP信号通路参与了周期性张应力介导的人牙周膜成纤维细胞增殖的过程。 4.除p38MAPK信号通路外,亦有其他信号通路参与了周期性张应力介导的成纤维细胞增殖的过程,可能与p38MAPK通路之间存在交叉作用。
论文第一部分探讨慢性粒细胞白血病（CML）核因子NF-E2相关因子2 (Nrf2)基因表达与临床特点的关系及与硫氧还蛋白还原酶（TrxR）表达的相关性。应用实时荧光定量PCR检测30例CML患者（慢性期20例，加速期3例，急变期7例）骨髓细胞及CML细胞株K562与10例正常对照骨髓细胞Nrf2及TrxR mRNA的表达。结果表明，初发CML患者骨髓细胞Nrf2 mRNA表达升高，经治疗后其表达下降，可作为判断病情进展的分子标记物；Nrf2 mRNA水平与TrxR的表达有相关性。 第二部分，进一步研究Nrf2 mRNA水平与TrxR的表达的相关性。根据siRNA序列设计原则，设计并合成四条针对Nrf2序列特异性的小分子干扰RNA(siRNA)及一条阴性对照siRNA，并连接到慢病毒载体上。用构建的Nrf2-RNAi-LV转染K562细胞，通过实时荧光定量PCR检测得到Nrf2

mRNA明显低表达的细胞株K562-C3，且其TrxR表达水平也随之降低。这些结果表明Nrf2可通过Nrf2-ARE信号通路影响TrxR的表达，从而对细胞凋亡发挥作用。本结果不仅为Nrf2-ARE信号通路与白血病发生的研究奠定了基础，也可能对CML的靶向治疗具有指导意义。
目的： 有 氧化应激降低精液质量,是已知男性不育症的主要病因。本课题拟通过(1)观察氧化应激作用下Claudinll转录水平变化；(2)观察射线致睾丸氧化应激损伤后Claudin3、Claudinll表达量变化及其在生精功能恢复过程中与精子发生的关联性,以探讨氧化应激损伤睾丸精子发生中支持细胞紧密连接复合体功能变化；明确支持细胞紧密连接复合体于受损的睾丸生精功能恢复过程中所起的作用。 方法： (1)48只雄性昆明小鼠随机分配至A、B、C、D4组,每组12只,A组空白对照,B、C及D三组分别以2Gy、6Gy及10Gy剂量60Co-Υ射线局部照射实验动物下腹部一次,于6周后处死,测定实验小鼠身体及双睾丸重量；HE染色观察睾丸组织学变化；酶联免疫法检测血清FSH水平；Real time PCR监测睾丸组织内Claudinll转录水平变化。 (2)42只昆明雄性小鼠,随机分配为：空白对照A组,受2Gy、6Gy、10Gy60CoΥ射线单剂量射线下腹局部照射的B、C、D组,及受6Gy剂量照射后应用1、2及4μg/d剂量E2干预4周的E、F、G组。于照射后6周,收集睾丸,称重,行HE染色,计算各组睾丸曲细精管分化指数(TDI),应用RT-qPCR检测各组InhibinβB、Claudin3、Claudinll mRNA变化, Western Blot检测各组Claudinll蛋白表达。 结果： (1)不同剂量射线致睾丸氧化应激损伤后睾丸重量下降(P<0.05),以C、D组更为明显(P<0.01)；与A组相比,受射线照射三组TDI下降明显(P0.013；t=-2.256,P>0.013)。Claudin-3、Clauindin-11表达与睾丸生精功能呈现负相关关系(rs=-0.

05)。结论:本研究中提供的实验证据表明,ZFP580可以作为缺氧环境下的新型调节分子。我们证实,ZFP580通过抑制线粒体凋亡途径在TGF-β1介导的抗化学缺氧诱导的细胞损伤中发挥重要的抗凋亡保护作用。
目的:调控血管平滑肌(VSMC)表型转换是防治PCI术后再狭窄的新策略,micro RNA作为VSMC表型转换的调节因子,可通过转录后水平调控下游靶基因的的表达从而影响VSMC的表型转换。本组首先克隆的C2H2型锌指核转录因子ZFP580可调控内皮细胞及VSMC的增殖及迁移而影响血管重塑。本组新近实验证明:micro

RNA-206既可靶向调控ZFP580的表达,又可促进VSMC从收缩型向合成型转换。本实验拟采用micro RNA-up与micro RNA-down技术,观察micro RNA-206表达水平的变化对大鼠VSMC分化功能的影响,并验证其可能的分子机制。方法:提取分离大鼠VSMC,通过形态学观察及免疫组化法进行鉴定。生物信息学分析ZFP580与mi R-206的结合位点。利用TGF-β(根据文献参考选取2ng/ml)对大鼠VSMC进行不同时间点刺激,对照组选用等量的DMEM。Realtime-PCR测定mi R-206的表达水平;Western-blot检测ZFP580、SMa-actin、SM22a、Smad2/3、phospho-Smad2/3的表达水平;使用慢病毒过表达或低表达mi R-206、慢病毒过表达或低表达ZFP580和应用SB431542抑制剂后检测相关指标;荧光素酶报告实验(Luciferase)检测mi R-206与ZFP580 3‘UTR的结合作用。结果:(1)在大鼠VSMC加入适宜的TGF-β(根据文献参考选取2ng/ml)进行预处理,分别刺激大鼠VSMC 6h、12h、24h、48h,对照组中加入等量的DMEM。利用Realtime-PCR测定mi R-206的表达水平,结果发现在12h的时候mi www.selleckchem.cn/products/cilengitide-emd-121974-nsc-707544.html R-206的水平降至最低点,与对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。Western-blot检测ZFP580的表达水平,结果显示同样在12h时ZFP580的表达水平达到最高,与对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。与此同时,Western-blot检测SMa-actin、SM22a的表达水平结果显示:SMa-actin、SM22a的表达较对照组相比均不同程度的降低(P<0.05)。(7)过表达或低表达ZFP580慢病毒感染大鼠VSMC72h后。Western-blot检测ZFP580的表达水平,结果显示:高表达ZFP580感染组与对照组相比,SMa-actin与SM22a的表达水平上调(P<0.05),低表达ZFP580感染组与对照组相比,SMa-actin、SM22a的表达水平显著上升(P
目的TGFβ1即转化生长因子beta1是一种小分子蛋白因子,有报道显示TGFβ1在炎症局部组织中分泌量显著增加,并在局部组织的伤口愈合以及促使纤维化过程中扮演着重要角色。然而,TGFβ1在外周伤害性感觉传递过程中所起的作用尚不太清楚。本研究旨在探讨TGFβ1对外周初级感觉神经元兴奋性的急性作用及其在慢性胰腺炎大鼠的痛觉过敏中扮演的角色。方法1.在180-200

g雄性SD大鼠胰管内注射三硝基苯磺酸(TNBS)诱导慢性胰腺炎(CP)模型。2.胰腺壁注射荧光素(Dil)逆行标记胰腺特异性背根神经节(DRG)神经元。运用全细胞膜片钳方法研究TGFβ1对胰腺相关DRG神经元膜电位和兴奋性的作用。3.运用钙成像方法研究TGFβ1对胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度的影响。4.运用Western 寻找更多 不 Blotting检测TGFβ1及其受体在大鼠胰腺和胰腺相关节段DRG(T9-T13)中的表达水平。5.运用Von frey filament(VFF)评测正常大鼠或CP大鼠在注射药物前后痛行为反应。结果1.全细胞膜片钳记录显示,灌流TGFβ1引起胰腺特异性DRG神经元细胞膜去极化并进一步诱发动作电位,升高神经元兴奋性;与对照组比较,灌流TGFβ1使CP大鼠胰腺相关DRG神经元去极化及放电更加显著。2.钙成像结果显示,灌流TGFβ1可使正常大鼠胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度上升;与对照组比较,灌流TGFβ1使CP大鼠胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度上升更加显著。3.与对照组比较,CP大鼠胰腺中TGFβ1及其前体表达水平显著升高,胰腺相关DRG中的TGFβ1及其前体,TGFβI型和II型受体表达水平显著升高。4.鞘内注射TGFβ1诱发正常大鼠产生腹部痛觉过敏;鞘内注射TGFβ受体拮抗剂SB431542明显缓解CP大鼠的痛觉过敏。结论我们的研究提示TGFβ1对初级感觉神经元有急性的兴奋作用,在慢性胰腺炎大鼠外周神经系统中激活的TGFβ1/TGFβ受体信号通路参与介导慢性胰腺炎的痛觉过敏。这些结果以及后续的研究将有助于发现慢性胰腺炎疼痛治疗的新靶标。
目的:前期研究证实,补肾法、疏肝法具有提高体外受精-胚胎移植(in

vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)患者临床妊娠率、改善妊娠结局、提高卵母细胞质量的作用,本研究拟通过观察补肾法、疏肝法对IVF-ET患者体外培养卵巢壁颗粒细胞ACTA及其信号通路的调控作用,以探讨两法促进卵泡发育、提高卵母细胞质量作用机制及其途经的异同。方法:1含药血清制备补肾调经方、逍遥散方含药血清:选取年龄在20-30岁,身体健康,月经规律,B超显示有成熟卵泡,且无卵巢、子宫器质性疾病的女性志愿者10名,分别服用补肾调经方和逍遥散方。补肾调经方、逍遥散方服用方法是每日1剂,300ml,早晚分服。补肾调经方和逍遥散方连续服药3天,第4天清晨空腹服用全天剂量药物(服药前禁食12h),于末次服药1h后静脉取血5ml,室温静置2h,3000r/min离心10min,取上清,56℃水浴30 min灭活补体,0.

Morris水迷宫实验结果：与空白对照组比较,10%CIH组、10%CH组大鼠在第4、6、8周逃避潜伏期时间延长、跨越目标象限时间缩短；且第六周时变化明显。5%CIH组从第2周开始,随低氧时间延长动物逃避潜伏期时间明显延长、跨越目标象限时间明显缩短,且这种变化比10%CIH组更加显著,与10%CH组比较,10%CIH组动物第6、8周、5%CIH组大鼠第2、4、6、8周避潜伏期时间明显延长、跨越目标象限时间显著缩短。 selleck 2.形态学检测结果：①光镜：对照组大鼠海马区神经元结构完整,排列整齐,染色均匀。低氧组海马区出现变性坏死神经元,表现为神经细胞胞体收缩呈三角形,胞浆嗜色性减弱,核皱缩浓染,核溶解及空泡样变。与对照组比较,10%CH组4、6、8周海马CA1区存活神经细胞密度均降低；间歇低氧组大鼠第2、4、6、8周海马CA1区存活神经细胞密度均显著降低；5%CIH组大鼠10%CIH组更明显；10%CH和10%CIH组大鼠存活神经细胞密度降低第六周时变化明显。②电镜：空白对照组动物海马神经元核大圆,核仁清晰,核质均匀,核膜光滑边缘清晰,细胞器丰富完整。低氧组可见神经元细胞水肿、核染色质浓缩聚集、核仁及细胞器消失、核膜断裂；粗面内质网排列紊乱及脱颗粒；线粒体肿胀、空泡变性及嵴消失；突触结构分界不清；轴索排列紊乱、断裂。

3.磷酸化p38MAPK免疫组化结果：与对照组比较,10%CH.10%CIH、5%CIH组大鼠在第2、4、6、8周海马CA1区磷酸化p38MAPK免疫反应性均明显增高,于第6周达高峰；与10%CH组比较,10%CIH组和5%CIH组第2、4、6、8周海马CA1区磷酸化p38MAPK免疫反应性显著增高(P<0.05)、且5%CIH组较10%CIH组增高更明显(P0.05)。三组低氧组大鼠海马区磷酸化p38MAPK表达第2、4、6、8周随时间延长明显增高,于第6周达高峰(P<0.05)。与10%CH组比较,10%CIH组和5%CIH组第2、4、6、8周海马CA1区磷酸化p38MAPK表达显著增高(P<0.05)、且5%CIH组较10%CIH组增高更明显(P
卵巢癌是女性常见肿瘤，位居女性肿瘤发病率第五位和妇科肿瘤致死率第一位。手术和基于铂类药物的联合化疗是其常规治疗手段，但是因其近70%复发和耐药的形成，致使其五年期生存率不高于40%。所以对卵巢癌耐药机制的深入研究尤为必要。 研究显示，卵巢癌耐药的产生与抗凋亡的Bcl-1家族成员（如Bcl-2、Mcl-1和Bcl-XL等）高表达紧密相关，这使得抗凋亡和促凋亡相之间的平衡发生倾斜，促使细胞逃逸凋亡而产生耐药。近年来将靶向于Bcl-2家族抗凋亡蛋白的特异性抑制剂应用于肿瘤治疗，相关基础研究不断增加。现已开发了一系列模拟促凋亡成员BH3结构域的小分子抑制剂（如ABT-737/263、Obatoclax和AT-101等）。新型BH3模拟物S1能够同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1和Bcl-XL，并具有较高的亲合力。已有报道显示S1能够诱导胶质瘤细胞U251、白血病细胞K562、肝癌细胞SMMC-7721、肺癌细胞SCLC、卵巢癌细胞SKOV3和SKOV3/DDP等多种肿瘤细胞系发生凋亡。

GDC-0449研究购买 本研究室已有研究显示S1在胶质瘤细胞及卵巢癌细胞中，经由线粒体途径介导了凋亡的发生，同时也发生了内质网应激（Endoplasmic reticulum stress，ERS）途径诱导的凋亡，内质网凋亡蛋白Caspase-4信号级联及(c-Jun N-terminalkinase, JNK)途径被激活。ERS触发的未折叠蛋白反应（Unfolded ProteinResponse，UPR）既可能作为适应性途径缓解细胞所面临的应激状态，也可能因严重应激而促使细胞发生凋亡。目前认为，UPR信号途径可以诱导细胞自噬而发挥抵抗凋亡的效应，而Bcl-2家族蛋白与UPR、自噬和凋亡等信号转导途径密切相关。因此，靶向抗凋亡蛋白Bcl-2的BH3模拟物则通过直接或间接影响这些信号转导途径而决定细胞的命运。研究结果显示UPR信号途径的主要通路之一(inositol-requiring

kinase1, IRE1)可激活JNK，JNK既能激活凋亡信号，又能介导自噬的活化，还能够调节活性氧（Reactive oxygen species，ROS）的生成，对细胞命运的决定至关重要。然而，已有研究多采用JNK广谱抑制剂，无法区别与验证JNK亚型的作用，最近发现的新的特异性抑制剂等为研究JNK亚型的功能提供了可能。 购买Talazoparib 本研究中，我们采用BH3模拟物S1处理人卵巢癌耐药细胞，以高通量方式对UPR信号通路相关84个基因进行筛选，发现JNK3持续高表达，并通过应用特异性抑制剂Ⅻ和siRNA对JNK3表达在人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP中的作用及机制进行了探讨。 方法 (1) MTT法检测BH3模拟物S1处置卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP存活率。 (2) S1处置卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP，采用PCR array法检测UPR信号通路84种基因变化，筛选差异表达基因；qPCR确认JNK1、JNK2和JNK3表达基因变化；Western Blot分析JNK3蛋白表达变化。 (3)根据JNK3的基因序列（GenBank：NM_002753）以及RNAi设计原理，构建三条寡核苷酸序列沉默其表达，命名为Si1，Si2和Si3，并通过荧光标签、RT-PCR、Western blot等技术进行验证，筛选有效沉默序列。 (4)利用JNK3特异性抑制剂Ⅻ和siRNA进行干预，光镜下观察细胞形态变化，MTT法检测细胞存活率；TUNEL染色法检测凋亡变化。 (5)利用JNK3特异性抑制剂Ⅻ和siRNA进行干预，Western blot分析Bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白的表达；Western blot分析JNK下游信号分子c-Jun、p-c-Jun、p53、Noxa和Bax蛋白表达变化；JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电势的变化；同时，Western blot分析细胞内质网应激相关蛋白Grp78和CHOP的表达。 (6) DCFH-DA染色观察人卵巢癌耐药细胞ROS水平；抗氧化剂NAC预处理细胞后合用S1和抑制剂Ⅻ，MTT法检测细胞存活率。 (7) AO及Lyso-Tracker Red染色检测胞内酸性结构累积情况；Western blot检测LC3-Ⅱ及p62蛋白的表达；自噬抑制剂氯喹与S1合用检测存活率。 结果 1.

7细胞进行预处理，结果显示TLR2抗体可以显著抑制rTB10.4诱导RAW264.7细胞表达TNF-、IL-6和IL-12p40，而TLR4抗体无此抑制作用。表明rTB10.4诱导RAW264.7细胞产生TNF、IL-6和IL-12p40可能是依赖TLR2通路传递信号。 采用Western Blot和量化流式细胞分析仪检测rTB10.4诱导细胞因子的表达是否与MAPK信号通路的激活有关，结果显示，rTB10.4能够诱导RAW264.7细胞激活p38和ERK1/2信号通路，并且诱导RAW264.7细胞发生明显的p38及ERK核转位；但rTB10.4不能激活RAW264.7细胞中JNK信号通路磷酸化。通过使用TLR-2及TLR-4抗体预处理RAW264.7细胞，评估rTB10.4激活RAW264.7细胞中p38和ERK1/2磷酸化是否通过TLR2和TLR4信号通路，结果显示TLR-2抗体显著降低rTB10.4诱导的p38和ERK1/2磷酸化；p38激酶的特异性抑制剂SB203580和MAPK激酶1/2特异性抑制剂U0126能够显著抑制rTB10.4诱导RAW264.7细胞分泌TNF-、IL-6和IL-12p40细胞因子。

进一步采用NF-κB荧光素酶报告系统、Western Blot和量化流式分析仪检测rTB10.4诱导细胞因子的表达是否依赖NF-κB信号通路，结果表明rTB10.4在刺激RAW264.7细胞后12h和24h能显著激活NF-κB，并通过诱导IκB的降解激活p65的磷酸化，诱导RAW264.7细胞中NF-κBp65发生明显核转位。NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082作用结果表明：rTB10.4蛋白刺激RAW264.7细胞分泌表达TNF-、IL-12p40和IL-6依赖NF-κB信号通路。

所以 Fludarabine分子重量 综上所述，本研究首次研究发现了rTB10.4能够上调RAW264.7细胞TNF-、IL-6和IL-12p40的表达，并且这一过程是通过TLR2受体介导p38MAPK、ERK1/2和NF-κB信号通路实现。该研究为牛结核病感染与诊断提供了分子基础，并且对理解牛分枝杆菌与宿主细胞的相互作用及分子机制提供新的研究思路。
黑灵芝多糖PSG-1是从黑灵芝子实体中提取的多糖组分，主要由木糖、岩藻糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖等组成。大量研究表明，该多糖具有抗氧化、提高免疫力、心肌保护、抗糖尿病、抗肿瘤、抗衰老等作用，但其抗肿瘤作用机制方面的研究甚少，本研究旨在探讨PSG-1的抗肿瘤作用及其分子机制，从而为其开发为一种新型药品或功能食品提供有价值的理论依据。 本研究分别从体外和体内两种途径研究PSG-1的抗肿瘤作用及机制。本课题在现代分子生物学理论及技术的指导下，应用流式细胞术(FlowCytometry, FCM)、蛋白印迹(Western Blot)、酶联免疫(Enzyme LinkedImmunosorbent Assay, ELISA)及逆转录-聚合酶链式反应(ReverseTranscription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)等技术，分别从整体、细胞、分子、基因水平，将PSG-1对荷瘤小鼠的抑制肿瘤生长作用及作用通路进行了深入研究。通过整体和离体两种途径进行研究和探讨，具体研究如下： 在体外研究中，将不同浓度的PSG-1分别直接作用于S180、CT26肿瘤细胞，通过MTT法测定PSG-1对上述两种肿瘤细胞的增殖抑制作用，结果发现：在体外，各剂量浓度的PSG-1对S180、CT26细胞的增殖抑制率无显著性差异；这说明PSG-1对S180和CT26肿瘤细胞无直接抑制增殖作用，同时也无细胞毒性。另外，用PSG-1预处理小鼠腹腔巨噬细胞，实验结果证明：腹腔巨噬细胞吞噬杀伤S180和CT26肿瘤细胞的能力与PSG-1浓度呈剂量依赖性增强。说明PSG-1能有效地活化腹腔巨噬细胞，提高其吞噬杀伤能力。

selleck激酶抑制剂 在体内实验中，首先分别采用S180、CT26肿瘤细胞株建立荷瘤小鼠模型，一周左右后，接种处长出80~90mm3大小的肿瘤说明造模成功。然后将小鼠进行随机分组，每天灌胃或注射给药一次。2周后，将部分小鼠首先进行眼眶取血，然后处死，分离出肿瘤和各组织器官；其余部分小鼠用于提取腹腔巨噬细胞和脾细胞实验，测定细胞相应的功能活性。结果显示：与对照组相比，PSG-1组小鼠肿瘤抑制率随剂量升高逐渐增加，脾指数、胸腺指数也显著增加，差异性显著(P
肿瘤的发生发展是细胞增殖、生长、分化、代谢等调节失控的结果。细胞凋亡是机体在生长、发育和受外界刺激时，清除多余、衰老和受损伤的细胞以保持机体内平衡的一种自我调节机制，受一系列基因激活、蛋白表达的调控，因此诱导细胞凋亡在预防和治疗恶性肿瘤中发挥着重要作用。此外，癌细胞极易浸润、迁移，形成转移瘤，因此癌症的治疗除了探索开发能够抑制癌细胞增长，有效杀死癌细胞的因子外，限制癌细胞转移侵袭也十分重要。 地肤子皂苷来源于藜科一年生草本植物地肤子Kochia scoparia (L.

1和小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中,caspase-3作为上游因子调控caspase-6的活化。(7)问号钩体诱导J774A.1细胞内JNK和p38MAPK发生磷酸化激活。(8)JNK和p38MAPK抑制剂对问号钩体诱导的J774A.1细胞凋亡、caspase-3、-8的活化及FADD蛋白表达上调均具有抑制作用。 结论:(1)问号钩体对不同类型宿主细胞具有不同的死亡诱导效应,具体表现为问号钩体能够以浓度和时间依赖方式诱导小鼠单核-巨噬样细胞(J774A.1)和小鼠原代巨噬细胞发生凋亡;问号钩体对人脐静脉内皮细胞(EVC304和HUV-EC-C)无凋亡或坏死诱导作用;问号钩体诱导人肺泡上皮细胞(A549)发生坏死。(2)问号钩体可通过FADD-caspase-8凋亡传导途径激活下游效应caspase-3、-6,并进而诱导小鼠单核-巨噬样细胞(J774A.1)和小鼠原代巨噬细胞凋亡,线粒体细胞色素c-caspase-9途径可能不参与此凋亡诱导过程。(3)问号钩体感染可导致J774A.1细胞内JNK和p38MAPK信号传导系统的激活,JNK和p38MAPK通过调控caspase-3、-8的活化及FADD蛋白的表达上调参与了问号钩体诱导的J774A.1细胞凋亡。这些结果为理解问号钩体诱导凋亡的细胞和分子机制提供了新的思路。
第一部分mTORCl在造血干细胞体外扩增过程中的活化规律

已经 目的：mTORCl掌控了细胞多种生命过程,研究表明过高的mTORCl活性会破坏细胞内坏境平衡。本研究的目的是探讨造血干细胞在体外扩增过程中,胞内的mTORCl活性的变化规律。 方法：分选小鼠骨髓Lin-Sca-1+细胞,应用无血清培养基添加细胞因子的培养体系体外扩增分选的干祖细胞,应用Rapamycin作为mTORCl抑制剂,以DMSO作为对照。扩增10天,在第6天加入DMSO以及Rapamycin。10天以后,收集扩增后细胞,流式检测胞内mTORCl底物p70

s6k磷酸化状况。 结果：Lin-Sca-1+细胞在细胞因子的刺激下开始增殖,第6天时细胞扩增了25±4.5倍,到了第10天时,细胞扩增了82±5.2倍。磷酸化p70 s6k的表达与之相应。在未扩增初始的状态下,只有5.82±3.12%的细胞表达磷酸化p70 s6k,扩增了6天以后,22.4±4.67%的细胞表达磷酸化p70 s6k,而扩增了10天以后,73.4±5.23%的细胞表达磷酸化p70 s6k；在第6天的时候加入Rapamycin可以有效的抑制磷酸化p70s6k的表达,但是并没有完全抑制磷酸化p70 s6k的表达。 结论：mTORCl在10天的小鼠造血干细胞体外扩增过程当中,前6天呈现一定水平的激活,在扩增的第7-10天呈现一个剧烈激活的过程,这个过程和总细胞的大量扩增相呼应。 第二部分抑制mTORCl异常活性促进造血干细胞体外扩增以及干性维持 目的：mTORCl过高活性会导致造血干细胞池的耗竭,而Rapamycin为m TORC1有效抑制剂。在上一部分的研究中已经发现mTORCl在扩增7-10天出现剧烈激活过程,本部分研究目的就是利用Rapamycin抑制mTORCl在小鼠造血干细胞扩增第7-10天呈现的剧烈激活,研究其能否进造血干细胞体外扩增以及干性维持。 方法：分选小鼠骨髓Lin-Sca-1+细胞,应用无血清培养基添加细胞因子的培养体系体外扩增分选的干祖细胞,应用Rapamycin作为mTORCl抑制剂,以DMSO作为对照。扩增10天,在第6天加入DMSO以及Rapamycin。10天以后,收集扩增后细胞。利用流式检测细胞的表型,利用CAFCs (Cobblestone Area-Forming Cells)法检测体外造血干细胞的功能,利用竞争性移植的办法检测造血干细胞长期造血能力。 有 结果：Rapamycin在第6天加入,在扩增结束以后,会略微的减少有核细胞总的数量,Veh组总的有核细胞数量为2.73±0.33×105,而加Rapamycin组总的有核细胞数量为2.43±0.21×105。但是Rapamycin的加入却增高了LSK+细胞和Lin-Sca-1+细胞在总细胞中的比例,通过计算得出总的LSK+细胞和Lin-Sca-1+细胞的数量,我们发现,Rapamycin相较于Veh可以显著的增加LSK+细胞和Lin-Sca-1+细胞的数量,Veh组分别得到1.27±0.47×104和7.34±3.0×103的Lin-Sca-1+细胞和LSK+细胞,而Rapamycin组则得到1.97±0.56×104和10.64±3.42×103的Lin-Sca-1+细胞和LSK+细胞。当与初始的Lin-Sca-1+细胞比较,计算Lin-Sca-1+细胞扩增的倍数时,Veh组获得了4.2倍的扩增,而Rapamycin获得了6.5倍的扩增。Rapamycin相较于Veh获得了1.5倍的Lin-Sca-1+细胞数量。Rapamycin可以明显的增加day14-CAFCs和day35-CAFCs,可以获得150.67±16.4和9.26±1.45/100,000细胞的dayl4-CAFCs和day35-CAFCs,而Veh则只能获得97.3±7.6和3.53±1.02/100,000细胞的day14-CAFCs和day35-CAFCs.当计算day35-CAFCs扩增倍数时,即相当于计算体外造血干细胞功能时,Veh获得了0.73±0.08倍的扩增,而Rapamycin获得了1.95±0.25倍的扩增。Rapamycin扩增后的细胞相较于Veh扩增后的细胞在第8周的时候,能更有效的植入照射模型的小鼠体内Rapamycin组CD45.2细胞的植入率为32.23±10.7%,Veh组的植入率为18.16±9.32%；随着时间的延长至32周,Veh组的植入率有所降低,9.93±8.25%,而Rapamycin组的植入率为42.1±11.2%。

http://www.selleck.cn/products/cobimetinib-gdc-0973-rg7420.html 结论：Rapamycin能够促进体外造血干细胞的扩增,并且增强扩增后细胞造血重建的速度和长期造血重建功能,维持其干性。 第三部分抑制mTORCl异常活性促进造血干细胞体外扩增的机制探讨 目的：虽然明确了抑制mTORC1异常活性可以促进造血干细胞体外扩增以及干性维持,但是其机制尚不清楚。在其他细胞环境的研究发现mTORCl活性与干细胞的凋亡,分化,衰老密切相关,本研究的目的是探讨抑制mTORCl活性促进造血干细胞体外扩增及干性维持的机制。 方法：分选小鼠骨髓Lin-Sca-1+细胞,应用无血清培养基添加细胞因子的培养体系体外扩增分选的干祖细胞,应用Rapamycin作为mTORCl抑制剂,以DMSO作为对照。扩增10天,在第6天加入DMSO以及Rapamycin。10天以后,收集扩增后细胞。利用流式,免疫荧光,细胞组织化学,聚合酶链式反应检测细胞的周期,衰老等相关分子表达。 结果：通过Annexin-V对凋亡细胞的标记,我们发现Veh组的总细胞Annex in-V表达率为8.93±1.5%,Rapamycin组的总细胞Annexin-V表达率为11.79±3.

L-1的shikonin作用于细胞24 h后可使细胞皱缩、变圆,并出芽形成明显的凋亡小体,且其可时间依赖性的诱导procaspase-3的剪切。35μmol.L-1的shikonin作用于细胞12 h和24 h均可以诱导细胞产生ROS。ROS清除剂NAC和p38抑制剂SB203580可以明显降低shikonin诱导的HeLa细胞的生长抑制和凋亡率;并且5 mmol.L-1 NAC可以上调由shikonin引起的pro-caspase-3的表达降低,下调由shikonin引起的p38蛋白的磷酸化。结论 Shikonin可以诱导HeLa细胞发生凋亡,ROS/p38信号通路参与了其凋亡的过程。
目的:探讨千金藤素(CEP)致Sprague-Dawley(SD)乳大鼠心肌细胞的凋亡作用及其信号途径。方法:应用MTT法检测千金藤素对心肌细胞活性的抑制作用;利用Hoechst 33342染色及Western blotting方法检测凋亡相关信号分子caspase-3,观察CEP致心肌细胞凋亡的作用;采用Western blotting法观测CEP对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族3个主要信号分子c-Jn氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38MAPK磷酸化水平的影响,并利用ERK和p38

selleck screening library MAPK的特异性抑制剂,分别验证两种分子所介导的信号通路在CEP致心肌细胞凋亡中的作用。结果:(1)CEP能够剂量依赖和时间依赖地抑制心肌细胞的活性。(2)CEP作用于心肌细胞,出现细胞核碎裂现象和caspase-3激活。(3)CEP作用下p38 MAPK和ERK磷酸化水平显著增强,JNK的磷酸化状态未发生显著改变。(4)p38 MAPK磷酸化抑制剂SB203580显著减轻CEP对心肌细胞活性的抑制作用;ERK磷酸化抑制剂PD98059不能影响CEP对心肌细胞活性的抑制作用。结论:p38 MAPK参与CEP致心肌细胞凋亡作用。
目的通过培养SD大鼠乳鼠心室肌细胞建立缺氧/复氧(H/R)模型,以模拟在体心肌缺血再灌注损伤,观察脂联素(APN)对心肌细胞缺氧/复氧内质网应激所致心肌细胞损伤的保护机制,为心脏缺血/再灌注损伤的防护提供理论依据。方法采用胰蛋白酶消化法原代培养乳鼠心室肌细胞,通过心肌α肌动蛋白免疫荧光法进行鉴定。选用培养72 h的单层心肌细胞,实验分为5组:正常对照组、单纯H/R组、H/R+30 mg/L APN组、H/R+30 mg/L APN+5 mmol/L SB203580(p38 MAPK抑制剂)组、H/R+5 mmol/L SB203580组。实验终止后,在倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态的变化,采用化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放,用RT-PCR和Western

更多 blot测定内质网应激指标GRP78、Caspase-12的表达。结果与空白对照组相比,单纯H/R后,细胞生长状态较差,内质网应激蛋GRP78、Caspase-12的蛋白和mRNA表达明显增高,LDH的释放量增加;APN预处理后进行H/R,可较大程度地逆转上述指标变化,与H/R组相比具有显著性差异(P
目的探讨重组人红细胞生成素(rhEPO)预处理对缺氧/复氧后SK-N-SH神经母细胞凋亡的影响及丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路的作用。方法 也许 SK-N-SH细胞随机分成对照组、Cocl2组、rhEPO组和SB203580组。MTT法测定细胞增殖,RT-PCR技术检测bcl-2、caspase-8、和P38MAPK mRNA的表达。结果 rhEPO预处理可以增加SK-N-SH细胞的增殖能力,上调bcl-2和P38MAPK基因的表达,下调caspase-8的表达,而这些调节作用可被SB203580抑制。结论 rhEPO预处理对缺氧/复氧后的SK-N-SH细胞有保护作用,P38MAPK通路起到重要的作用。
目的探讨健脾解毒方对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染人胃癌MKN45细胞环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达及其p38MAPK信号通路的调控机制。方法采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)和Westernblot检测Hp标准株NCTC11637感染对人胃癌MKN45细胞COX-2 mRNA和蛋白表达的影响及健脾解毒方药物血清的调控作用;运用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路,观察Hp对MKN45细胞COX-2 mRNA和蛋白表达的影响;观察健脾解毒方对Hp感染激活的p38MAPK信号通路及其下游活化转录调控因子2(activating transcription factor2,ATF-2)表达的影响。结果 Hp感染人胃癌MKN45细胞后,COX-2 mRNA和蛋白表达均明显高于空白对照组(P
目的探讨MAPK信号转导通路在CdCl2、HgCl2诱导RAW264.7细胞低剂量兴奋效应过程中的作用。方法以0、0.0005、0.005、0.05、0.5、5、50和500μmol/L浓度的氯化镉(CdCl2)和氯化汞(HgCl2)分别染毒RAW264.