78%、104.08%、108.97%,亦即在formalin注射后5分钟出现了P-p38的表达峰值,随后恢复正常,但又在formalin注射后1天再次出现P-p38的表达增加之后恢复正常。 哪里 在此基础上,我们又分别观察了外周或鞘内给予第一组代谢型谷氨酸受体的拮抗剂CPCCOEt或MPEP之后P-p38的表达情况。在formalin注射前15分钟分别在外周或鞘内给予CPCCOEt(100 nmol)、MPEP(50 nmol)或者HEPES(100mM,pH7.4)作为对照,之后在formalin注射后5分钟和1天,取出动物腰膨大部位进行Western

blot检测。结果发现,在外周或鞘内给予CPCCOEt或MPEP之后,可以抑制formalin注射后5分钟时的P-p38的表达增加。而对于formalin注射后1天的P-p38增加,只有在外周给予CPCCOEt时表现出抑制作用。 本实验结果提示:1.formalin外周注射可以引起脊髓p38MAPK的活化,表现为磷酸化的p38MAPK表达增多,提示p38MAPK可能是介导formalin痛反应的主要信号通路;2.外周应用第一组代谢型谷氨酸受体拮抗剂可以抑制脊髓p38MAPK的磷酸化;3.脊髓应用第一组代谢型谷氨酸受体拮抗剂可以抑制脊髓p38MAPK的磷酸化;4.以上结果提示提示第一组代谢型谷氨酸受体(包括外周和脊髓)通过活化脊髓p38MAPK信号通路在formalin引起的慢性痛中发挥重要作用。据我们掌握的文献,这是首次报道第一组代谢型谷氨酸受体通过脊髓(可能是小胶质细胞)p38MAPK在细胞水平介导其功能反应。 结论:1.formalin外周注射可以引起长时程痛敏(持续时间在10天以上),同时伴有脊髓小胶质细胞的活化;2.外周第一组代谢型谷氨酸受体的激活参与了长时程痛敏的发生和脊髓小胶质细胞的活化;3.脊髓第一组代谢型谷氨酸受体的激活参与了formalin诱导的长时程痛敏的发生和脊髓小胶质细胞的活化;4、外周和脊髓的第一组代谢型谷氨酸受体通过脊髓(可能是小胶质细胞)的p38MAPK通路介导上述作用;5、结合我们以往观察到的第一组代谢型谷氨酸受体在formalin急性痛反应中的作用结果提示,第一组代谢型谷氨酸受体(包括外周和脊髓)在痛信号产生和传递及由此引起的痛反应(包括急性痛反应和慢性持续性痛反应)中发挥重要作用。
β_2肾上腺素受体(β_2-AR)激动剂用于哮喘的对症治疗已有60多年的历史。SPFF[2-(4-amino-3-chloro-5-trifluomethyl-phenyl)-2-tert-butylamino-ethanol 很少 hydro-chloride]是沈阳药科大学制药工程学院合成开发的新型β_2肾上腺素受体激动剂,前期研究工作已证实它具有强大的支气管扩张作用和相对较高的β_2-AR选择性,同时还具有作用时间较长等特点,目前已处于Ⅱ期临床试验阶段。SPFF的结构中含有一个手性碳原子,因而存在一对对映异构体。由于具有不同立体构象的对映异构体在生物活性、毒性、药物代谢动力学等方面常有很大差异,因此,我们比较研究了SPFF的对映异构体((-)-SPFF和(+)-SPFF)的抗哮喘的作用特点,并初步探讨了它们的作用机制。

首先用离体实验考察了(±)-SPFF及其对映异构体对豚鼠气管平滑肌的扩张作用。结果显示,(±)-SPFF及其对映异构体都能够浓度依赖性的松弛静息张力和被气管致痉剂(组胺和乙酰胆碱)收缩的豚鼠气管条,(-)-SPFF的作用强度强于(±)-SPFF和(+)-SPFF。但是,单一对映体和(±)-SPFF松弛离体豚鼠气管平滑肌的最大效应彼此接近,表明三者的内在活性是相似的。同时我们通过对选择性β_2受体阻断剂ICI-118551拮抗(±)-SPFF、(-)-SPFF和(+)-SPFF作用的分析,还证实了SPFF的单一对映体扩张离体气管平滑肌的作用都是通过B_2受体介导的。离体豚鼠肺支气管灌流实验结果显示了(-)-SPFF在扩张整个气道作用中的显著优势,(-)-SPFF与(+)-SPFF的作用强度差别为23.2倍。此外,(+)-SPFF对(-)-SPFF的影响实验结果显示,(+)-SPFF与豚鼠气管条孵育20分钟对(-)-SPFF松弛静息张力气管条的量效曲线几乎没有影响。

ABT-263临床试验 其次,通过整体动物的不同模型,考察了(±)-SPFF及其对映异构体扩张在体气管平滑肌的作用。结果显示,灌胃给药时,(-)-SPFF(0.0625,0.25 and 1 mg·kg~(-1))对组胺和乙酰胆碱混合喷雾引起豚鼠窒息的保护作用与同剂量(±)-SPFF的作用相似:经十二指肠内给药时,(-)-SPFF对组胺诱导麻醉豚鼠肺溢流量增加的抑制作用分别强于(±)-SPFF和(+)-SPFF1.6倍和6.3倍:在肺机械功能实验中,单一对映体(-)-SPFF和(+)-SPFF与(±)-SPFF对肺顺应性的降低具有同等作用强度的抑制作用,(-)-SPFF抑制肺阻力升高作用强于(+)-SPFF约3.5倍。此外,SPFF、(-)-SPFF和(+)-SPFF(0.01、0.1和1μM)对致敏大鼠肺组织接触过敏原时释放组胺具有相似的抑制作用,在不影响小鼠气道粘液分泌的情况下,(-)-SPFF(0.04、0.10mg.kg~(-1))和(±)-SPFF(0.10、0.25 mg.kg~(-1))明显促进家鸽气道纤毛的转运功能,而(+)-SPFF(0.04、0.10和0.25 mg.kg~(-1))对家鸽气道纤毛的转运没有促进作用。静脉注射和口服(-)-SPFF对小鼠的LD_(50)(95%confidence limits)分别为55.7(51.6～59.8)和468.3(393.0～543.6)mg.kg~(-1),而静脉注射和口服(+)-SPFF对小鼠的LD_(50)分别为36.2(33.4～39.2)和297.5(257.5～343.7)mg.kg~(-1),提示(-)-SPFF的毒性低于(+)-SPFF。 此外,我们从激动剂在细胞外与受体的结合特征及在细胞内产生的效应([Ca~(2+)]_i)两方面初步探讨了(±)-SPFF及其对映异构体的作用机制。分别以豚鼠肺和心房组织作为β_2-AR和β_1-AR的来源,以碘标左旋吲哚洛尔((-)[~(125)Ⅰ]pindolol,IPIN)作为标记性配基的放射配基结合实验结果显示,(-)-SPFF对β_2-AR的亲和力分别高于(±)-SPFF 6倍和(+)-SPFF 164倍,这可能是(-)-SPFF扩张气道作用强度较高的原因之一。(-)-SPFF、(±)-SPFF和(+)-SPFF的选择指数(K_(i(atri))/K_(i(lung))分别为24.72、7.43和2.