有鉴于此,我们拟通过实验研究Ackl以及P130CAS在前列腺癌细胞株表达情况及可能的相互关系；再构建Ackl基因敲减干扰细胞株的稳定模型,对沉默Ack后的PC-3细胞株进行相关的细胞生物学实验研究及药物干预实验研究,研究AckI蛋白基因敲减后PC-3细胞的生物学行为的改变,以及对药物干预的影响,借以充分挖掘AckI以及P130CAS在Obeticholic Acid订购前列腺癌的发生发展以及药物治疗方面的作用。 研究方法 1.采用Western blot及RT-PCR方法检测AckI及P130CAS mRNA和蛋白在激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP及激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3中的表达水平。 2.利用慢病毒介导的RNA干扰技术试行构建逆转录shRNA干扰AckI质粒,NSC683864订单转染激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞,干扰PC-3细胞AckI蛋白的表达,构建低表达蛋白的模型,并通过荧光显微镜观察、PCR双酶切和免疫印迹对其验证。 3.体外采用MTT实验、平板集落形成实验、划痕愈合实验、Transwell实验等方法以及研究沉默后相关小G蛋白家族以及P130CAS蛋白的表达情况,从体外5-FU化学结构层面进行AckI基因表达调节作用机制研究。 4.观察shRNA沉默AckI基因对PC-3细胞多西紫杉醇化疗敏感性的影响,实验分为PC-3+DTX组、PC-3+NC-shRNA+DTX组和PC-3+AckI-shRNA+DTX三组,每组另外设一个未化疗的平行对照组。转染后24小时起给予终浓度为0.25μM多烯紫杉醇,MTT法测各组细胞生长增殖变化；流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞的周期分布。

目的探讨癌基因Aurora Kinase A在人乳腺癌组织、乳腺癌旁正常组织及乳腺良性病变组织中的表达及临床意义。方法应用组织芯片技术和免疫组织化学染色(PV二步法检测)检测Aurora Kinase A在94例人乳腺癌组织、36例乳腺癌旁正常组织及43例良性病变组织中的表达情况。结果1.在94例乳腺癌组织中Aurora Kinas获悉更多e A的阳性表达率为86.17%(81/95),36例乳腺癌旁正常组织及43例良性病变组织中阳性表达率为2.53%(2/79),有明显的统计学差异(p<0.05),也与Ki67具有正相关关系(P<0.05)。并与乳腺癌的各种分子分型明显相关(P<0.05)。
小细胞肺癌(Small-Cell Lung CanOlaparibcer,SCLC)是一种神经内分泌肿瘤,恶性程度高,但对初始治疗非常敏感,一线治疗有效率较高。但大约80%局限期小细胞肺癌及几乎所有广泛期小细胞肺癌均会复发,多在半年内出现疾病进展。复发后SCLC患者疾病进展加快,并且有效治疗药物较少,预后极差。目前认为复发性SCLC二线方案选择及治疗疗效更多倾向于初始治疗结束KRX-0401化学结构至复发间隔时间,对于复发间隔时间大于6个月的SCLC仍可从初始化疗方案中获益,并进一步规定复发间隔时间3-6个月为敏感性复发,而对于复发间隔时间小于3个月或初始治疗无效为难治性复发。虽然美国国立综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network,NCCN)在两种复发类型的二线推荐药物治疗上基本相同但两者在对同一化疗药物的反应性及长期生存期均有明显差异。

2).用免疫印迹检测BRCA1/2与Aurora-A之间的关联。 3).通过细胞计数和软琼脂克隆试验分别绘制细胞生长曲线和克隆形成率柱状图。 4).用流式细胞术检测细胞周期进展。 5).细胞放化疗处理后用流式细胞术检测细胞凋亡水平。 6).免疫印迹检测BRCA1/2对DNA损伤应答蛋白(p53, pp53, ATM, Chk2, RAD51, yH2AX)的影响。 结果RAD001数据表： 第一部分 Aurora-A可促进细胞增殖,细胞周期进展和软琼脂克隆形成,而Aurora-A沉默可抑制细胞增殖,细胞周期进展和克隆形成。 第二部分 放化疗处理后,Aurora-A转入的细胞系凋亡明显降低,而Aurora-A沉默或者用Aurora-A抑制剂VX680处理的细胞系凋亡明显增加；顺铂处理后,Aurora-A转入的细胞系IC50增加,AUY922而Aurora-A沉默的细胞系IC50降低。 第三部分 第一章.Aurora-A降低了放射后γH2AX灶点形成,且Aurora-A可异常调节DNA损伤应答。 第二章.ATM抑制剂可增加放化疗引起的肿瘤细胞凋亡,并且影响DNA损伤应答蛋白表达。 第三章.BRCA1/2与Aurora-A负相关,且BRCA1/2可抑制细胞增殖,体外克隆形成和细胞周期JNK抑制剂进展,并可通过影响DNA损伤应答增加放化疗引起的细胞凋亡。 结论： 研究发现,Aurora-A过表达可促进肿瘤细胞增殖,细胞周期进展,软琼脂克隆形成,并可直接或者间接通过上调ATM表达,下调BRCA1/2表达,调节DNA损伤应答,促进肿瘤放化疗抵抗；相反的,Aurora-A沉默可抑制细胞增殖,细胞周期进展,软琼脂克隆形成,并可直接或者间接通过下调ATM表达,上调BRCAl/2表达,调节DNA损伤应答,促进肿瘤放化疗敏感。

2.建立人卵巢癌细胞的裸小鼠移植瘤模型,蛋白印迹法(Western blot)检测肿瘤复发的过程中,肿瘤组织CD44蛋白表达水平的变化。3.Western blot和细胞免疫荧光法检测细胞的CD44蛋白表达水平。4.MTT法和3D细胞培养法分别检测细胞的增殖能力和细胞球体形成能力。5.MTT法检测细而且胞对化疗药物紫杉醇的敏感性。6.采用划痕修复实验和基质胶侵袭实验,分别检测细胞的迁移和侵袭潜能。7.采用Graph Pad Prism 5软件进行数据的统计分析,所有数据表示为均数±标准差。两组数据间的比较方法为双侧Student’s t-test或Mann-WhitneyRaf抑制剂’s检验。无病生存期分析和总生存期分析方法为Kaplan-Meier survival curves和Gehan-Breslow-Wilcoxon test。以α=0.05作为检验水准。结果1.原发卵巢癌组织与转移/复发卵巢癌组织中CD44蛋白表达水平比较及高表达CD44与selleck卵巢癌患者生存期的相关性。(1)免疫组织化学染色人类卵巢癌组织芯片的结果表明,原发,转移和复发卵巢癌组织CD44表达相对评分分别为1.43,2.06和2.04。其中转移组与原发组比较P<0.05,复发组与原发组比较P<0.05。(2)生存分析结果显示,高蛋白表达水平的CD44与卵巢癌患者总生存率关联性P<0.05,CD44与无病生存率关联性P0.05)。

ALK与ph染色体形成的致瘤性BCR/ABL酪氨酸激酶同源,现在针对ABL酪氨酸激酶的研究进展较快,其特异性抑制剂STI571已经在临床上成功治疗了BCR/ABL(+)的白血病患者。因此ALCL倍受关注,研究的焦点一部分集中于探讨该类染色体易位产生的酪氨酸激酶在肿瘤的发生发展中所起作用,但是ALK在原发系统型ALCL中,除了作为致瘤性很少酪氨酸激酶对ALCL的发生有重要的作用外,还在预后预测中有着比较特殊的地位,大部分的报道认为,ALK(+)是ALCL中最重要的预后指标,在美国、欧洲、日本的一系列研究中,ALK(+)与预后良好有关;因为ALK(+)ALCL对治疗的反应良好,接受经典CHOP化疗方案后完全缓解率高,少数的复发病人仍保持着对化疗敏购买Verteporfin感。 尽管大多数研究者在临床研究中得到了ALK与ALCL良好预后具有正相关关系的结果,但ALCL中ALK对预后影响的机制目前并未得到良好诠释。因此本研究从ALCL病人临床病情、诊治过程、生存随访入手,首先验证ALK(+)ALCL和ALK(-)ALCL对治疗的不同反应性及ALK对预后产生的影响,然后从可能与ALNVP-BKM120供应商K有关的机体免疫、肿瘤转移、侵袭、粘附、凋亡因子中寻找ALK对ALCL预后良好影响的可能机制与信号传导途径,并在细胞株中用不同方法抑制ALK的酪氨酸激酶活性表达后,实验验证这条信号传导途径对预后相关因子的影响,为ALCL预后判断及靶向治疗提供理论与实验依据。 方法 1 ALCL病人的病情与生存时间随访及ALK与预后的关系 本部分对34例ALCL进行了病情和生存状况随访,其中4例病人失访。

结论新辅助化疗能有效杀死肿瘤细胞,抑制肿瘤组织的生长,使肿瘤组织缩小,提高临床手术的切除率。AKT和CDK2作为参与非小细胞肺癌发生发展的重要基因。新辅助化疗能有效降低肿瘤基因AKT和CDK2的RNA及蛋白表达,且随化疗疗程延长及患者联合化疗的应用,AKT基因表达降低,CDK2基因表达的降低更为明显。
鼻咽癌(NPC)是一种与Epstein-Barr病毒(EBV)感染密切相关的鼻咽部黏膜上皮恶还有性肿瘤,对放疗较敏感,但大多数患者在初次确诊时已有局部淋巴结或远处转移,处于临床Ⅲ或Ⅳ期[1],晚期患者放疗后仍有30%~40%发生远距离转移和局部复发[2],侵袭和转移仍是威胁患者生存的关键因素之一。上皮—间质转化(EMT)是肿瘤发生侵袭转移的重要机制,且与NPC原位侵袭和远处转移密切相关。现将EMT
在我国,结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,且是癌症相关死亡因素的第Osimertinib供应商三大主要原因。近年来,结直肠癌的发病率和病死率呈逐年上升的趋势。在结直肠癌的发生、发展过程中,PI3K/Akt/mTOR信号通路的异常活化起到十分重要的作用。其中,Akt作为该通路的中间信号分子,在蛋白质合成、细胞代谢、细胞增殖与分化、抗凋亡及血管新生等事件中均起到十分关键的作用。本文就Akt信号分子及其在结直肠癌发生发展中的作用以及对结直肠癌预后和生存的影响进行综述。或者
磷酸肌醇3激酶(PI3K)通路是一个关键的信号转导系统,它可将癌基因和多种受体与许多细胞功能联系在一起,还是肿瘤中最常被激活的通路。靶向PI3K同工酶和通路中包括AKT和mTOR在内的其他主要节点的抑制剂已进入临床试验阶段,但存在一定问题。本文重点阐述人们在理解PI3K通路方面取得的进展,并讨论研发靶向这条通路的抗肿瘤药物的机遇与面临的挑战。
目的观察羧胺三唑对肺腺癌细胞A549细胞自噬的影响,探究自噬调节在羧胺三唑抗肿瘤增殖作用中的角色。

JNK特异性抑制剂sp600125和p38特异性抑制剂SB203580对于TAK165和ATRA协同诱导分化效应影响不大。但是加入MEK特异性抑制剂PD98059,U0126后,TAK165与ATRA合用组细胞分化水平有明显的下降,CDllb阳性率从82.37%±0.37%到56.22±0.68%,36.5%±2.88%。此外,Western bo很少lt结果显示,PD98059和U0126作用与NB4细胞后,会明显抑制TAK165和ATRA合用引起的STAT1蛋白发生磷酸化激活。以上结果说明,MEK/ERK信号通路通过调控了STAT1的活性,进而影响了TAK165和ATRA协同诱导分化过程。结论：本论文较为系统地讨论了TAK165与ATRA协同诱导AML细胞分化效应,Epigenetics抑制剂并对其分子机制进行了初步探讨。研究表明,TAK165可以通过激活MEK/ERK信号通路,调控RARa/STAT1轴的激活,进而促进ATRA对于HL60和NB4细胞的诱导分化效应。本研究首次提出TAK165与ATRA协同可诱导AML细胞分化,为临床上髓性白血病的治疗提供了一种崭新的基于诱导分化的联合治疗策略。
组蛋白乙酰化selleck compound library是非常重要的一种与DNA复制以及基因活化相关的转录后修饰,它是由两种相互拮抗酶组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylases, HDACs)和组蛋白乙酰基转移酶(Histone Acetyl Transferases, HATs)共同调节的可逆过程。HDACs与细胞周期、转录调控以及细胞凋亡相关,当细胞和组织中的一些HDACs过度表达时,细胞周期调控基因的正常表达就会受到破坏,导致肿瘤的发生。

方法 1.使用Gateway技术构建人RIP3慢病毒过表达载体。使用酶切连接技术构建RIP3慢病毒十扰载体。 2.携带人RIP3基因的重组HIV-1慢病毒与携带RIP3shRNA序列的慢病毒分别转导野生型U251(U251-WT)细胞株,通过G418筛选转导后的U251,Western blot鉴定RIP3的表达情况。 3.使用AnnexPD98059in V/PI双染法检测U251-WT细胞、U251-RIP3细胞,U251-shRIP3细胞的死亡情况,进一步使用广谱Caspase抑制剂zVAD验证死亡方式。 4.使用CellROXTM Deep Red试剂检测U251-WT细胞、U251-RIP3细胞,U251-shRIP3细胞中ROS的表达水平,研究ROselleck chemicalS在RIP3诱导的细胞死亡中的作用。 5.ELISA法检测上述U251-WT细胞、U251-RIP3细胞,U251-shRIP3细胞中的TNF-a的分泌情况,研究其在RIP3诱导的细胞死亡中的作用。 6.MTT检测上述U251-WT细胞、U251-RIP3细胞,U251-shRIP3细胞的生长情况。 7. WesEpigenetics抑制剂tern blot法检测上述三株细胞中PI3K/Akt信号通路中关键因子Akt的磷酸化情况。 8.MTT法检测上述三株细胞对TMZ的敏感性差异。使用Annexin V/PI双染法检测U251-WT细胞、U251-RIP3细胞在temozolomide作用下的死亡情况。 9. Western blot法检测U251-WT, U251-RIP3, U251-shRIP3中PARP-1的表达情况。

3.为进一步探讨TROP-2分子机制,采用核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷铵(PDTC)处理TROP-2过表达细胞株,以未用PDTC处理的慢病毒TROP-2组作为对照,分别采用定量PCR和Western Blot方法检测癌细胞E-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-9基因和蛋白水平。结果1.TROP-2,E-钙黏蛋白,很少波形蛋白和MMP-9蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为81.25%,16.25%,48.75%和72.5%。结直肠癌组织中,TROP-2表达与肿瘤的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移及5年生存率相关(P<0.05);E-钙黏蛋白表达与肿瘤部位、浸润深度及5年生存率相关(P<0.05);波STI571分子量形蛋白表达与肿瘤的TNM分期、浸润深度、淋巴结转移及5年生存率相关(P<0.05);MMP-9表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及5年生存率相关(P<0.05);划痕修复试验检测发现,空白对照组、空载对照组和TROP-2慢病毒组痕间间距分别为389±5(μm)、395±3(μm)和158±5这个(μm)(P<0.01)。Transwell方法检测发现,空白对照组、空载对照组和TROP-2慢病毒组侵袭细胞数分别为89±4、92±5和139±6(P
目的通过对卵巢上皮细胞癌病例中Cyclin H的表达情况及其与临床病理、生存之间的关系,以及干预卵巢癌细胞Cyclin H的表达对细胞生物行为改变的研究,探讨Cyclin H在卵巢癌发生及发展中的作用及其可能的机制。

5的为下调,FC在0.5到2之间为无显著变化。结果表明,0.5h时有154个基因上调表达,188个基因下调表达；1h时有213个基因上调表达,223个基因下调表达；3h时有531个基因上调表达,665个基因下调表达。3个时间点都上调的基因有75个,都下调的基因有81个。 进一步对差异表达的TCS基因分析发现,SSU05_0427、SSU05_0906、 SSU05_0944、SSU05_1358、SSU05_1595、SSU05_1660和SSU05_1685等7个基因一直上调表达；而SSU05_0883、SSU05_2090,2个基因一直下调表达；SSU05_0430、SSU05_1910和SSU05_2148,3个基因先下调表达后上调表达；SSU05_1094基因先上调表达,然后下调表达。

3.TCS基因缺失突变株对致病性和炎症反应的影响 在SS2与天然免疫细胞猪中性粒细胞的相互作用过程中,双组份调控系统基因呈现不同的表达情况,且在不同时间发挥作用。1094HK/RR、1660HK/RR和1910HK/RR基因分别在免疫反应的早期、中期和后期发挥作用。 以CD-1小鼠为模型,动物实验结果表明,双组份调控系统基因1910HK/RR、1094HK/RR和1660HK/RR缺失后,降低了宿主促炎症因子的表达水平,在12小时宿主炎症反应最为强烈；SS2抵抗PMNs吞噬的能力,以及SS2的致病性明显降低。
心肌重构是一种引起多种心血管疾病发病率和死亡率显著升高的独立危险因素，可引起心力衰竭和恶性心律失常，最终导致死亡。逆转左心室肥大和重构已成为当前抗高血压和治疗慢性心力衰竭的重要目标之一。汇利心康（HLXK）是本实验室针对在心肌重构过程中发挥关键作用的Gq蛋白α亚单位羧基末端，设计制备的一种多肽药物，能通过抑制Gq蛋白信号传导，有效抑制血管紧张素Ⅱ和去甲肾上腺素诱导的离体心肌细胞肥大反应，以及多种不同动物模型的心肌重构。 Apoptosis Compound Library molecular weight 寻找更多 然而，心肌细胞的信号转导系统是一个十分复杂的网络，由众多的神经体液分子、受体、G蛋白、效应器、第二信使、转录因子等共同组成。其中多个信号分子之间都存在着反馈调节和交互作用，任何一个节点的变化都可能对整个网络系统产生影响，从而精细调控整个细胞的信号转导乃至组织器官功能。HLXK拮抗Gq功能后，不仅会影响Gq蛋白下游信号分子的表达和功能，而且可能对其他通路的信号分子产生影响。因此，研究HLXK对心肌细胞信号转导网络的影响不仅有助于进一步深入理解其抗心肌重构作用机制，而且有助于了解其对心肌功能的整体影响。

方法： 1.动物分组：SHR雄性大鼠18只，随机分为模型组、氯沙坦组和HLXK组(n=6)，分别给予生理盐水（normal saline, NS）2ml/kg（ip, bid)、氯沙坦6mg/kg（ig, qd)和HLXK90μg/kg（ip, bid)，连续8W；并设立WKY大鼠正常对照，给予NS(2ml/kg, ip, bid)，连续8W。 2.实验过程中，密切观察大鼠的一般情况及其死亡情况。末次给药后，称量体重，颈椎脱臼处死，称重法测定大鼠的心脏指数和左心室指数。 3.采用定量PCR芯片技术检测大鼠心肌组织中心肌重构相关通路的信号分子表达情况。 4.结合PCR芯片筛选结果，采用Real-time PCR和Western blot进行验证。 结果： 1．与WKY大鼠相比，SHR出现明显心肌重构；HLXK能明显降低SHR大鼠的心脏指数和左心室指数，改善左心室重构； 2．在SHR心肌重构信号传导网络中，信号转导分子表达明显上调的有Serpine1、Jun、S1pr3、Max、Grm1、Il1r1、Cdkn1a、Crhr1、Chhr2、Ctgf、Edn1、Fgf2、Bcl2l1、AC5和Akt1；表达明显下调的有Bai1、Ccnd1、Gcgr、Nos2(iNOS)、Pik3cg、Ptgdr、Sctr、Tnf和Vcam1。

3．RT-PCR芯片结果显示HLXK能有效抑制Cdkn1a、Ctgf和Edn1基因表达，上调Grm4、Nos2和Tshr基因的表达。 BMS-754807浓度 4．HKXK能明显增加SHR α-MHC mRNA的表达，降低CaN mRNA、CDKN1AmRNA和β-MHC mRNA的表达； 5．HKXK能明显增加SHR α-MHC蛋白表达，降低CaN、CDKN1A和β-MHC蛋白表达。 结论： 1．自发性高血压大鼠发生明显心肌重构，其心肌细胞信号转导网络明显紊乱，数条信号通路的多种神经体液因子、生长因子、受体、效应酶，细胞周期调节蛋白、癌基因和肥大相关基因表达失衡。 2.多肽药物汇利心康能明显改善SHR心肌重构。 3．汇利心康抑制心肌重构作用与其下调CDKN1A、CTGF、ET-1、CaN表达，上调GRM4、NOS2和TSHR表达，纠正α-MHC和β-MHC的表达失衡有关。
目的体外培养骨骼肌L6细胞，诱导其分化成熟，采用棕榈酸诱导的方法，建立骨骼肌L6细胞胰岛素抵抗（IR）模型。给予不同条件的人工干预，探讨骨骼肌源性脂联素对胰岛素抵抗模型中GLUT4表达的影响，及其中p38MAPK信号通路的地位和作用。 方法（1）体外培养大鼠L6成肌细胞并诱导分化为成熟骨骼肌L6细胞，给予不同浓度（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mmol/L）的棕榈酸（PA），并应用葡萄糖氧化酶法分别测定不同时间（2、4、8、12、24、36h）细胞培养上清液葡萄糖浓度，观察不同浓度PA对L6细胞摄取葡萄糖的影响，据此判断胰岛素抵抗模型建立成功与否。（2）根据干预条件的不同，实验分为四组：NC组（对照组，骨骼肌L6细胞组）；NC+SB组(对照+阻滞剂SB203580组)；IR组（胰岛素抵抗模型组）；IR+PIO组(胰岛素抵抗模型+吡格列酮组)。应用Western blot方法分别测定上述四组APN、p-p38MAPK和GLUT4蛋白表达水平。 结果(1)0.4mmol/L的棕榈酸在作用12、24、36h以及0.6，0.8mmol/L棕榈酸作用8、12、24、36h，或1.0mmol/L棕榈酸作用4、8、12、24、36h后，细胞培养上清液中葡萄糖含量，明显高于对照组（P＜0.05）。据此判断胰岛素抵抗模型建立。（2）Western blot结果显示：①与NC组比较，IR组APN和GLUT4蛋白表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05），而p-p38MAPK虽减少，但无统计学意义（P＞0.05）；②与NC组比较，NC+SB组p-p38MAPK和GLUT4的蛋白表达减少（P＜0.05），差异有统计学意义，尽管APN蛋白表达水平减少，但无统计学意义（P＞0.05）；③与IR组比较，IR+PIO组其APN、p-p38MAPK和GLUT4蛋白表达增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论1.大鼠L6肌细胞株通过培养并分化成熟后，经过一定浓度和时间的棕榈酸诱导，可以建立大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗模型；2.大鼠L6肌细胞可以分泌和表达脂联素，并影响L6肌细胞GLUT4蛋白的表达；3.