Morris水迷宫实验结果：与空白对照组比较,10%CIH组、10%CH组大鼠在第4、6、8周逃避潜伏期时间延长、跨越目标象限时间缩短；且第六周时变化明显。5%CIH组从第2周开始,随低氧时间延长动物逃避潜伏期时间明显延长、跨越目标象限时间明显缩短,且这种变化比10%CIH组更加显著,与10%CH组比较,10%CIH组动物第6、8周、5%CIH组大鼠第2、4、6、8周避潜伏期时间明显延长、跨越目标象限时间显著缩短。 selleck 2.形态学检测结果：①光镜：对照组大鼠海马区神经元结构完整,排列整齐,染色均匀。低氧组海马区出现变性坏死神经元,表现为神经细胞胞体收缩呈三角形,胞浆嗜色性减弱,核皱缩浓染,核溶解及空泡样变。与对照组比较,10%CH组4、6、8周海马CA1区存活神经细胞密度均降低；间歇低氧组大鼠第2、4、6、8周海马CA1区存活神经细胞密度均显著降低；5%CIH组大鼠10%CIH组更明显；10%CH和10%CIH组大鼠存活神经细胞密度降低第六周时变化明显。②电镜：空白对照组动物海马神经元核大圆,核仁清晰,核质均匀,核膜光滑边缘清晰,细胞器丰富完整。低氧组可见神经元细胞水肿、核染色质浓缩聚集、核仁及细胞器消失、核膜断裂；粗面内质网排列紊乱及脱颗粒；线粒体肿胀、空泡变性及嵴消失；突触结构分界不清；轴索排列紊乱、断裂。

3.磷酸化p38MAPK免疫组化结果：与对照组比较,10%CH.10%CIH、5%CIH组大鼠在第2、4、6、8周海马CA1区磷酸化p38MAPK免疫反应性均明显增高,于第6周达高峰；与10%CH组比较,10%CIH组和5%CIH组第2、4、6、8周海马CA1区磷酸化p38MAPK免疫反应性显著增高(P<0.05)、且5%CIH组较10%CIH组增高更明显(P0.05)。三组低氧组大鼠海马区磷酸化p38MAPK表达第2、4、6、8周随时间延长明显增高,于第6周达高峰(P<0.05)。与10%CH组比较,10%CIH组和5%CIH组第2、4、6、8周海马CA1区磷酸化p38MAPK表达显著增高(P<0.05)、且5%CIH组较10%CIH组增高更明显(P
卵巢癌是女性常见肿瘤，位居女性肿瘤发病率第五位和妇科肿瘤致死率第一位。手术和基于铂类药物的联合化疗是其常规治疗手段，但是因其近70%复发和耐药的形成，致使其五年期生存率不高于40%。所以对卵巢癌耐药机制的深入研究尤为必要。 研究显示，卵巢癌耐药的产生与抗凋亡的Bcl-1家族成员（如Bcl-2、Mcl-1和Bcl-XL等）高表达紧密相关，这使得抗凋亡和促凋亡相之间的平衡发生倾斜，促使细胞逃逸凋亡而产生耐药。近年来将靶向于Bcl-2家族抗凋亡蛋白的特异性抑制剂应用于肿瘤治疗，相关基础研究不断增加。现已开发了一系列模拟促凋亡成员BH3结构域的小分子抑制剂（如ABT-737/263、Obatoclax和AT-101等）。新型BH3模拟物S1能够同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-2、Mcl-1和Bcl-XL，并具有较高的亲合力。已有报道显示S1能够诱导胶质瘤细胞U251、白血病细胞K562、肝癌细胞SMMC-7721、肺癌细胞SCLC、卵巢癌细胞SKOV3和SKOV3/DDP等多种肿瘤细胞系发生凋亡。

GDC-0449研究购买 本研究室已有研究显示S1在胶质瘤细胞及卵巢癌细胞中，经由线粒体途径介导了凋亡的发生，同时也发生了内质网应激（Endoplasmic reticulum stress，ERS）途径诱导的凋亡，内质网凋亡蛋白Caspase-4信号级联及(c-Jun N-terminalkinase, JNK)途径被激活。ERS触发的未折叠蛋白反应（Unfolded ProteinResponse，UPR）既可能作为适应性途径缓解细胞所面临的应激状态，也可能因严重应激而促使细胞发生凋亡。目前认为，UPR信号途径可以诱导细胞自噬而发挥抵抗凋亡的效应，而Bcl-2家族蛋白与UPR、自噬和凋亡等信号转导途径密切相关。因此，靶向抗凋亡蛋白Bcl-2的BH3模拟物则通过直接或间接影响这些信号转导途径而决定细胞的命运。研究结果显示UPR信号途径的主要通路之一(inositol-requiring

kinase1, IRE1)可激活JNK，JNK既能激活凋亡信号，又能介导自噬的活化，还能够调节活性氧（Reactive oxygen species，ROS）的生成，对细胞命运的决定至关重要。然而，已有研究多采用JNK广谱抑制剂，无法区别与验证JNK亚型的作用，最近发现的新的特异性抑制剂等为研究JNK亚型的功能提供了可能。 购买Talazoparib 本研究中，我们采用BH3模拟物S1处理人卵巢癌耐药细胞，以高通量方式对UPR信号通路相关84个基因进行筛选，发现JNK3持续高表达，并通过应用特异性抑制剂Ⅻ和siRNA对JNK3表达在人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP中的作用及机制进行了探讨。 方法 (1) MTT法检测BH3模拟物S1处置卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP存活率。 (2) S1处置卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP，采用PCR array法检测UPR信号通路84种基因变化，筛选差异表达基因；qPCR确认JNK1、JNK2和JNK3表达基因变化；Western Blot分析JNK3蛋白表达变化。 (3)根据JNK3的基因序列（GenBank：NM_002753）以及RNAi设计原理，构建三条寡核苷酸序列沉默其表达，命名为Si1，Si2和Si3，并通过荧光标签、RT-PCR、Western blot等技术进行验证，筛选有效沉默序列。 (4)利用JNK3特异性抑制剂Ⅻ和siRNA进行干预，光镜下观察细胞形态变化，MTT法检测细胞存活率；TUNEL染色法检测凋亡变化。 (5)利用JNK3特异性抑制剂Ⅻ和siRNA进行干预，Western blot分析Bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白的表达；Western blot分析JNK下游信号分子c-Jun、p-c-Jun、p53、Noxa和Bax蛋白表达变化；JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电势的变化；同时，Western blot分析细胞内质网应激相关蛋白Grp78和CHOP的表达。 (6) DCFH-DA染色观察人卵巢癌耐药细胞ROS水平；抗氧化剂NAC预处理细胞后合用S1和抑制剂Ⅻ，MTT法检测细胞存活率。 (7) AO及Lyso-Tracker Red染色检测胞内酸性结构累积情况；Western blot检测LC3-Ⅱ及p62蛋白的表达；自噬抑制剂氯喹与S1合用检测存活率。 结果 1.