5/5.0μu mol/L)、联合Ⅰ组(0.5μ mol/L AZD6244+0.5μ mol/L GDC-0941)及联合Ⅱ组(5.0μ mol/L AZD6244+5.0μ

mol/L GDC-0941)。细胞经过不同组合浓度的抑制剂作用后,MTT法绘制增殖抑制曲线；平板集落形成法检测集落形成能力的改变；流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布；Western blot检测不同组中抑制剂靶点下游周期及凋亡相关蛋白表达的差异。 在两株NSCLC细胞中,单独抑制RAS/RAF/MEK通路或PI3K/AKT/mTOR通路效果较差。抑制剂AZD6244或GDC-0941作用于A549细胞的抑制率分别可达25.5%和38.1%,作用于NCI-H157细胞的抑制率分别可达16.9%和35.1%。Westernblot结果显示AZD6244抑制RAS/RAF/MEK通路后(降低pERK活化)激活PI3K/AKT/mTOR通路(增强pAKT活化)。相反,GDC-0941抑制PI3K/AKT/mTOR通路后激活了RAS/RAF/MEK通路。结果表明单通路突变的细胞,仅抑制该突变通路,效果差。未突变通路的抑制剂对肺癌细胞的增殖也有抑制作用。无论肺癌细胞是KRAS单突变,还是KRAS/PTEN双突变,单通路抑制效果较差,需要双通路联合抑制提高疗效。 哪里 RAS/RAF/MEK和PI3K/AKT/mTOR双通路联合抑制可增强KRAS/PTEN双突变的NSCLC细胞的生长抑制作用。在NCI-H157细胞中,低剂量的联合Ⅰ组表现为两药协同作用(q值=1.22),高剂量的联合Ⅱ组表现为两药相加作用(q值=0.92)；集落形成能力下降[77.2±1.54个/孔VS61.5±2.12个／孔,P<0.01]；凋亡率增加[18.3±0.82%VS21.32±0.56%,P<0.01]和[27.14±1.58%VS42.45±4.42%,P<0.01]；凋亡率显著增加[37.85±3.18%VS52.27±4.36%,P
背景二甲双胍在临床上是治疗II型糖尿病的最佳方案药物之一,上市以来其疗效比较显著、毒副作用小、价格相对便宜,使其在临床上被广泛推广应用。近一些年来国外学者的研究报告中发现,长期、适当剂量服用二甲双胍的糖尿病患者罹患乳腺、前列腺、胃、肺等部位恶性肿瘤的发生概率会明显降低,同时在一些体外实验过程中也发现二甲双胍对多种恶性肿瘤细胞的细胞株也表现出了明显的抑制增殖的作用。我们针对二甲双胍是否也存在对骨肉瘤细胞增殖产生影响这一命题提出设想,设计了本实验,采用CCK-8法检测二甲双胍对骨肉瘤MG63细胞增殖的影响,并检测Akt、PoxO1蛋白的磷酸化水平,为进一步观察二甲双胍对骨肉瘤细胞增殖的影响提供依据。

已经 目的观察二甲双胍对骨肉瘤细胞增殖及蛋白激酶B(Akt)信号通路中Akt、叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)蛋白磷酸化的影响,探讨二甲双胍抑制骨肉瘤细胞增殖的作用机制。 方法以骨肉瘤MG63细胞株为研究对象,采用含有10%胎牛血清的RPMI1640培养液在体外培养至细胞融合到70%时,更换终质量浓度为50mmol/L的不含血清的培养液继续培养,在加入实验剂量的二甲双胍后12、24、36、48、72h分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞的增殖,收获24h的细胞,提取总蛋白后采用Western Blot技术检查Akt、磷酸化Akt (p-Akt)、FoxO1、磷酸化FoxO1(p-FoxO1)的表达。 结果二甲双胍可显著抑制MG63细胞的增殖,呈明显的时间依赖性,用药48h后,MG63细胞内Akt、FoxO1的磷酸化水平明显下降。二甲双胍组的p-Akt和对照组的p-Akt水平分别为0.62±0.04和1.33±0.16(P<0.05),二甲双胍组的p-FoxO1和对照组的p-FoxO1水平分别为0.82±0.02和1.71±0.05(P
在肿瘤的形成和发展过程中,抑癌基因p53常常发生突变或缺失,而这种突变或缺失又是导致肿瘤进展和化疗耐药产生的重要原因。目前,尽管自噬在肿瘤形成过程中的促生长和促死亡作用仍存在争议,但大量体内外实验研究支持：在化疗药物所致的微环境压力下,肿瘤细胞会激发自噬作为一种保护性的机制来对抗化疗药物的细胞毒性,最终导致化疗耐药的产生。最近,越来越多的研究证实MAPK信号通路调控的自噬是引起化疗耐药的重要机制。

Rapamycin 目的：研究抗肿瘤药物5-FU在耐药的p53缺失结肠癌细胞HCT116p53-/-和p53突变结肠癌细胞HT-29中的自噬表达情况,分析其与5-FU耐药的相关性并探讨其可能的分子机制。 方法：通过Western blotting分析野生型p53(HCT116p53+/+和RKO).缺失型p53(HCT116p53-/-)和突变型p53(HT-29)四种肠癌细胞中5-FU诱导的自噬的表达情况并分析其差异；在5-FU作用条件下,通过MTT、流式细胞技术、Western blotting.

0软件进行统计学处理,p<0.001)；而与缺血再灌注组比较,缺血再灌注乌司他丁处理组大鼠脑组织TNF-α、P38、JNK的mRNA表达水平也显著降低(P
PPARγ是过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator activedreceptors，PPARs)的一个亚型，作为影响骨代谢的侯选基因目前在基础和临床的相关研究较少，其人工合成配体噻唑烷二酮类药物(TZDs)作为糖尿病的治疗药物已广泛应用于临床。2006年糖尿病血糖控制的大型临床研究ADOPT研究首次正式报道TZDs对骨代谢的负面影响，表现为在绝经后女性糖尿病患者中引起骨量下降，具有引起或加重骨质疏松风险的可能，其具体机制仍待于研究。脂联素(Adiponectin,APN)是近年发现的由脂肪细胞分泌的一种特异性蛋白,具有抗炎、改善胰岛素抵抗状态、降糖、抗动脉粥样硬化及调节骨代谢的作用。目前对于脂联素在改善胰岛素抵抗等方面的研究已非常成熟，但在骨代谢里的影响机制的研究比较少，其在绝经后骨质疏松中所起的作用以及与PPAR-γ之间关系的研究在国外日渐增多，而国内尚未见报道。 B-Raf mutation 目的：本研究首先通过观察TZDs类药物吡格列酮对去卵巢大鼠骨代谢变化、体脂变化及骨代谢相关指标的影响，探讨其与绝经后骨质疏松的关系及作用的可能机及其对去卵巢脂联素的影响，探讨脂联素的作用机制及其骨效应，为临床合理用药提供理论基础。

方法：选用144只健康雌性3月龄Wistar大鼠作为研究对象，分为去卵巢组及假手术组，两组各包括生理盐水组、吡格列酮4mg/kg.d、吡格列酮20mg/kg.d，共六组，对其进行灌胃给药，分别在0周、4周、8周、12周不同时间点各取6只大鼠进行各项指标的检测，用DPX双能X线骨密度扫描仪检测实验动物骨量的变化，脱钙骨片进行HE染色观察骨形态学变化，用血糖仪测定血糖，用放免法测定血胰岛素、血雌二醇及骨钙素的水平，用分光光度仪测定血脂、血钙、血磷，血碱磷酶变化，用RT-PCR检测PPARγ2水平，用酶联免疫法测定脂联素、骨髓上清液骨碱磷酶水平。 GSK2656157体外 结果：1去卵巢组大鼠与假手术组比较，体重、TG、CHO、LDL-C、血ALP、FNS、HOMA-IR、BGP、BALP、PPARγ2、APN均升高，E2、HDL-C、BMD下降，差异有统计学意义（P＜0.01）。

2不同浓度吡格列酮干预后假手术组和去卵巢组胰岛素、胰岛素抵抗指数、BMD、BGP、BALP呈剂量依赖性下降，而APN、PPARγ2呈剂量依赖性上升，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。去卵巢组TG、CHO、LDL-C、ALP呈剂量依赖性下降，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 3吡格列酮干预后假手术组吡格列酮4mg/kg.d组以及吡格列酮20mg/kg.d组的大鼠BGP、BALP、BMD随时间的变化下降，PPARγ2、脂联素上升，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。去卵巢组对照组大鼠BGP、BALP水平随时间的变化上升，吡格列酮4mg/kg.d组以及吡格列酮20mg/kg.d组的大鼠BGP、BALP水平均随时间的变化下降；对照组、吡格列酮4mg/kg.d以及20mg/kg.d组中的大鼠PPARγ2、APN水平随时间的变化上升，BMD随时间的变化下降，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。

不 4脂联素与PPARγ2正相关（r = 0.718，P＜0.05），与BGP、BALP呈正相关（r = 0.339，r =0.595；P＜0.05），而与BMD呈负相关（r = -0.946，P＜0.05）。 5骨形态学变化：假手术组椎骨骨小梁结构正常，与其相比，去卵巢组椎骨骨小梁变细、排列稀疏、部分断裂，骨小梁周围的成骨和破骨细胞增生活跃。吡格列酮干预后，假手术组与去卵巢组的骨小梁均有不同程度的破坏，但去卵巢组更为明显。 结论：1.吡格列酮激活PPARγ2转录活性上调PPARγ2表达，降低成骨细胞标志基因BGP、BALP的水平，并呈时间依赖性和剂量依赖性的降低BMD,证实了其对骨代谢的不利影响。 2.吡格列酮以时间依赖性和剂量依赖性促进APN的分泌，且APN水平与BMD呈负相关，提示了APN水平的变化可能参与了TZDs类药物在绝经后患者应用引起骨量下降的发生和发展过程。
壳聚糖（Chitosan）是甲壳质的脱乙酰基产物，是天然多糖中唯一的阳离子多糖，具有多种特殊的物理化学性质和生物活性。研究证明壳聚糖能够增强机体免疫力，如激活免疫细胞；然而近年来更多研究发现壳聚糖在伤口愈合，气管炎等炎症性疾病的治疗中起着重要的作用，表明壳聚糖亦能弱化炎症处激活的免疫细胞。 本论文参考Cooper的方法建立了结肠炎模型建立：32只小鼠(雌雄各半)随机分成A、B、C、D四组，每组小鼠(雌雄各半)自由饮用5%的DSS溶液7天，后换为正常自来水，自第一天起分别用双蒸水、5mg/mL、10 mg/mL、15mg/mL的水溶性壳聚糖每只小鼠灌胃0.

47%),N-cadherin明显升高(30%VS61.84%),两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);E-cadherin、N-cadherin两者表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05),表现为TNM分期和淋巴结转移程度越严重,E-cadherin阳性表达越低,N-cadherin阳性表达越高;Her2、N-cadherin阳性表达患者的病死率更高,而E-cadherin阴性表达患者的病死率更高,阴性组与阳性组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Her2阳性表达促进乳腺癌细胞上皮间质转换过程,同时增强乳腺癌的浸润转移能力,严重影响患者的预后情况。
PI3K-Akt通路是生长因子受体下游有关细胞生存、增生的最主要的信号通路。在多数恶性肿瘤中,PI3K-Akt通路呈被激活状态,因此其一直作为肿瘤治疗的靶点备受瞩目。
研究表明,PI3K/AKT信号通路在非小细胞肺癌存在异常激活,对肿瘤细胞的增殖、凋亡、存活、耐药等起着重要的作用。顺铂是临床最常用一线化疗药物,但随着治疗的进展肿瘤对其耐药的现象越来越普遍,严重制约其临床效果。顺铂耐药是多种机制共同参与的复杂过程,其中PI3K/AKT通路或其组分持续被激活是非常重要的因素之一。本文对二者关系研究领域的进展作一综述。
对磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidyl

LY294002细胞系 inositol 3-kinase,PI3K)抑制剂作为抗肿瘤药物的临床研究进展作一综述。PI3K在细胞生长,增殖和凋亡等过程中起重要调节作用,与乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等肿瘤的发生发展密切相关。因此,PI3K已成为很有前途的癌症治疗靶标,超过10多种PI3K抑制剂作为抗肿瘤药物已进入临床研究。
肺癌是中国发病率及死亡率最高的恶性肿瘤。肿瘤细胞在驱动基因的作用下持续生长,并对该驱动基因的抑制剂具有高敏感性。近年来,针对驱动基因的检测技术不断发展,相应的驱动基因靶向药物也层出不穷。本文主要从中国肺癌的驱动基因、驱动基因的检测及针对驱动基因的靶向治疗3个方面进行综述,并展望中国肺癌驱动基因的应用前景。
PI3K脂激酶家族介导的细胞信号转导通路,调节细胞增殖、分化、凋亡等一系列活动,已经成为治疗肿瘤、炎症等疾病的重要靶标。近来出现了多种结构类型的该通路抑制剂,笔者总结了近年内进入临床研究的具有PI3K-mTOR双重抑制活性的小分子化合物。
肺癌是癌症死亡的重要原因。驱动基因的发现使肿瘤治疗不再”一刀切”。靶向治疗改变了癌症药物治疗的现状成为”带眼睛的子弹”,其疗效可见并为肺癌治疗带来一场革命。驱动基因及靶向治疗已经成为非小细胞肺癌(non-small

为什么 cell lung cancer,NSCLC)新的代名词。2013年中国美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical Oncology,ASCO)年会发布了关于NSCLC的11种驱动基因突变频率,本文将就此11种NSCLC驱动基因突变的结构、功能及靶向药物治疗进行阐述。
3-Amino-2-methoxycarbonylthiophene

used as the main raw material,an intermediate(thiofuran siamese) 2,4-dichloro-thieno[3,2-d]pyrimidine was synthesized.The prod-uct was 还有 characterized by nuclear magnetic resonance(NMR).The first step yield was 84%(190 ℃) and the second step yield was 81.4%(105 ℃,m(intermediate):m(phosphorus oxychloride) = 1:6.4).The raw product was refined with a unique refining process,which can enhance the purity up to 99.5% to meet the requirement of condi-tions for the development and research of thiofuran siamese as a new medicine of anticarcinogen.Contrasted with the traditional technique,this process featured with cheap raw materials,possible for solvent recovery and reuse,low comprehensive cost,and suit-able for production on certain scale.

胆红素注入1h后，15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg胆红素组达到血浆总胆红素浓度95%的置信区间分别为：（106.31，123.49）μmol/L、（196.58，238.90）μmol/L和（325.15，349.07）μmol/L，且注入剂量和血浆总胆红素浓度有等级相关性（r=0.9452）。2.LPS可促进p-ERK表达和抑制IκBα表达（P＜0.01）。2h时对p-ERK促进作用最强，5h减弱，24h消失；2h时对IκBα抑制作用最强，5h减弱，24h仍然存在。3.低浓度胆红素单独作用可促进p-ERK表达和抑制IκBα表达（P＜0.01）。当胆红素浓度在（106.31，123.49）μmol/L范围时，可促进p-ERK表达，2h促进作用最强，5h减弱，24h消失；低浓度胆红素可抑制脾细胞IκBα表达，2h抑制作用较5h明显（P＜0.01），24h仍存在，该浓度范围的胆红素单独作用对p-ERK、IκBα表达影响均低于LPS的作用（P＜0.01）。4.不同剂量胆红素组在LPS激活后p-ERK的表达情况：胆红素浓度在（106.31，349.07）μmol/L范围时，对LPS激活p-ERK表达均有协同作用；各时段与同时段的LPS组比较，差异有统计学意义（P＜0.01），并随着胆红素浓度升高，协同作用越明显，表达增多，随着时间延长，体内胆红素的代谢，激活作用减弱，24h时作用已消失。5.不同剂量胆红素组在LPS激活后IκBα的表达情况：①在给予LPS激活后，胆红素浓度在（106.31，349.07）μmol/L范围时对LPS抑制IκBα的表达均有协同作用，2h时协同作用最强（P＜0.01）；随着胆红素浓度升高，IκBα表达量减少；随着胆红素代谢，IκBα表达量增加，24h时作用仍存在。6.p-ERK和IκBα与胆红素浓度的直线相关分析结果：⑴在2、5h时p-ERK与胆红素浓度水平呈正相关（r分别为0.9428、0.9945，P＜0.01）。在24h时两者无相关关系存在（r=-0.1809，P＞0.05）。⑵在2、5h时IκBα与胆红素浓度水平呈负相关性（r分别为-0.9391、-0.969，

PLX3397核磁共振 RAD001体内 P＜0.01）。在24h时两者无相关关系存在（r=-0.098，P＞0.05）。7.p-ERK和IκBα相关性分析：在2h、5h时p-ERK和IκBα（SUM）值呈负相关（r分别为-0.9763、-0.9687， P＜0.01，在24h时两者无相关关系存在（r=-0.185， P＞0.05）。结论：1.LPS单独作用能够促进p-ERK的表达和抑制IκBα表达；2.低浓度胆红素单独作用能够促进p-ERK表达和抑制IκBα表达；3.低、中、高浓度胆红素对LPS刺激p-ERK表达有协同作用，这种协同作用呈浓度依赖性，随着胆红素浓度的升高，协同作用增强，随着胆红素代谢，刺激作用减弱；4.低、中、高浓度胆红素对LPS抑制IκBα表达有协同作用，这种协同作用呈浓度依赖性，随着胆红素浓度的升高，协同作用越强，随着胆红素代谢，协同作用减弱。提示胆红素影响免疫细胞的机制可能与调节TLR4信号通路中p-ERK的磷酸化和IκBα表达减少有关。
目的研究高血糖SD大鼠局灶性脑缺血再灌注后P38MAPKα和β在脑组织中的磷酸化状态，以及在各细胞中的表达和时空规律，以此探讨P38MAPK在高血糖加重脑缺血损伤中的作用。 方法通过腹腔注射STZ制备1型糖尿病模型，线栓法制备大脑中动脉局灶性脑缺血30min/再灌注模型。然后通过HE染色，对比观察糖尿病高血糖局灶脑缺血/再灌注组(高血糖组)和正常血糖局灶脑缺血/再灌注组(正常血糖组)脑组织的病理学变化，神经症状评分了解局灶脑缺血/再灌注后大鼠神经功能缺损情况，采用免疫组化法、免疫荧光染色法和Western

Blotting法检测磷酸化P38MAPKα和β(p-p38α，p-p38β)的表达。 结果(1)大鼠局灶脑缺血/再灌注术后，大鼠脑缺血后均出现神经功能缺损，高血糖缺血再灌注组的脑功能评分明显较正常血糖手术组升高(P
目的：探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript peptides, CART)抗氧化减轻缺血性脑损伤及其机制。 方法：健康雄性ICR小鼠随机分为四组：缺血／再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)组、CART组、生理盐水(Normal Saline, NS)组、假手术组。插线法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, selleck合成 MCAO)模型,CART组和NS组于缺血2小时再灌注前分别经尾静脉注射给予CART55-102和同体积NS,然后每隔24小时重复给药1次。再灌注不同时间点分别以TTC染色检测脑梗死体积,干／湿法测定脑组织含水率,酶联免疫吸附法检测梗死侧大脑皮质4-羟壬烯醛(HNE)、8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OHdG)及3-硝基酪氨酸(3-NT)含量；采用流式细胞技术检测梗死侧大脑皮质氧自由基(ROS)含量和线粒体膜电位；采用比色法检测线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ活性；实时聚合酶链式反应(RT-PCR)测定梗死侧大脑皮质线粒体DNA (mitochondrial DNA, mtDNA) mRNA表达。 结果：(1)与I/R组和NS组比较,CART组再灌注后各时间点脑梗死体积均不同程度减小,再灌注24h、48h、72h其差异均有统计学意义(均P<0.01),8-OHdG仅在12h差异有统计学意义(P<0.05),3-NT在24h、48h及72h时间点差异有统计学意义(均P<0.01)、线粒体呼吸链复合物Ⅱ活性(P0.

5±10.6%;经10ng/ml TGFβ1预处理后,丝裂霉素对SGC-7901细胞的抑制率降为35.0±4.1%,二者间有显著性差异(反应细胞增殖情况OD490值的比较,均P＜0.05)。表明TGFβ1预处理可降低SGC-7901细胞对丝裂霉素的敏感性,诱导其对丝裂霉素耐药。表明TGFβ1能增强肿瘤细胞的耐药性。 2、运用Hoechst 33258荧光染色法及流式细胞术检测了TGFβ1处理前后SGC-7901细胞凋亡率的变化,结果发现TGFβ1处理对SGC-7901细胞的凋亡率无影响。 3、采用高通量的蛋白质组学技术,通过二维凝胶电泳技术分析经TGFβ1预处理的SGC-7901细胞和未处理的SGC-7901细胞的差异蛋白表达谱,结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱技术初步鉴定差异蛋白,以初步探讨TGFβ1诱导SGC-7901细胞耐药的作用机制。比较两组细胞总蛋白的2-D图谱后,在相同的实验条件下,它们蛋白质点的分布十分相似,位置重复性分析表明TGFβ1处理SGC-7901细胞在等电聚焦(IEF)方向上的平均偏差为0.908±0.102mm,在垂直板SDS-PAGE电泳方向上的平均位置偏差为1.032±0.108mm;未处理SGC-7901细胞在IEF方向上的平均偏差为0.838±0.116

没有 mm,在垂直板SDS-PAGE电泳方向上的平均位置偏差为1.075±0.168 mm。表明我们成功地建立了分辨率较高,重复性较好的TGFβ1预处理SGC-790l细胞和未处理SGC-7901细胞的二维凝胶电泳图谱。使用PDquest分析软件对TGFβ1预处理SGC-7901细胞和未处理SGC-7901细胞的各蛋白质点的表达丰度进行分析,我们发现30个差异点,随机选取2个差异点,经原位酶解和MALDI-TOF质谱分析测定它们的PMF,初步鉴定了其中的2个蛋白质点。部分候选的蛋白质差异表达水平经Western MI-773体外 blotting分析可以看出SGC-7901细胞经TGFβ1处理后GST-π,MDR1蛋白表达上调,这些结果与我们蛋白质组学的分析结果是一致的。 4、应用免疫组织化学方法检测TGFβ1、GST-π和MDR1在胃癌组织中的表达情况并分析其与临床病理参数间的关系。结果表明:TGFβ1、GST-π和MDR1的阳性信号主要在细胞浆。在76例胃癌组织中,TGFβ1、GST-π和MDR1的阳性率分别为75%、81.5%及61.8%,且三种蛋白的表达均与分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P＜0.05),但与年龄和性别等无关(P＞0.05)。 5、利用Smad4 siRNA、MAPK通路特异性阻断剂处NSGC-7901细胞,然后分别检测GST-π、MDR1的表达水平,以期明确TGFβ1上调GST-π、MDR1表达的信号途径。结果表明:TGFβ1作用SGC-7901细胞后GST-π的表达水平明显上调,但经Smad4

siRNA及PD98059预处理后,其表达水平随之降低;而在SB203580及SP600125处理组GST-π的表达水平无明显变化,提示TGFβ1可能通过经典Smad通路及ERK途径诱导SGC-7901细胞GST-π的表达。而利用外源性TGFβ1处理胃癌细胞SGC-7901,探讨其对SGC-7901细胞MAPK通路的影响时亦发现,SGC-7901的p-ERK表达水平上调,这亦再次表明ERK通路在此分子事件中发挥了重要作用。同时本实验中,我们亦发现TGFβ1作用SGC-7901细胞后MDR1的表达明显上调,但在经SP600125及PD98059预处理后,其表达水平随之降低;而在SB203580及Smad4 siRNA处理组MDR1的表达水平无明显变化,这就提示TGFβ1可能通过JNK通路及ERK途径诱导SGC-7901细胞MDR1的表达。而利用外源性TGFβ1处理胃癌细胞SGC-7901,探讨其对SGC-7901细胞MAPK通路的影响时亦发现,SGC-7901的p-ERK、p-JNK表达水平上调,这亦再次表明ERK、JNK通路在此分子事件中发挥了重要作用。

四、结论 1、成功发现TGFβ1可诱导胃癌细胞耐药的发生,其部分机制可能与上调GST-π和MDR1的表达相关; 2、首次发现TGFβ1可分别通过经典Smad通路、ERK途径及JNK、ERK通路上调SGC-7901细胞GST-π和MDR1的表达。
随着社会经济发展和人们生活方式的改变,人类疾病谱正在发生变化,慢性肾脏病(CKD)已呈现流行特征,并成为21世纪全球性的公共卫生问题。CKD一旦发展为终末期肾脏病(ESRD),则必须依赖肾脏替代治疗(RRT),即血液透析、腹膜透析、或肾移植来维持生命,给患者家庭及社会带来沉重的经济负担和社会压力。因此,早期诊断及防治慢性肾脏病有着特殊重要的意义。研究表明,肾素—血管紧张素—醛固酮系统(RAAS),尤其是血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在CKD的发生和进展中发挥重要作用。AngⅡ是RAAS系统最主要的效应分子,业已证实AngⅡ不仅通过改变肾小球血流动力学促进肾小球硬化,还可促进系膜细胞、内皮细胞和肾小管上皮细胞增生、生长因子表达及细胞外基质积聚。AngⅡ的作用是通过与Gq蛋白偶联的Ⅰ型血管紧张素受体(AT1受体)完成的,而AT1受体为跨膜糖蛋白,本身不具有酪氨酸激酶(此酶介导有丝分裂的细胞信号)活性,也不直接与酪氨酸激酶发生联系。本研究将深入探讨AngⅡ介导肾小球系膜细胞增殖及炎症介质的表达的信号转导机制,这不仅有助于加深人们对CKD发病机制的认识,同时也为未来CKD治疗策略的制定提供理论依据。 购买MLN2238 本研究包括两部分内容: 一、c-Jun氨基末端激酶介导血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞增殖及炎症介质表达 目的:AngⅡ可诱导体外培养的系膜细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化,但其活化后的生物学意义仍不清楚。本研究选用新型的JNK特异性阻断剂SP-600125,探讨JNK-c-Jun/AP-1信号通路在AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞增殖及炎症介质表达中的作用。 方法:体外分离培养人肾小球系膜细胞,应用SP-600125预处理后加入AngⅡ刺激,应用Western Blot检测JNK、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)和p38的活性以及c-Jun磷酸化;应用荧光素酶(Luciferase)活性检测法检测c-Jun转录活性及单核细胞趋化蛋白(MCP-1)启动子活性;凝胶电泳迁移率(EMSA)检测活化蛋白-1(AP-1)DNA结合活性;核酸酶保护法检测MCP-1 mRNA表达;ELISA检测培养上清中MCP-1、转化生长因子(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的分泌;~3H-胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法和细胞计数法测定系膜细胞的增殖。 结果:1.

5mg/kg, Sham组及IR组均在相同时间点给予等量生理盐水处理,直至处死。 采用苏木素-伊红(HE)染色检测缺血再灌注48h脑组织病理学改变;TUNEL细胞凋亡原位检测技术检测缺血再灌注后梗死侧皮质48h凋亡的神经细胞以评价缺血再灌注对神经细胞的损伤情况以及米诺环素的神经保护作用；SP免疫组化染色方法检测IKBα、NF-κB MK1775 P65、TNF-α蛋白的表达,观察各时间点的变化情况和应用米诺环素治疗的影响。 结果 (1)再灌注后48h MT组海马CA1区组织病理改变较IR组明显减轻； (2)再灌注后48hIR组与Sham组相比TUNEL阳性细胞数显著增多(P<0.01),MT组与IR组相比,TUNEL阳性细胞数明显减少(P<0.01)；与同时间点IR组相比,MT组海马CA1区NF-κBP65、TNF-α阳性细胞数明显减少(P<0.01),较IR组明显增高(P
目的：构建含有目的基因IL-24的真核表达质粒pEGFP-N1-IL-24,将其转染小鼠黑色素瘤B16细胞,研究IL-24在细胞内表达对肿瘤细胞的凋亡和体外增殖的影响。 方法：将pUC57-IL-24用限制性核酸内切酶双酶切后,经琼脂糖凝胶电泳回收、纯化,与pEGFP-N1相连接,将连接产物转化至感受态细胞E.coli

DH5a中,提取质粒,再次酶切电泳,检查IL-24插入pEGFP-N1的准确性,并进行测序验证。用脂质体法将pEGFP-N1-IL-24转染B16细胞(B16/pEGFP-N1-IL-24组),同时设未处理的B16细胞(B16组)作对照组,另外将只加入脂质体的B16细胞(B16/Lip组)作脂质体组,pEGFP-N1转染的B16细胞(B16/pEGFP-N1组)作空载体组,加入长春新碱的B16细胞(B16/VCR组)作化疗药组,24h后在荧光显微镜下观察各组细胞的表达,于转染48h后在倒置显微镜高倍镜下观察细胞的形态学变化,用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)法检测细胞凋亡,用MTT法检测B16细胞的体外增殖能力,实验结果用x±s表示,用统计软件做t检验,P<0.05,P
目的: 研究九节龙皂苷Ⅰ(ardipusilloside I,ADS I)对口腔粘液表皮样癌高转移细胞株Mc3的增殖、凋亡及细胞周期的影响,初步探讨ADS I可能的抗肿瘤作用机制 方法:以不同浓度的ADS I作用于口腔粘液表皮样癌Mc3细胞,采用MTT法观察ADS I对口腔粘液表皮样癌Mc3细胞增殖的影响;采用Hoechest 33342染色法和透射电镜(TEM)观察细胞形态学的变化;采用AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡情况;采用流式细胞术PI单色标记法检测Mc3细胞周期的改变;采用DNA琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡特异性梯状DNA;采用免疫组化法检测抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白caspase-3表达的变化。

结果:ADS I作用于Mc3细胞后,小剂量对细胞杀伤作用较轻,随着药物浓度的增加, ADS I能显著抑制Mc3细胞增殖而且呈明显的浓度、时间依赖关系,作用于Mc3细胞48h的IC50值为9.98ug/ml。Hoechest 33342染色法和透射电镜观察到细胞形态学上的变化,包括细胞皱缩,微绒毛消失,染色质固缩集聚至核膜周边呈新月形。流式细胞仪检测未经药物作用的细胞凋亡率为11.63±0.16%,2.5、5、10ug/ml ADS I作用24后的凋亡率为15.57±0.07%,25.63±0.18%,86.27±0.04%;细胞周期阻滞在S期;琼脂糖凝胶电泳结果显示,10ug/ml PR-171化学结构 ADS I作用于Mc3细胞24后,可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带,Western blotting结果显示,caspase-3和Bax蛋白表达量增高,Bcl-2蛋白表达量降低。

selleck ROCK 抑制剂 结论: 1. ADS I具有抑制口腔粘液表皮癌细胞增殖,阻滞细胞周期进程的作用,其抑制作用呈浓度时间依赖性。 2. ADS I有诱导Mc3细胞凋亡作用。 3. ADS I诱导细胞凋亡作用可能是通过引起细胞DNA受损,上调caspase-3和Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达而达到的。
目的：本研究检测胰腺癌中胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells, PSCs)的活化与血小板源生长因子-B (platelet derived growth factor B, PDGF-B)、肾上腺髓质素(adrenomedullin, AM)的表达及相关性和其与临床病理因素之间的关系,探讨PSCs在胰腺癌的发生、发展及转移中的作用。 方法：1)收集天津医科大学总医院普外科2004年至2010年手术切除的胰腺癌石蜡包埋标本43例,并选取36例胰腺癌癌旁切缘组织作为对照。2)应用免疫组织化学染色SABC法分别检测胰腺病理标本中α-SMA(PSCs活化的标志物)、PDGF-B、AM的表达以及微血管密度(Microvessel densit, MVD)的测定,分析α-SMA、PDGF-B及AM的表达与临床病理因素之间的关系和α-SMA与PDGF-B、AM表达的相关性以及PDGF-B、AM与MVD的相关性。 结果： 1.43例胰腺癌标本中α-SMA、PDGF-B和AM的表达明显高于36例癌旁组织标本,两组之间比较有显著性差异(P
背景及目的 胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤,约占成人中枢神经系统肿瘤的50%-60%,成人中发病率为每年8/10万,胶质瘤患者的预后不佳。由于胶质瘤恶性度高,呈侵袭性生长,导致手术难以全切,术后复发率、死亡率较高。 胶质瘤的发生与体内多种癌基因和抑癌基因异常有关,但胶质瘤中相关癌基因和抑癌基因的变化还没有完全清楚,癌基因和抑癌基因之间的复杂关系需要进一步阐明。 第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten, PTEN)是近年发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在调节细胞的增殖、迁移、粘附等方面发挥重要作用。 丝裂原活化蛋白激酶(]mitogen-aetivatedproteinkinase, MAPK)参与细胞的生长、发育、分裂、凋亡,以及细胞间的功能同步等多种过程。 本实验的目的是研究PTEN与p38MAPK在人脑胶质瘤瘤中的表达情况,与胶质瘤病理级别之间的关系及其相关性,从而进一步阐明胶质细胞瘤侵袭性的分子机制,为其诊疗提供理论依据。 方法 研究对象为郑州大学第一附属医院神经外科2008年5月至2010年10月期间的胶质瘤手术切除且保存完好的石蜡包埋标本64例,其中男性33例,女性31例,患者年龄9-82岁,平均45.

57、593.3、558.47μg/ml*h, CL分别为1.003、0.380、0.589(mg)/(μg/ml)/h。与CPT组相比较,偶联物组AUC约提高了两倍,消除速率CL明显降低。

针对聚轮烷载体的优势以及喜树碱的作用效果、现有剂型的缺点等方面,本实验合成了以聚轮烷为载体的聚轮烷—喜树碱偶联物给药体系,并从偶联物的表征,含量、溶解度以及体外释放度的测定、体内外抗肿瘤试验的等方面进行了研究。研究结果表明,聚轮烷—喜树碱偶联物给药体系有良好的溶解度,大大改善了喜树碱难溶的缺点；体外释放结果表明其具有良好的缓释效果,体内外抗肿瘤试验表明,偶联物对肿瘤细胞及实体瘤有明显的抑制作用；生物利用度是药物制剂质量的一个重要指标,静脉注射偶联物药物代谢动力学研究结果表明,偶联物的AUC大大提高,半衰期延长,有效促进了药物的生物利用度。
研究背景与目的 时间 鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)是我国南方省份及东南亚高发的一种恶性肿瘤,具有明显的种族聚集性和地域性。其发生是一个多阶段、多途径、多机制的过程。流行病学调查显示,鼻咽癌的发生涉及到遗传倾向性和环境致癌因素,很可能是遗传易感性个体接受了致癌物的作用而发生的。EB病毒(EBV)、化学致癌物和胚性击中(即遗传因素或自发突变)构成NPC的主要病因,而发病阶段至少在两个以上。各种环境因素、EBV感染、遗传和表遗传学的改变导致瘤基因过表达及抑瘤基因表达下调或缺失,经过癌前病变,最终发生鼻咽癌。 肿瘤的生成涉及多种基因和基因以外的变化,任何单独一种基因的改变不足以致瘤,多种基因变化的积累才能引起控制细胞生长和分化的机制紊乱,使细胞的生长失控而瘤变。在这些基因的变化中,最常发生两类基因的异常变化,即瘤基因及肿瘤抑制基因。鼻咽癌的生成同样涉及多基因的表达改变。在过去几十年中,虽然我们对于鼻咽癌发生的分子基础认识已经有了很大的提高,但这些认识还是远远不能完全揭示鼻咽癌的发病机理。因此,鼻咽癌相关新基因的发现和研究仍将有助于进一步揭示鼻咽癌的发病机理。 NESG1基因(Genbank AF094758),官方名为CCDC19(NM_012337.1),是本课题组姚开泰教授指导的博士生黎众魁于1999年利用mRNA差异显示法,从人正常鼻咽上皮和软腭口腔上皮中筛选,并结合3′-RACE和5′-RACE技术,分别扩增出长约1.4kb和0.7kb的片段(其中包含了一段174bp的重叠产物以确认扩增的特异性),拼接后发现的一个全长约1850bp连续的cDNA序列。该基因位于1q22。预测其编码框长1161bp,编码386个氨基酸,分子量为46252Da,蛋白质等电点为9.99,SOSUI和PSORTⅡ网上预测其为可溶性核蛋白。BLAST比对发现,NESG1的cDNA序列与胎儿肺组织cDNA文库和Stratagene肺癌cDNA文库中的两个EST序列同源。多组织(包括鼻咽粘膜、气管、食管、大脑、心脏、膀胱、肝脏、肺脏、胃、肾脏、胸腺和大肠)Northern杂交显示,该基因特异性的表达于鼻咽和气管纤毛柱状上皮。

http://www.selleck.cn/products/cb-839.html 本课题在此研究基础上,对NESG1基因进行重新克隆测序分析及功能鉴定,并寻找NESG1基因相关的信号转导通路,探讨该基因在鼻咽癌中的作用机制,为进一步阐明鼻咽癌发病机理提供参考。 研究内容与方法 1. NESG1基因的序列修正以及新序列的生物信息学分析 对NESG1基因进行了重新克隆、测序分析并对其序列进行修正,重新预测编码框。对新校正序列进行生物信息学分析。 2. NESG1基因在鼻咽癌中表达水平检测 (1).NESG1基因mRNA表达水平 利用RT-PCR和Real-time PCR检测NESG1 mRNA在鼻咽癌细胞、鼻咽癌组织与非癌鼻咽组织中的表达情况；原位杂交检测NESG1基因的mRNA表达定位。 (2).NESG1兔抗人多克隆抗体制备及NESG1蛋白表达 构建pGEX-4T-1-NESG1-GST原核融合表达载体。IPTG诱导NESG1-GST基因融合表达。利用GST抗体纯化融合蛋白用于免疫大白兔,约100天后取兔血上清,并亲和纯化,最后获得所需的NESG1多克隆抗体。利用免疫组化和Western blot检测NESG1蛋白在鼻咽癌组织与非癌鼻咽组织中的表达情况。利用免疫组化检测鼻咽外多组织中NESG1的表达分布。 3. NESG1基因在鼻咽癌中的功能初步研究 (1).NESG1过表达对鼻咽癌细胞5-8F生物学特性的影响 构建与增强型绿色荧光蛋白融合表达的NESG1慢病毒载体,利用293FT细胞包装成成熟的慢病毒颗粒,感染具有高成瘤和高转移能力的鼻咽癌细胞5-8F。96孔板有限稀释法挑选阳性单克隆细胞,扩大培养,建立稳定过表达NESG1的鼻咽癌细胞株,以空载体同时进行病毒包装及感染鼻咽癌细胞5-8F,获得对照细胞株。利用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验等检测NESG1基因在细胞水平对细胞生长、细胞周期、迁移及侵袭能力的影响；检测稳定过表达NESG1的鼻咽癌细胞裸鼠皮下成瘤能力的改变。

(2).抑制NESG1表达对鼻咽癌细胞5-8F生物学特性的影响 和 构建靶向NESG1的shRNA慢病毒干扰载体,稳定干扰过表达NESG1基因的鼻咽癌细胞,利用MTT法、平板克隆形成实验、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验等观察NESG1表达抑制后细胞生长、迁移及侵袭能力的变化。进一步探讨NESG1基因在鼻咽癌细胞中的基本功能。 4. NESG1基因介导的分子基础初步研究 (1).应用Affymetrix全基因组芯片检测NESG1基因稳定导入前后对鼻咽癌细胞基因表达的影响,寻找差异表达基因 (2).利用生物信息学的方法,分析基因芯片差异表达基因介导的信号通路 (3).NESG1抑制细胞周期进展的初步分子机制 由于过表达的NESG1能阻滞细胞周期由G1向S期转化,因此,NESG1参与抑制了细胞周期的进展。基于基因芯片的数据,我们利用荧光定量RT-PCR和Western blot验证了S期相关的几个重要基因CCNDl、CCNAl、CDK4、p21、CDK2、CDC2的表达,初步探讨了NESG1基因抑制细胞周期进展的机制。 结果 1. NESG1基因的序列修正以及新序列的生物信息学分析 (1).NESG1基因的序列修正 最近,我们对NESG1基因进行重新克隆并测序分析时发现,测序结果与原提呈的AF094758(NM_012337.

05),但治疗组各波潜伏时显著低于损伤组,且治疗组各波波幅均显著高于损伤组(P﹤0.05),各组感觉诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)的变化趋势与运动诱发电位一致。水迷宫定位航行阶段,脊髓损伤组和治疗组大鼠到达平台的潜伏时间显著长于对照组,但第3、4天治疗组潜伏时间显著短于损伤组(P﹤0.05);空间探索阶段,脊髓损伤组和治疗组在目标象限的时间显著少于对照组,且治疗组在目标象限的时间显著长于损伤组(P﹤0.05),对照组、脊髓损伤组和治疗组三组以空间定位方式找寻目标平台所占比例分别为77%、48%和56%。免疫荧光及Western blotting结果显示:脊髓损伤组海马齿状回细胞内Caspase3和Bax蛋白表达增多,且MP能降低这两种蛋白表达。HE染色和尼氏染色结果显示对照组海马并未见明显病理改变。脊髓损伤组和治疗组1W时均可见到内有少量细胞形态异常,但随时间延长,海马内形态异常细胞逐渐增多,存活细胞逐渐减少,且治疗组存活细胞数量显著多于损伤组。结论脊髓挫伤可引起大鼠海马齿状回细胞凋亡、消失,从而导致大鼠学习记忆功能障碍,MP能抑制脊髓损伤后大鼠海马齿状回细胞凋亡,改善脊髓损伤大鼠的学习记忆功能。
癌症是一种涉及多因子和多通路的复杂疾病。目前,临床上使用单个抗癌药物进行癌症治疗的方法往往会产生药物抗性和毒副作用。因此,联合用药疗法应运而生并受到了研究人员和临床医生的极大关注,特别是具有协同作用的联合用药研发。协同作用联合用药展现出了比单个药物治疗效力相加更强的功效,同时由于联合用药中的药物剂量比单个药物应用时剂量要小,且联合用药会同时作用于多个药物靶点及生物通路,因此会减少毒副作用的产生。高通量测序技术的发展为我们提供了大量测序数据,促进了生物信息学联合用药的研究。因此,我们提出了利用病人全基因组测序数据进行精准联合用药预测的模型PDCP,并建立了相关应用平台。首先,PDCP分析病人体细胞突变数据及拷贝数变异数据,提取突变位点及突变基因,并筛选其中的药物靶点进行后续分析。然后,在人类基因相互作用网络中计算各药物靶点的重要性,并筛选出对疾病具有重要性的药物靶点进行进一步分析。之后,两两组合步骤二中得到的基因集并结合基因相互作用网络对每对基因对计算其协同作用得分,进行排序并筛选出最具治疗潜力的双靶点协同基因作用对。最后,根据所得的基因对,结合药物基因关系,给出病人个性化联合用药方案。同时,PDCP预测系统针对每个联合用药作用对分别计算了其治疗相似性和副作用相似性参数,以评估其对肿瘤治疗的疗效。本文整合了多个数据来源,包括Reactome、the

AZD2281研究购买 NCI-Nature Curated PID、KEGG等建立了人类基因相互作用网络。并收集整理了多种数据来源的药物基因相关性信息以及药物与突变位点相关信息、癌症驱动基因集等数据进行病人精准联合用药的预测分析。为了评估该方法的有效性及预测性能,我们收集了TCGA中发布的8种癌症数据集,包括浸润性乳腺癌、结肠癌、肝癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、卵巢癌、胰腺癌和前列腺癌数据集,对每个数据集的样本分别进行了联合用药的预测,结合合成致死基因对和已报道的联合用药对结果进行了评估。实验说明PDCP能够正确预测出病人合理的联合用药方案,并且产生出大量候选联合用药供研究人员进行后续研究,促进了我们对复杂疾病的多靶点治疗和精准医疗的系统性了解。
背景与目的

selleck产品 卵巢癌因其发病隐匿，治疗效果一直欠佳，为死亡率最高的妇科恶性肿瘤。在美国每年约有23,000名新增病例，15,000名死亡病例[1]。卵巢癌的治疗主要依靠肿瘤细胞减灭术，术后给予以铂类药物为基础的联合化疗。但是化疗副作用以及化疗耐药的问题使得卵巢癌的预后仍然较差。在过去的30年里，其5年生存率仍不足40%[2]。因此寻找新的有效的治疗方案成为卵巢癌治疗急需解决的问题。

研究发现信号通路调节的紊乱与异常是肿瘤发生、发展及化疗耐药的重要原因，其中mTOR信号通路与细胞的生长增殖尤其是肿瘤细胞的失控性增殖，肿瘤的复发转移及耐放化疗密切相关，多种恶性肿瘤包括乳腺癌、白血病、胃肠间质肿瘤、肝细胞癌、肺癌等均存在mTOR信号通路的失调[3-9]。而雷帕霉素靶蛋白mTOR，处于此条通路的中心环节，与蛋白质合成及细胞周期的调控密切相关[10]。因此针对于mTOR位点的特异性抑制剂成为肿瘤靶向治疗新的热点。 雷帕霉素作为mTOR的特异性抑制剂，是从吸水性链霉菌发酵液中提取出的一种大环内酯类抗生素，最初发现其具有抗真菌作用，1989年被FDA批准作为免疫抑制剂应用于临床，近年来研究发现其具有显著的抗肿瘤作用[11]，联合传统化疗药物可明显提高化疗药物的促凋亡能力，增强肿瘤细胞对于化疗的敏感性[12]。顺铂是肿瘤化疗中最常用的化疗药物，是临床上实体肿瘤包括卵巢癌，化疗方案中最有效的药物之一，顺铂的抗肿瘤作用机制是与肿瘤细胞的DNA形成DNA-顺铂交联，引起DNA损伤，抑制DNA复制，促进细胞凋亡~([13])，雷帕霉素可抑制DNA损伤修复蛋白的合成，进一步促进顺铂的促凋亡能力。因此我们推测在卵巢癌细胞化疗时给予雷帕霉素可增加顺铂的抗增殖、促凋亡等抗肿瘤作用，增加肿瘤细胞对顺铂的化疗敏感性。 不 本研究选用最常见的卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3，观察雷帕霉素联合顺铂对于细胞株增殖凋亡、周期分布的影响，初步探讨分子靶点药物与传统化疗药物联合应用的效果及相应的分子机制，寻求卵巢癌治疗更加有效的化疗方案。 方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞，MTT法检测雷帕霉素、顺铂单独及联合作用24h、48h、72h对细胞生长增殖的影响；FCM检测对于细胞凋亡及周期分布的影响；Western blot检测其对mTOR信号通路中PTEN、AKT、mTOR、p-mTOR、S6K蛋白及抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响。 结果 MTT结果显示：雷帕霉素单独作用可抑制细胞生长增殖，呈现明显的时间依从性，以72h抑制率最高，且各组之间两两比较均有统计学意义（P＜0.05）。联合顺铂时生长抑制率明显高于单独用药组，差异有统计学意义（P＜0.01）。合成指数CI＜1，表明两药联合应用有协同效应。FCM显示：雷帕霉素与顺铂单独应用即可促进细胞凋亡，凋亡率呈现明显的时间依从性，72h达到最大值；单用雷帕霉素凋亡率较低，且24h凋亡率与对照组比较无统计学意义（P＞0.05），其他各组与对照组比较均有统计学意义（P＜0.05），两药联合应用时其诱导凋亡能力明显增强。单用雷帕霉素作用24h可引起SKOV3细胞G1期延长，但与对照组比较无统计学差异（P＞0.05），S期与G2期细胞逐渐减少。随作用时间的延长，细胞G1期比例逐渐增加，联合顺铂作用效果明显高于单独用药组，各组与对照组比较均有统计学差异（P＜0.

04; CI,1.68-2.47;p
热休克蛋白90（Hsp90）是一种广泛存在于细胞中的分子伴侣，参与调控细胞内多种生理过程，包括细胞周期调控、细胞生存、凋亡、激素和其他多种信号通路。研究表明Hsp90在恶性肿瘤的发生发展过程中发挥十分重要的作用，已经成为目前研究的热点和抗肿瘤治疗的良好靶点。 自第一个Hsp90抑制剂进入临床实验以来，目前已经有多个不同的Hsp90抑制剂处于临床研究阶段，如17-DMAG、17-AAG、IPI-504、BII021、STA-9090、SNX-5422等。

确认细节 实验室在前期研究中发现多硫代二酮哌嗪类化合物HDN-1在体外对多种肿瘤细胞具有明显的抑制活性，且对Hsp90ATPase具有一定的抑制作用，并引起Hsp90顾客蛋白EGFR的降解。这些提示HDN-1具有靶向Hsp90的作用，可能为一种新型Hsp90抑制剂。本论文旨在进一步阐明HDN-1靶向抑制Hsp90的分子作用，明确HDN-1是一种新型的Hsp90抑制剂，从而揭示HDN-1抗肿瘤的作用机制。 第一部分：HDN-1与Hsp90相互结合的研究 本部分实验首先通过表面等离子共振技术（SPR）研究HDN-1与Hsp90的相互作用，结果表明HDN-1可与Hsp90发生结合，解离常数KD=10.9μM；采用基于荧光偏振原理的Hsp90抑制剂筛选模型对HDN-1进行评价，结果HDN-1不能与GA竞争性结合Hsp90，表明HDN-1不能与Hsp90N-端结合；通过观察HDN-1对胰蛋白酶水解Hsp90蛋白指纹图谱的影响，发现HDN-1与Hsp90N-端抑制剂17-AAG的作用不同，表明HDN-1确实不是作用于Hsp90N-端；进一步考察HDN-1与17-AAG联合应用对H1975细胞增殖的抑制作用，发现两者联用具有单独相加作用，说明HDN-1可能作用于Hsp90C-端；最后应用计算机分子模拟对接技术研究了HDN-1与Hsp90的结合部位，结果表明HDN-1与Hsp90分子的C-端结合。综上，HDN-1可与Hsp90结合，并且可能与Hsp90C-端发生结合。 第二部分：HDN-1对Hsp90相关功能的影响 1．细胞内Hsp90顾客蛋白超过200个，抑制Hsp90会引起顾客蛋白的降解。Western Blot方法检测HDN-1作用于3种非小细胞肺癌株H1975、A549、HCC827细胞对Hsp90顾客蛋白的影响，结果表明HDN-1引起了3种细胞中Hsp90顾客蛋白EGFR、p-EGFR、Stat3、p-Stat3、Raf、Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、CyclinD1的降解和活性抑制。HDN-1在0.1μM浓度下就能引起吉非替尼耐药细胞株H1975细胞Hsp90顾客蛋白的变化，相比其它2种细胞，H1975细胞对HDN-1的作用更加敏感。

2．缺氧是肿瘤生长中普遍存在的现象，缺氧环境与肿瘤的发生密切相关，HIF-1α是参与该过程的重要转录因子。Hsp90通过与HIF-1α的相互结合可以起到促进HIF-1α的正确折叠、维持其在缺氧环境下稳定性的作用。为进一步证明HDN-1具有抑制Hsp90的作用，通过Western 还有 Blot方法考察HDN-1在缺氧条件下对H1975和A549细胞中HIF-1α含量的影响，结果表明HDN-1可以明显引起细胞内HIF-1α蛋白水平的下调。 3．研究显示，EGF介导的EGFR内吞降解与Hsp90密切相关，尤其是对发生突变的EGFR。该部分内容研究了HDN-1促进EGF介导的EGFR内吞降解的作用，结果发现：EGF可以诱导野生型EGFR的下调（A549细胞）但不能诱导突变型EGFR的下调（H1975和HCC827细胞），而HDN-1可以明显促进细胞中EGF介导的EGFR内吞降解，呈现剂量和时间依赖性，且对两种突变细胞中的EGFR作用更加明显，同时HDN-1也引起了3种细胞中p-EGFR（Tyr1045）含量上升，也具有剂量和时间依赖性，最后通过研究HDN-1对A549细胞中EGFR泛素化的影响，结果发现HDN-1引起A549细胞中EGFR泛素化增加。上述结果表明HDN-1通过抑制Hsp90的作用促进了EGF介导的EGFR内吞降解。 本部分实验表明，HDN-1引起三种细胞中多种顾客蛋白的降解具有剂量和时间依赖性，且对H1975细胞的作用最为明显，并且HDN-1引起HIF-1α蛋白水平的下调；HDN-1通过抑制Hsp90的作用促进了EGF介导的EGFR内吞降解，且对两种突变EGFR作用更加明显。综上，我们明确了HDN-1是一种新型Hsp90抑制剂，这也是首次发现多硫代二酮哌嗪类具有Hsp90的分子靶向作用。本文阐明HDN-1的Hsp90抑制作用揭示了HDN-1的抗肿瘤作用机制，也为今后进一步对这类化合物基于靶向Hsp90的分子优化与药物开发奠定了基础。
目的

没有 本课题组前期研究已经证明以趋化因子4为靶向的shRNA能够明显抑制卵巢癌SW626细胞CXCR4mRNA及蛋白的表达，抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。因此，本实验在前期研究基础上更深一步研究抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制。 方法 扩增含CXCR4-shRNA质粒及空质粒载体，利用阳离子脂质体转染法转染人卵巢癌细胞SW626细胞，本实验分为3组，干扰组（转染CXCR4-shRNA的SW626细胞）、空载体组（转染空载体的SW626细胞）及空白对照组（不给予任何处理的细胞），转染48小时后，于倒置荧光显微镜下观察转染效率；利用酶标仪结合JC-1法检测肿瘤细胞线粒体膜电位的变化，采用实时定量RT-PCR法检测ASK1mRNA的表达情况。细胞免疫化学和/或Western Blot检测Caspase-3、EGFR、ERK1/2、p-C-Jun、Akt、TNF-α、NFκBp65、IκB-α蛋白的表达水平。 结果 1.转染48小时后在倒置荧光显微镜下观察转染效率：当细胞处于对数生长期，状态良好，细胞汇合度达90%左右，按脂质体与质粒之比为1:1的比例进行转染，转染效率达到最高，人卵巢癌细胞SW626细胞的转染效率可达80%左右。 2. JC-1法检测转染前后干扰组与空白对照组及空载体组相比，线粒体膜电位普遍降低（P<0.001），差异有统计学意义（P<0.

Apelin-13浓度依赖性（0-1μM）和时间依赖性（0-24h）促进培养大鼠H9c2心肌细胞中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1的表达； 6.PI3K特异性抑制剂LY294002（25μM）和Akt特异性抑制剂1701-1（10μM）可以抑制apelin-13引起的自噬标志蛋白LC3-II/LC3-I的表达增加，但是对apelin-13诱导的Beclin1的表达增加无明显影响； 7.自噬抑制剂3-MA（5mM）抑制apelin-13诱导的培养大鼠H9c2心肌细胞内IL-8的分泌； 8. Apelin-13抑制培养大鼠H9c2心肌细胞LDH、AST分泌。 结论PI3K-自噬途径介导apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞分泌IL-8。
目的：通过观察电针“尺泽、合谷”和“足三里、三阴交”两组穴位对脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损评分、脑组织形态学、细胞凋亡及磷酸化p38MAPK的影响,探讨电针对抗脑缺血再灌注损伤的可能作用机理,为临床应用针灸防治脑缺血再灌注提供部分实验依据。

方法：250只健康雄性SD大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、电针组、阻滞剂组、电针+阻滞剂组,50只/组。每组大鼠依据再灌注的不同时间点,随机分为5个时间点亚组：2h组、6h组、1d组、3d组、1w组,每亚组10只。除假手术组外,其余组大鼠均采用改良线栓法制备脑缺血再灌注模型,电针组予每日1次电针治疗,阻滞剂组于造模前30min在相应脑区注射p38MAPK阻滞剂SB203580,电针+阻滞剂组造模前注射SB203580,后予电针治疗。采用神经功能缺损评分测试大鼠神经缺损症状,HE染色和TTC染色法观察大鼠脑组织形态学改变,TUNEL法检测大鼠神经细胞凋亡指数,免疫组化法检测缺血区p-p38MAPK蛋白表达情况。 JQ1 结果： 1.神经功能缺损评分比较：造模后,与假手术比较,其余四组大鼠神经缺损评分明显高于假手术组,有显著的统计学差异(p<0.01),说明脑缺血再灌注造模成功。随着缺血再灌注时间的延长,神经缺损评分呈降低趋势。治疗后,与模型组比较,电针组、阻滞剂组、电针+阻滞剂组评分均低于模型组,且各组3d及1w时间点评分降低,具有统计学意义(p<0.05),SB+EA组1w时间点评分下降,具有显著统计学意义(p0.05)。

2.HE染色观察缺血区脑细胞形态变化：假手术组细胞形态完整,结构清晰核膜完整,核仁清晰；模型组细胞间隙增宽,神经元数量减少,排列紊乱,核膜与周围分界不清,核仁固缩；电针组、阻滞剂组及电针+阻滞剂组神经组织损伤较模型组轻,细胞排列较整齐,结构较完整,胞体轻中度肿胀,存活神经元较多。

selleck产品 3.TTC染色观察脑组织大体形态学改变：假手术组大鼠脑组织被染成均匀一致的红色,其余组大鼠造模后,脑组织出现大小不一的苍白色区域,差异具有统计学意义(P<0.01),随着时间的延长,梗死面积逐渐增加。与模型组比较,电针组、阻滞剂组、电针+阻滞剂组梗死面积不同程度的缩小,再灌注6h后,各组大鼠面积缩小具有统计学意义(p<0.05)。3d及1w时,阻滞剂组梗死面积较电针组、电针+阻滞剂组大(p<0.05),电针+阻滞剂组梗死面积较电针组小(p<0.01)。模型组大鼠阳性细胞数呈时间依赖性,1d时达高峰,3d减少最多,与模型组比较,电针组、阻滞剂组、电针+阻滞剂组凋亡指数均下降,多数组与模型组比较有较明显下降(p<0.05或p<0.01)。阻滞剂与电针刺激合用时,凋亡指数下降明显,与单独使用时比较,1d时间点差异具有统计学意义(p0.05)。 5.脑组织p-p38MAPK表达比较：与假手术组相比,其余四组大鼠脑组织酸化p38MAPK蛋白含量提高(p<0.05)。模型组磷酸化p38于再灌注后2h开始升高,1d显著升高,3d达到峰值,此后逐渐下降,1周时阳性细胞率仍高于假手术组。与模型组相比,电针组、阻滞剂组、电针+阻滞剂组各时段阳性率均有所下降,部分亚组差异具有显著性(p<0.05或p0.05)。 selleck化学药品 结论： 1.电针“合谷、尺泽”和“足三里、三阴交”两组穴位,能明显改善脑缺血／再灌注损伤大鼠的神经缺损症状及脑组织病理形态学变化,能显著降低缺血区神经细胞凋亡指数,提示电针“合谷、尺泽”和“足三里、三阴交”两组穴位对脑组织的缺血损伤具有一定的保护作用。 2.电针“合谷、尺泽”和“足三里、三阴交”能抑制磷酸化p38MAPK蛋白的表达,提示电针“合谷、尺泽”和“足三里、三阴交”对脑缺血损伤的保护作用可能是通过抑制p38MAPK信号通路的表达来完成的。 3.电针“合谷、尺泽”和“足三里、三阴交”对脑缺血／再灌注大鼠的神经功能缺损、脑组织病理形态、缺血区神经细胞凋亡指数及p-p38MAPK的改善在再灌注后3天时较明显,说明该时间点可能为促进脑缺血神经修复的较好治疗时间窗。 4.