5%,猪油10%,蛋黄粉10%,维持料59.5%,蔗糖20%)喂养,高胆固醇+阿伐他汀组在给予小鼠高胆固醇饲料喂养的同时,并用阿伐他汀5

EGFR抑制剂 mg/(kg.d)灌胃,12周后获取血和肝脏。分析血清胆固醇和低密度脂蛋白的变化;肝脏组织切片用于HE染色以观察肝脏组织学病变;应用免疫组化PV法检测肝脏组织中OPN的表达;从冰冻肝脏组织中提取蛋白,用Western blot方法检测OPN变化。我们首先用不同浓度(0、5%、10%)兔高胆固醇血清刺激人肝癌细胞(HepG2)24h,分析OPN表达和ERK、p38磷酸化水平变化情况,再选取明显诱导HepG2细胞OPN表达变化的高胆固醇血清浓度,同时用不同浓度的阿伐他汀刺激HepG2细胞24h,分析OPN表达和ERK、p38磷酸化水平变化。结果:ApoE基因敲除小鼠高胆固醇血症模型复制成功,ApoE基因敲除小鼠在高胆固醇饮食12周后,与正常对照相比血清中胆固醇和低密度脂蛋白含量显著增加(P<0.05,P<0.05);高胆固醇饮食12周加喂阿伐他汀,与高胆固醇饮食组相比血清中胆固醇和低密度脂蛋白含量显著降低(P<0.05,P
【背景】肿瘤的多药耐药(multidrug resistance,MDR)现象是导致化疗失败的主要因素,也是影响患者生存的主要因素。据统计[1、2],有90%以上的肿瘤患者其化疗失败的原因不同程度地与MDR有关。而TGF-beta/Smads信号传导通路在调节肿瘤多药耐药起到非常重要的双向调节作用:肿瘤发生早期,TGF-beta通过其广泛的多细胞抑制达到肿瘤抑制因子的作用;肿瘤形成后期,则促进肿瘤细胞增殖的。 这个 P15,即细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B,又称Cdkn2b、INK4B,属INK4蛋白家族,又称多肿瘤抑制基因(MTS1)。P15系TGF-beta/smads信号传导系统下游区的十分重要的细胞生长周期的抑制因子,其表达受到TGF

beta的诱导,在TGF beta信号转导通路中主要介导G1期阻滞的作用[3、6]。通过Smad介导的转录和myc所致的生长阻滞的解除,TGF-β可以快速诱导P15在许多不同类型的细胞中的表达[7]。同时TGF-β抑制cdk2激酶活性,提高p15蛋白的表达水平[8]。 所以,本课题拟通过调节HepG2/CDDP耐药细胞株中p15蛋白的表达,进而探讨p15与HepG2/CDDP耐药细胞株多药耐药的相关性及其可能的调控作用机制。 【目的】⑴检测P15在HepG2/CDDP动态的耐药模型中的表达情况。⑵P15对HepG2耐药细胞的表型的作用;⑶探讨p15介导HepG2/CDDP细胞株多药耐药性变化的可能机制。 【方法】⑴采用低浓度逐步递增法,建立HepG2/CDDP动态的耐药模型[9、10、11];⑵将P15编码区片段插入pcDNA3.1以及构建P15正义表达载体,将HepG2耐药细胞分成3组,分别用P15正义表达载体、pcDNA3.1空载体利用脂质体转染到其中2组,另一组为阴性对照组,Western blot验证转染;⑶RT-PCR和Western blot检测P15的表达;⑷流式细胞仪检测HepG2/CDDP耐药细胞株内阿霉素的蓄积和潴留,并以此计算药物的泵出率;⑸流式细胞仪对转染细胞及其对照细胞进行细胞周期分析,并计算细胞的增殖指数(PI);⑹Western

还有 blot检测细胞膜药物转运相关蛋白MRP、P-gp蛋白的表达;⑺Western blot检测及细胞凋亡分子BCL-2、Bax的表达。 【结果】 ⑴成功用顺铂诱导HepG2耐药,并建立HepG2/CDDP耐药模型,耐药指数为6.75μg/ml; ⑵RT-PCR和Western blot检测P15在2.0μg/ml的CDDP诱导培养HepG2/CDDP耐药细胞24h、48h、3d、5d、7d后,随着HepG2/CDDP耐药细胞株耐药表型的增强,P15表达水平逐渐下降; ⑶成功构建p15正义表达载体;稳定转染细胞后建立P15表达升高的细胞系HepG2/CDDP-pcDNA3.1-p15,空载体对照细胞系HepG2/CDDP-pcDNA3.1及亲本细胞HepG2/CDDP,RT-PCR和Western blot验证转染成功,p15正义表达载体可上调P15的表达; ⑷HepG2/CDDP-pcDNA3.1-p15细胞内阿霉素的蓄积和潴留增高; ⑸HepG2/CDDP-pcDNA3.1-p15细胞增殖指数降低,细胞增殖能力减弱; ⑹HepG2/CDDP-pcDNA3.1-p15细胞的MRP、P-gp蛋白的表达下降; ⑺HepG2/CDDP-pcDNA3.1-p15细胞的Bcl-2表达下降,Bax表达上升。 【结论】 1. HepG2/CDDP动态耐药细胞模型建立成功; 2. P15随着HepG2/CDDP耐药细胞株耐药表型的增强,其表达水平逐渐下降; 3.

7%、63.3%、71.3%)明显高于癌旁组织(31.3%、14.0%、11.3%)及正常肺组织(35.7%、14.3%、7.1%),差异具有显著性(p<0.01),并与患者的临床分级,病理分化,有无淋巴结转移密切相关；生存期分析结果表明EzrinThr-567的异常表达与NSCLC的生存期密切相关(p<0.05),而在早期NSCLC中Ezrin与EzrinThr-567均与生存期密切相关(p
蛋白激酶B (PKB/Akt)作为良好的抗肿瘤药物靶点,已有多种PKB抑制剂被广泛研究并应用于肿瘤的治疗。其中ATP竞争性抑制,变构抑制剂,非ATP竞争性抑制剂和假底物抑制剂是当前研究最广泛的PKB抑制剂。但是由于PKB亚型之间及PKB与其它激酶间的氨基酸序列存在高度同源性,因此PKB抑制剂的选择性设计是PKB抑制剂研究领域的一个棘手的难题。 蛋白激酶选择性抑制机理的研究可以为选择性抑制剂的设计提供良好的基础。而分子动力学模拟方法由于可以通过评价蛋白激酶-抑制剂复合物体系的稳定性以及蛋白激酶与抑制剂之间的亲和力来研究蛋白激酶选择性抑制的机理,并在蛋白激酶选择性抑制剂研究方面得到了广泛的应用。

ARN-509供应商 而二氢嘧啶酮类化合物和螺杂环取代的吲哚类化合物分别具有广泛的生物活性与药理活性,可以作为抗肿瘤药,抗微生物药等。因此通过Biginelli反应合成二氢嘧啶酮类化合物和螺杂环取代的吲哚类化合物引起了人们广泛的研究兴趣。 因此,本论文围绕着PKB抑制剂设计合成、生物活性测试、分子模拟研究和Biginelli反应进行了以下研究： (1)、本文通过对PKA, PKBa, PKBa计算机模拟突变体和吡咯并嘧啶类抑制剂的9个复合物体系进行分子动力学模拟研究,在分析吡咯并嘧啶类抑制剂结合模式的基础上,从模拟的角度合理地解释了PKB抑制剂相对于PKA选择性抑制PKB的机制,并成功地验证了已报道的关于于PKB抑制剂相对于PKA选择性的一些实验研究结果。同时也提出了这类抑制剂的结构修饰规律,指导这类抑制剂的设计。 (2)、本文通过对PKBa, ROCK1, PKBa计算机模拟突变体和吡啶类抑制剂的7个复合物体系进行分子动力学模拟研究,在分析吡啶类抑制剂结合模式的基础上,从模拟的角度合理地解释了PKB抑制剂相对于ROCK1选择性抑制PKB的机制,成功地验证了已报道的关于PKB抑制剂相对于ROCK1选择性的一些实验研究结果。同时也提出了这类抑制剂结构修饰的规律,指导这类抑制剂的设计。 (3)、本文通过对PKBa与变构抑制剂的3个复合物体系进行分子动力学模拟研究,从模拟的角度合理地解释了变构抑制剂的作用机制和结合模式,成功地验证了已报道的关于PKB变构抑制剂的实验研究结果,并提出了这类抑制剂结构修饰的规律,指导这类抑制剂的设计。

Fludarabine (4)、本文通过对PKB非ATP竞争性抑制剂进行3D-QSAR研究,同时对构建的5个复合物体系进行分子动力学模拟研究,从模拟的角度合理地解释了非ATP竞争性抑制剂的结合模式和PKB亚型选择性机制,成功地验证了已报道的关于非ATP竞争性抑制剂的实验研究结果,同时根据非ATP竞争性抑制剂的3D-QSAR研究结果,提出了非ATP竞争性抑制剂结构修饰的规律,指导这类抑制剂的设计。 (5)、本文通过PKBa与肽类假底物抑制剂的3个复合物体系进行分子动力学模拟研究,从模拟的角度合理地解释了肽类假底物抑制剂的结合模式,成功地验证了已报道的关于PKB假底物抑制剂的一些实验研究结果。同时也提出了假底物抑制剂结构修饰的规律,指导这类抑制剂的设计。 (6)、结合PKB分子模拟的结果及相关实验结果,本文主要设计了9类化合物和合成了89个化合物,并对其中51个化合物进行了体外PKBa激酶的抑制实验。其它化合物有待进行激酶抑制实验。 (7)、本文研究了三氟甲磺酸镥崔花的和氯甲基二甲基氯硅烷(CMDMCS)参与的Biginelli反应。反应以醛/靛红化合物/缩醛,1,3-二羰基化合物/缩酮,脲/硫脲为起始原料,反应高收率地得到了22个二氢嘧啶酮类化合物。其中,三氟甲磺酸镥可回收和重复使用,而氯甲基二甲基氯硅烷廉价易得,因而为该类化合物的制备提供了新的合成途径,同时为该类化合物的进一步相关研究奠定了基础。
研究目的：

恶性肿瘤是严重威胁我国人民生命的重大疾病之一。作为恶性肿瘤治疗中的重要组成——化疗一直受到广泛的重视,而化疗药物也一直是药物研发的热点和重点。常用的抗肿瘤药物往往可以直接或间接地通过活性氧簇(Reactive Oxygen Species, ROS)来起到杀伤肿瘤细胞的作用,而一些病人对这些抗肿瘤药物的耐受也往往是由于一些抗氧化蛋白在肿瘤细胞内高表达所引起。ROS是一类含有氧的活性分子的总称,在生理条件下,ROS通常是有氧呼吸及有氧代谢的天然副产物,在细胞信号转导以及维持细胞稳恒中扮演着重要的角色；而在某些环境刺激下ROS会激烈产生,进而引起细胞内蛋白、细胞器以及DNA等相关生物结构的破坏。虽然激烈产生的ROS可以诱导细胞死亡,但是生理条件下的ROS却是十分重要的信号分子,可以调控细胞内的许多信号通路。最新研究表明ROS可以通过氧化修饰蛋白质,进而引发相关的生物学改变,但其中的分子机制尚未阐明。因此研究活性氧在诱导肿瘤细胞死亡过程中的机制,不仅有助于发现新的生命现象,更有机会发现其中可被人为干预的关键节点,从中发现潜在的抗肿瘤药物靶点,为研发新型抗肿瘤药物提供新思路。4-HPR 获悉更多 (N-4-hydroxyphenyl retinode,Fenretinide,4-羟苯基维胺脂)是合成的维甲酸衍生物,被公认是一种通过ROS发挥抗肿瘤活性的抗肿瘤药物。许多研究表明4-HPR具有肿瘤治疗作用,且在临床Ⅰ、Ⅱ期研究中发现4-HPR对多种肿瘤显示出了较好的抗肿瘤活性。鉴于ROS是4-HPR诱导肿瘤细胞死亡的重要原因,故我们拟以4-HPR作为分子探针,紧紧围绕蛋白质翻译后修饰这一环节开展系列研究,进一步探索ROS诱导的蛋白质翻译后修饰与抗肿瘤药物活性之间的联系。本课题的开展不仅有望阐明ROS诱导的蛋白质修饰调控抗肿瘤药物活性的分子机制,从中发现潜在的抗肿瘤药物药效学生物标记物,为氧化应激型抗肿瘤药物的临床应用提供指导,更有机会发现全新的抗肿瘤药物靶点,催生新型抗肿瘤治疗药物的研发。 研究方法： 1)研究抗肿瘤药物诱导的ROS对Akt蛋白翻译后修饰及其在诱导凋亡中的作用：细胞经Annexin V-PI染色后采用流式细胞术检测细胞凋亡；细胞经JC-1染色后采用流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位变化；应用Western blotting检测PARP, caspase3、caspase9、Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt(Ser473和Thr308)、GSK3β、p-GSK3β、.

5μmol/kg组，盐酸双苯氟嗪1.3μmol/kg组，盐酸双苯氟嗪0.7μmol/kg，氟桂利嗪（Flu）1.3μmol/kg组。采用线栓法制备大鼠局灶性缺血再灌注模型，各组在缺血再灌注的同时尾静脉注射给药，给药容积为0.2ml/100g。假手术组只行手术通路，不插线栓不给药。缺血2h再灌4h后测定神经症状、脑含水量、血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量，采用HE染色法光镜下观察组织病理变化，采用免疫组织化学染色法检测AQP-4蛋白的表达，以评价盐酸双苯氟嗪对缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其可能的机制。 点击此处 结果：（1）神经功能评价结果显示，假手术组大鼠未产生神经功能损伤，溶剂组大鼠神经功能评分为9.50±0.22，有明显损伤（P＜0.01）。盐酸双苯氟嗪大、中剂量组和Flu组与溶剂组相比有明显下降（P＜0.01），大鼠神经功能评分分别降至6.50±0.96、7.33±0.94和7.66±0.42。（2）脑

含水量测定结果显示，缺血再灌注损伤后脑组织含水量明显升高至82.24±0.23%，药物干预后，盐酸双苯氟嗪各剂量组与Flu组大鼠脑含水 量有明显降低，分别为大剂量组78.96±0.95%、中剂量组79.95±0.47%、小剂量组81.08±0.40和Flu组79.41±0.65%，抗脑水肿效果明显。（3）血清中SOD活性与MDA含量测定结果显示，缺血再灌注损伤后血清中SOD活性明显下降至24.86±0.86U/ml，MDA含量明显升高至6.11±0.05nm/ml，给予盐酸双苯氟嗪干预后，可减轻以上损伤，其中大剂量盐酸双苯氟嗪作用最为明显，SOD活性提高至61.79±1.09U/ml，MDA含量下降为4.64±0.05nm/ml。（4）HE染色结果显示，假手术组大鼠神经细胞未见明显病变。溶剂组大鼠缺血侧大脑皮层、纹状体和海马区出现严重的神经细胞变性坏死，胞体固缩，核浓缩深染，细胞与周围组织形成明显的间隙，出现空泡变性。高中低三个剂量的盐酸双苯氟嗪可以剂量依赖性明显改善上述病变。（5）免疫组化检测AQP-4蛋白表达结果显示，AQP4主要在血管周围的胶质细胞有阳性表达，表达部位为细胞膜。假手术组胶质细胞仅有少量AQP-4的表达，缺血再灌注以后梗死周边区域AQP-4的表达则明显增多。盐酸双苯氟嗪大剂量组（4.60±0.31）、盐酸双苯氟嗪中剂量组（6.10±0.37）以及Flu组（5.70±0.47）胶质细胞的AQP-4表达与溶剂组相比均有显著减少（P＜0.01）。

结论：盐酸双苯氟嗪能够通过清除自由基、抗脂质过氧化及减少梗死周边区域AQP-4的表达而减轻脑水肿程度，发挥神经保护作用。 目的：评价盐酸双苯氟嗪在糖氧剥夺/复氧所致海马神经元损伤中的保护作用以及机制研究 方法：体外培养原代海马神经元，7-8天成熟后，细胞随机分为I2h-R24h组、I4h-R24h组、I6h-R24h组、I8h-R24h组，通过MTT比色法测定细胞存活率，确定使用I6h-R24h作为糖氧剥夺/复氧模型。经I6h-R24h损伤后的细胞随机分为空白对照组、溶剂对照组、盐酸双苯氟嗪10μmol/L组、盐酸双苯氟嗪1μmol/L组、盐酸双苯氟嗪0.1μmol/L组和氟桂利嗪（Flu）1μmol/L组。分别测定各组神经元细胞MTT NVP-BEZ235核磁共振 OD值、LDH漏出、胞内钙离子浓度、NO含量、NOS活性、细胞凋亡率，以评价盐酸双苯氟嗪的保护作用并研究其机制。 结果：（1）经不同浓度盐酸双苯氟嗪干预的细胞，MTT测定的OD值明显增高，显示细胞活性升高，LDH漏出显著降低，表示细胞受损程度减小。（2）糖氧剥夺/复氧可致海马神经元胞浆内钙离子超载，盐酸双苯氟嗪可减轻由糖氧剥夺/复氧所致的海马神经元钙超载，其中高浓度组（238.50±7.73）与溶剂组(319.40±10.79)相比有显著性差异（P＜0.01）。（3）糖氧剥夺/复氧损伤会使细胞NO含量与NOS活性都明显升高，不同浓度的盐酸双苯氟嗪与Flu能够不同程度的改善此种损伤变化。（4）原位凋亡实验结果显示，正常对照组细胞可见有少量凋亡细胞（41.30±1.78），糖氧剥夺/复氧损伤使凋亡细胞数目明显增多（152.20±2.29，P＜0.01），盐酸双苯氟嗪可降低凋亡细胞数目，其中高浓度组（60.70±1.61）和中浓度组（100.10±1.94）与溶剂组相比有显著性差异（P＜0.01）。

Semagacestat分子量 结论：盐酸双苯氟嗪可能通过阻断糖氧剥夺/复氧所致海马神经元胞浆内游离钙离子浓度， NO含量以及NOS活性的升高，改善糖氧剥夺/复氧引起的海马神经元损伤，发挥抗凋亡的作用。
目的：对融合蛋白d-EGF二级、三级结构进行预测并分析其活性部位的可能影响，进行原核表达，并对表达产物进行分析鉴定。方法：以融合蛋白质基因序列为基础，用DNAStar软件预测其蛋白质的二级结构；用Insight II软件对其三级结构进行建模预测。在对融合蛋白理论预测的基础上，分别构建含β-defensin-3、EGF的重组质粒，应用重组PCR等方法，将EGF的基因序列融合到β-defensin-3DNA序列的3’末端，将融合基因克隆入原核表达载体pET-SUMO,构建目的重组质粒pET-SUMO-d-EGF。采用PCR、测序等方法对目的基因是否正确重组进行鉴定；以重组质粒转化大肠杆菌E.coli BL21（DE3），以IPTG诱导表达目的蛋白质，表达产物经过Ni-trap柱纯化，SDS-PAGE检测表达初产物及纯化产物。最后用Western-blot对其特异性进行鉴定；用MTT法检测其促细胞增殖活性；用纸片扩散法药物敏感试验、微量稀释法检测其抗菌活性。结果：采用DNAStar软件的Gamier Robson方法预测的结果表明，融合蛋白质d-EGF含较多的β折叠结构；Charge Density-Charge法预测蛋白质3-22、31-48区段带丰富的正电荷；Insight II软件分析显示重组蛋白d-EGF中原蛋白β-defensin-3、EGF三级结构中的活性必须的六个链内二硫键在融合蛋白中都能够正确形成，维持β-defensin-3三级结构的3个反向平行的β折叠片结构在融合蛋白中能够形成。融合蛋白的结构含有原蛋白β-defensin-3、EGF的生物活性结构。成功构建β-defensin-3、EGF重组质粒，经重组PCR成功扩增出294bp的目的片段，重组体PCR结果与预期结果一致，测序正确。转入重组质粒的E.

4%vs4.8%；胆石症26.8%vs13.5%；急性胰腺炎6.2%vs0.8%）；酒精性肝硬化并发上消化道出血、胆道感染及肝性脑病明显高于乙型肝炎肝硬化（上消化道出血31.9%vs17.5%；胆道感染14.4%vs6.4%；肝性脑病10.3%vs3.2%），并发肝癌明显低于乙型肝炎肝硬化（15.5%vs32.5%），酒精性肝硬化住院治疗的好转率、死亡率明显优于同期住院的乙型肝炎肝硬化，两者差异具有统计学意义（P
背景 肠易激综合征(Irritable bowel syndrome,IBS)是一种以慢性或反复发作的腹痛及排便习惯改变为特征表现的肠道功能性疾病，其主要特征表现为内脏高敏感性和胃肠道运动异常，但其神经生物学机制尚不完全清楚。新近研究表明，中枢神经系统中的小胶质细胞广泛参与内脏疼痛反应，且在其中可能起到较为重要的作用。本实验室前期研究发现，接受左半结肠及盆腔脏器初级神经传入信号投射部位的骶髓后联合核(Dorsal commissual nucleus，DCN)及骶髓后角中的星形胶质细胞和小胶质细胞与IBS致内脏高敏感性存在密切关系，并且初步证明小胶质细胞在内脏痛的“启动”方面可能发挥重要作用，但是小胶质细胞在此过程中发挥什么作用，如何参与内脏痛的产生与发展及其作用途径，将对揭示IBS发生的神经生物学机制起到关键作用，并对临床药物研发提供新的靶点。

那个 目的 ①采用旋毛虫一过性肠道感染大鼠，成功制作IBS大鼠模型；②通过对模型大鼠的峰值结肠扩张刺激，观察DCN和骶髓后角中小胶质细胞P2X4、P2X7、OX42的表达变化及腹直肌肌电电生理变化，用以证实小胶质细胞广泛参与内脏痛的发生、发展过程；③在上述研究的前提下，采用给予P2X7受体拮抗剂鞘内注射的方法，观察P2X7、 OX42、 IL-1β、 P38、CGRP(Calcitonin-gene-related peptide，CGRP)在骶髓后角和DCN上的表达变化以及实验大鼠腹直肌肌电的变化，论证小胶质细胞在IBS内脏敏化中的作用，为IBS神经生物学机制的完善提供理论基础，并为新的临床药物探索及研发提供理论依据。 方法 用旋毛虫悬液灌胃法建立一过性肠道感染大鼠的IBS模型，采用电生理学方法观察正常大鼠和IBS大鼠腹直肌肌电的变化；采用免疫荧光组织化学方法观察两者骶髓后角以及DCN中P2X4、P2X7、OX42、IL-1β、P38、CGRP的表达情况。 结果 1.

IBS结肠扩张刺激组大鼠腹直肌肌电、大鼠骶髓后角及DCN中小胶质细胞上P2X4和P2X7的表达，均较对照组及IBS未刺激组显著增强（P<0.01）,且干预组的IL-1β、P38、CGRP表达亦下降明显（P<0.01），大鼠腹直肌肌电变化与之类似，不论收缩频率还是波幅均显著下降（P
目的： 探讨轻型急性胰腺炎病人伴急性肝损害的临床特点、与胰腺炎病因的相关性、可能的发生机制以及对胰腺炎病程的影响。 方法： 对我院2009年1月-2012年3月消化内科收治的186例轻型急性胰腺炎病人病历资料进行回顾性分析,分析其中伴发急性肝损害者肝功能指标的异常程度、异常特点以及转归；按急性胰腺炎不同病因、年龄区间、性别分组比较急性肝损害的发生率并比较不同病因的轻型急性胰腺炎肝损害的严重程度；观察轻型急性胰腺炎病程中某些临床指标与并发肝损害之间的关系以初步探讨急性肝损害的发病机制；以住院天数、腹痛恢复时间以及血淀粉酶复原时间分析急性肝损害对轻型急性胰腺炎病程的影响。 mTOR抑制剂 结果： 186例轻型急性胰腺炎病例中伴发急性肝损害者122例,占同期纳入的轻型急性胰腺炎总数的65.6%；异常的肝功能指标转氨酶及胆红素变化范围较大,其中ALT、AST超过正常上限值三倍者分别有52例、44例,占各自异常总数的比例分别为60.5%、53.7%,大于10倍正常上限值的例数分别为6、12,,所占比例分别为7.0%、14.6%；就总体而言轻型急性胰腺炎伴发的肝功能损害以转氨酶和胆红素同时发生异常常见,胆源性轻型急性胰腺炎和非胆源性轻型急性胰腺炎相比,前者易出现转氨酶和胆红素同时升高,而后者以单纯胆红素升高多见；肝损害多在急性胰腺炎发病初(入院24小时内)即可出现,且大部分患者随原发病的转归或必要时结合保肝治疗肝功能逐渐恢复正常。不同病因的胰腺炎肝损害的发生率不全相同(P<0.05),老年轻型急性胰腺炎患者肝损害的发生率较中年、青年均高(P<0.017,P0.05)；胆源性轻型急性胰腺炎所伴发的急性肝损害较非胆源性者严重(P<0.05)。伴发急性肝损害的轻型急性胰腺炎其发病24小时血淀粉酶水平、入院查体存在腹膜刺激征的比例以及血糖发生异常的比例均较同期未伴有急性肝损害的胰腺炎高(P<0.05,P<0.05,P<0.05)。肝损害会延长轻型急性胰腺炎的住院时间、腹痛缓解时间以及血淀粉酶复原时间(P
目的通过研究脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞VEGF和PEDF表达的影响,了解其能否通过调整二者的动态平衡,延缓糖尿病肾病微血管病变的进展,进一步探讨其在DN中的作用。

点击此处 方法1、体外培养大鼠肾小球系膜细胞,经传代以后,据试验设计要求分别用含有不同的浓度的葡萄糖和(或)脂联素的培养液进行培养并据此分组,各组分别培养24h和48h后,用显微镜观察HBZY-1细胞的生长状态,于10×40放大倍数下拍摄。并用1.5ml的EP管收集各组细胞上清培养液,-20℃短期保存,进行下一步VEGF和PEDF蛋白表达的检测；所剩的细胞则立即进行两种因子mRNA的提取；2、采用RT-PCR两步法检测在不同浓度的葡萄糖和(或)脂联素的作用下HBZY-1细胞中VEGF和PEDF在mRNA水平的表达：3、采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测之前收集到的各组细胞在不同时间点的培养液中其VEGF和PEDF蛋白的表达量；4、用spssl3.0统计软件进行统计分析比较各组之间两者表达的差异。 结果1.在显微镜下观察,可见到大鼠肾小球系膜细胞呈梭形、不规则形、三角形、长纺锤形不等,大多数呈梭形。当加入高糖和脂联素处理后,和正常组相比较,各组细胞形态无明显变化。 2.大鼠肾小球系膜细胞无论在正常浓度的葡萄糖还是在高糖环境下均可以表达VEGF和PEDF两种因子。 3.与正常葡萄糖浓度的对照组相比,高糖各组VEGF及其mRNA的表达水平升高,PEDF及其mRNA的表达水平下降,差异具有统计学意义(P<0.

背景 胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,在癌症相关的疾病中,胃癌是导致男性死亡的第三大死因；也是女性死亡的第五大原因。胃癌在发展中国家中高发,占世界发病率的三分之二,这些国家包括日本,中国,南美,东欧,以及中东地区等。在中国,胃癌的发病率较高,占全世界的所有胃癌病例的42%。幽门螺杆菌(且pylori)是导致慢性胃炎、胃溃疡和胃癌的主要因素之一。H. pylori属于革兰氏阴性需氧菌,属于螺旋形杆菌有鞭毛结构。世界上50%以上的人口有幽门螺旋杆菌感染,但是由感染引起的胃癌发病率较低。在发展中国家,80%的人口被感染,而发达国家的感染率为20-50%。幽门螺旋杆菌细胞毒素相关抗原A(H.pylori cytotoxin associated antigen A, Cag A)是细菌的癌蛋白,在胃癌的发展中发挥重要的作用。Cag A的分子量是128kDa,由幽门螺旋杆菌的40kb的CAG-致病岛(cag-pathogenicity island, cag PAI)所编码。Cag A是由Ⅳ型分泌系统分泌,在进入胃上皮细胞之后,发生磷酸化反应,通过促进细胞散射而导致幽门螺旋杆菌相关的疾病的发生。

某些糖链在胃癌细胞表面异常表达,如ABH血型抗原和Lewis相关糖抗原等。岩藻糖是的糖链的重要成分之一,参与合成一些重要的生长因子受体,在胃癌发展的过程中发挥重要作用。岩藻糖基化在肿瘤发生发展过程中有重要的作用。研究发现,岩藻糖基化反应在许多癌症中,如乳腺癌、前列腺癌、肺癌和胃癌异常增高。岩藻糖基转移酶IV(fucosyltransferase BMS-754807浓度 Ⅳ, FUT4)是路易斯Y(LewisY,LeY)合成的关键酶。LeY是双岩藻糖化的寡糖,在60–90%的上皮来源的癌症中高表达。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)的糖基化反应在肿瘤细胞增殖的过程中起着重要的作用。幽门螺旋杆菌感染后,能抑制EGFR的活化,调节细胞的增殖,分化和凋亡。 由于缺乏特异的诊断指标和有效的治疗手段导致胃癌具有高的死亡率。在中国,胃癌的发病率很高,是癌症死亡的首要原因。尽管近年来胃癌的治疗方法改进,但仍然有较高的转移率和死亡率。因此,发现新的生物标记物对于诊断和治疗幽门螺旋杆菌感染及预防胃癌具有重大的意义。塞来昔布(Celecoxib)是环氧化酶2(Cyclooxygenase2,

点击此处 COX-2)抑制剂,可以通过下调的环氧化酶-2(COX-2)的表达抑制胃癌细胞的增殖。COX-2的在不同类型的癌症(包括胃癌)高表达。在胃癌中,H. pylori通过增加COX-2的表达调节细胞增殖和凋亡。但是塞来昔布的治疗效果差,这限制了塞来昔布在临床的应用性。因此,制定更好的策略来提高塞来昔布的疗效有重要的临床意义。LeY寡糖抗体在临床上广泛应用来治疗不同类型的癌症。因此,联合使用塞来昔布和LeY寡糖抗体可能有效地治疗胃癌。 人参皂苷(Ginsenoside, Rg3)是中国草药,能抑制细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。SP1和HSF1是FUT4的转录因子,在LeY寡糖合成调解过程中发挥重要作用。前期研究发现,Rg3通过SPl和HSF1下调FUT4的表达,从而诱导胃癌细胞的凋亡。而CagA与岩藻糖基转移酶在胃癌中的相互关系尚未明确。在本文中,我们分析CagA与岩藻糖基转移酶的相关作用及其作用机制。此外,讨论联合塞来考昔、LeY寡糖抗体和Rg3在细胞增殖和凋亡中的治疗效果。 II.目的 1.我们通过对胃炎,胃溃疡和胃癌组织和血清样品分析讨论CagA与EGFR的激活、FUT4口LeY寡糖之间的内在联系。此外,研究H, pylori中CagA促进胃癌细胞增殖的作用机制。 2.我们在胃癌患者的组织和血清样品中研究H. pylori与COX-2及胃癌诊断标记物(CA724,和GRN)的相关性;及联合使用塞来昔布和LeY寡糖抗体对胃癌细胞增殖的抑制作用。 3.讨论Rg3治疗胃癌的作用机制。 III.实验方法 1.我们运用免疫组化分析胃炎,胃溃疡和胃癌组织和血清样品中Cag A与pEGFR、FUT4、COX-2、CA724、GRN及H. pylori的相关性。 2.我们运用ELISA分析胃炎,胃溃疡和胃癌组织和血清样品中Cag A与pEGFR. FUT4、COX-2、CA724、GRN及H. pylori的相关性。3.利用人胃癌细胞株(SGC-7901)进行体外实验,通过Western Blot研究CagA对细胞增殖的影响。 4.我们通过免疫染色分析在SGC-7901细胞中Cag A对细胞增殖的影响。 5.我们通过ELISA讨论在SGC-7901细胞中Cag

A对细胞增殖的影响。 6.我们通过流式细胞术研究在SGC-7901细胞中Cag A对细胞增殖的影响。 7.我们鉴定并培养胃癌原代细胞,用塞来昔布、LeY寡糖抗体及联合塞来昔布和LeY寡糖抗体处理细胞,通过Western Blot检测COX-2. CA724和GRN的表达。 8.我们通过ELISA分析COX-2. CA724和GRN的在胃癌原代培养的细胞中的表达变化。 PI3K 抑制剂 9.我们通过流式细胞术分析COX-2, CA724和GRN的在胃癌原代培养的细胞中的表达变化。 10.我们用Rg3(50μg/ml)处理胃癌细胞,通过Western Blot检测FUT4. SP1和HSF1的表达。 11.我们用Rg3(50μg/ml)处理胃癌细胞,通过流式细胞术检测FUT4、SP1和HSF1的表达。 12.我们用Rg3(50μg/ml)处理胃癌细胞,通过ELISA检测FUT4、SP1和HSF1的表达。 13.CCK-8检测细胞增殖的能力。 IV.实验结果 1. H.pylori和CagA对细胞增殖的影响机制的研究 (i)与胃炎,胃溃疡的患者相比,胃癌组织和血清中Cag A、p-EGFR、FUT4和LeY的表达增高。 (ii)在胃癌组织和血清中,Cag A与p-EGFR、FUT4和LeY的表达相关。 (ⅲ) Cag A促进细胞增殖并且呈剂量依赖性。 (ⅳ) Cag A上调PCNA的表达及EGFR、ERK1/2和P38的磷酸化水平。 (ⅴ) Cag A上调FUT4的表达并呈剂量依赖性。 (ⅵ) Cag A上调LeY、LeB、LeX和sLeX的表达。 2.

研究表明,p38MAPK存在于胰腺细胞激活的早期,在炎症细胞浸润到组织内时就活化。各种不同刺激均可以激活p38MAPK, p38MAPK介导了细胞内TNF-a, IL-1β, IL-6, IL-8的产生和表达,这种调控机制的论点刚刚开始提出。胰腺腺泡细胞是细胞因子表达的源头,通过RT-PCR, 时间 Western blot,免疫细胞化学等方法显示有大量的单核细胞趋化蛋白-1和IL, TNF-a等其它大量的细胞因子产生。细胞因子的表达可以被p38MAPK的抑制剂或部分被NF-kB抑制剂所抑制。p38MAPK抑制剂如SB203580可抑制细胞因子mRNA表达。 TNF-a是一个多效性细胞因子,其活化可诱导基因表达,细胞生长及细胞死亡。TNF-a产生这些效应的生物学机制仍不明确。p38MAPK活化与TNF-a介导的细胞因子表达之间存在相关性。细胞凋亡是由基因控制的细胞自动的程序性死亡,调控机制复杂,凋亡不引起炎性刺激,与细胞坏死在许多方面有着显著的差别和不同。在实验模型及临床急性胰腺炎中均发现有胰腺腺泡细胞的凋亡存在,研究表明急性胰腺炎中胰腺腺泡细胞的凋亡可能是对机体有利的保护性反应,并可能与急性胰腺炎病情严重程度呈负相关。重症急性胰腺炎时,尤其是SAP早期即产生了大量的TNF-a,在动物实验和临床都已证实TNF-a明显增高会诱发内毒素血症、引发多器官功能障碍综合征,但此时TNF-a并没有对胰腺起到保护作用,合理的解释是：SAP发生后,机体发生了剧烈地炎症反应,诱导细胞凋亡过程复杂,急性胰腺炎时TNF-a对凋亡的影响及机制仍不明确,过量的TNF-a对机体的损害可能大于保护作用。

重症急性胰腺炎是一种泛发的严重腹腔内病变,截至目前,没有的特异性方法能够确切地降低其发病率及死亡率,SAP的治疗仍然和以前一样主要采用对症支持,尽管日趋完善,但仍未能下调严重的全身性炎症。从上游直接抑制胰腺腺泡细胞内的初始信号,从而抑制其引发的细胞因子和趋化因子的释放,减轻胰腺腺泡细胞的损伤,有关这方面的研究不多。我们试验的目的在于通过对上游调控因子的抑制来观察是否能更根本抑制炎症的产生,并探讨p38MAPK抑制剂SB203580对TNF-a的表达及对胰腺腺泡细胞凋亡的影响。 方法： Wistar大鼠63只,随机分为三组：假手术对照组(S组),重症急性胰腺炎组(P组),SB203580治疗组(T组),每组21只。SAP模型由5%牛磺胆酸钠大鼠胆胰管逆行注射诱发而成。模型成功后,胰腺炎组(P组)不做处理：治疗组(T组)立即行SB203580腹腔注射10mg/kg;对照组(S组)仅开腹,不做其他处理；术后各组于1、2、4h三个时间点处死大鼠,各时间点Elisa法测血清TNF-a水平,并取胰腺组织行病理检查,免疫组化法检测p-p38MAPK表达,TUNEL法检测胰腺腺泡细胞凋亡。采用SPSS13.0统计软件,统计学数据用均数±标准差(x±s)表示,计量资料满足正态性,方差齐性采用单因素方差分析(one-way

Tie-2 kinase activty ANOVA),多组均数间的两两比较采用LSD-t方法；P
目的研究三聚氰胺导致大鼠肾肾小管上皮细胞(NRK-52e)氧化损伤的程度和细胞凋亡情况以及Trolox对NRK-52e细胞的保护作用和p38MAPK通路在三聚氰胺致NRK-52e细胞凋亡过程中的作用。 方法将三聚氰胺直接溶解于DMEM培养基中,分别稀释至40mM,30mM,24mM,16mM,8mM,0mM,通过MTT试验确定三聚氰胺对该细胞的半数抑制浓度(IC50)。根据三聚氰胺对该细胞的IC50选择三个剂量24mM,16mM,8mM作为实验组,并每组都设立向对应的Trolox保护组,、其中Trolox的终浓度为5mM。用三聚氰胺和Trolox于培养基中混匀作用于细胞8h后,收集细胞培养液并将细胞裂解收集细胞裂解液。对细胞裂解液分别采用氮蓝四唑显色法(NBT法)检测样品中总SOD活性、紫外比色法检测样品中的GSH-Px的活性、硫代巴比妥酸法(TBA法)检测样品中的MDA含量。另外,对于细胞培养液采用2,4-二硝基苯肼法检测其中的乳酸脱氢酶(Lactate

ICG-001半抑制浓度 dehydrogenase, LDH)活性。采用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧的水平。通过免疫细胞化学方法检测p38和磷酸化p38(p-p38)在细胞内的表达情况。另外,用western blot方法对细胞内p38和p-p38两种蛋白的表达进行定量检测。最后,通过流式细胞术检测三聚氰胺致NRK-52e细胞凋亡的水平以及分别添加trolox和SB203580后细胞凋亡水平的变化。 结果三聚氰胺对NRK-52e细胞的IC50为28.22mM。经trolox处理后,IC50为33.05mM。在氧化损伤指标的检测中发现,随着三聚氰胺浓度的升高抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性下降。相对于空白组,低剂量组中SOD、GSH-Px活性下降显著(P<0.05),中、高剂量三聚氰胺可以导致细胞抗氧化酶SOD、GSH-Px活性下降极显著(P<0.01)。同时,各组MDA的含量有所升高。与对照组相比,低剂量显著升高(P<0.05),中、高剂量组升高极显著(P<0.01)。在Trolox保护组中,中剂量保护组SOD的活性显著高于中剂量毒素组(P<0.05)；高剂量保护组GSH-Px的活性极显著高于对应毒素组,而MDA含量也显著低于毒素组(P<0.05)。另外,培养液中LDH活性也随着三聚氰胺的浓度增加而不断升高,其中中剂量毒素组显著高于对照组(P<0.05),高剂量毒素组极显著高于对照组(P<0.01)。在Trolox保护组中,低中剂量保护组的LDH活性显著低于其毒素组(P<0.05)。细胞中活性氧的水平,中、高剂量组极显著高于空白组(P<0.01),而中剂量保护组活性氧水平显著低于毒素组(P<0.05)。经流式细胞术检测细胞凋亡时发现,NRK-52e细胞的凋亡率随着三聚氰胺浓度的升高而不断增加,差异显著(P<0.05)。经trolox处理后,细胞凋亡率显著下降(P<0.

本研究基于乳腺癌组织的基因表达谱数据,采用系统生物学方法推测乳腺癌转移中Runx2对细胞外基质重塑的调节机制.采用相关性分析程序分析49例乳腺原发癌和15例淋巴结转移癌组织的基因表达谱数据,筛选与Runx2呈相关性表达的基因,结果得到与ECM重塑相关的候选基因52个,包括ECM成分11个,ECM降解酶及其抑制剂8个,细胞信号分子33个.利用转录调节因子结合序列数据库搜索候选基因启动子区的Runx2结合模序,筛选其中Runx2转录调控的ECM重塑相关基因,并判断可能调节Runx2的上游信号分子;文献检索实验证实的与Runx2有相互调节关系的基因,并基于Runx2上游调控信号分子和下游转录调节基因的分析,构建得到以Runx2为中心的ECM重塑的生物学调控网络.WNT和TGF/BMPs是启动Runx2表达的主要信号通路,Runx2通过转录调节ECM组分、ECM降解酶及其抑制剂和信号分子调节ECM重塑,促进癌细胞完成转移的生物学过程.
目的探讨TGF-β1受体阻滞剂SB-431542对树突状细胞(DC)融合疫苗制备的影响。方法①SB-431542(TGF-β1受体阻滞剂)与粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)、脂多糖(LPS)联合应用,刺激C57BL/6小鼠骨髓来源DC成熟,应用聚乙二醇(PEG)融合技术融合DC和小鼠胰腺癌细胞(Panc02),制备融合疫苗。②观察细胞形态、细胞表面表达、MTT法检测肿瘤细胞体外杀伤细胞毒活性。结果①在SB-431542参与下,成熟DC的细胞数目及形态无显著改变;②DC表面CD80、CD86、CD40的表达较未加SB-431542显著增高;MTT比色法,添加SB-431542的DC疫苗组对肿瘤细胞的杀伤抑制率显著提高。结论

www.selleckchem.cn/products/tg101209.html SB-431542组融合细胞的分子表达较非SB-431542组显著提高;体外MTT显示SB-431542组有更好的抗肿瘤效应,说明SB-431542对增强融合疫苗抗肿瘤效应有明显的增强作用。
Inflammation is a primary defense process against various extracellular stimuli,such as viruses,pathogens,foods,and

environmental BTK inhibitor pollutants.When cells respond to stimuli for short periods of time,it results in acute or physiological inflammation.However,if the stimulation is sustained for longer time or a pathological state occurs,it is known as chronic or pathological inflammation.Several studies have shown that tumorigenesis in the gastrointestinal (GI) tract is closely associated with chronic inflammation,for which abnormal cellular alterations that accompany chronic inflammation

such as oxidative stresses,gene mutations,epigenetic changes,and inflammatory cytokines,are shared with carcinogenic processes,which forms a critical cross-link between chronic inflammation and carcinogenesis.Transforming growth factor (TGF)-β is a multi-potent cytokine that plays an important role in regulation of cell growth,apoptosis and differentiation.Most importantly,TGF-β is a strong anti-inflammatory cytokine that regulates the development of 通常 effector cells.TGF-β has a suppressive effect on carcinogenesis under normal conditions by inhibiting abnormal cell growth,but on the other hand,many GI cancers originate from uncontrolled cell growth and differentiation by genetic loss of TGF-β signaling molecules or perturbation of TGF-β adaptors.Once a tumor has developed,TGF-β exerts a promoting effect on the tumor itself and stromal cells to enhance cell growth,alter the responsiveness of tumor cells to stimulate invasion and metastasis,and inhibited immune surveillance.Therefore,novel development of therapeutic agents to inhibit TGF-β-induced progression of tumor and to retain its growth inhibitory activities,in addition to anti-inflammatory actions,could be useful in oncology.In this review,we discuss the role of TGF-β in inflammation and carcinogenesis of the GI tract related to abnormal TGF-β signaling.

01）。在Ins+血脂康组、AngII+血脂康组、Ins+AngII+血脂康组相比于对应未加入血脂康的Ins组、AngII组、Ins+AngII组COX-2mRNA和蛋白表则明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。

(3) PGI2表达结果：血脂康组PGI2表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；Ins组、AngII组、Ins+AngII组相比于对照组PGI2表达量明显减少（P＜0.05）；且Ins+AngII组相比于Ins组、AngII组减少更为明显（P＜0.01）；而在Ins+血脂康组、AngII+血脂康组、Ins+AngII+血脂康组相比于Ins组、AngII组、Ins+AngII组PGI2表达量升高（P＜0.05）。 结论： 通过体外实验表明，AngII、Ins能促进细胞增殖，同时也能促进HUVECsCOX-2的mRN和蛋白表达，使得PGI2合成减少，且两者具有协同作用；而血脂康能一定程度上抑制细胞增殖，同时也可使AngII、Ins诱导的HUVECs的COX-2的mRNA和蛋白表达上调，PGI2合成水平增加。为研究AngII、高胰岛素血症促AS及他汀类抗AS作用进一步提供了理论依据。
研究背景和目的：吸烟是引发慢性阻塞性肺部疾病(Chronic http://www.selleckchem.cn/products/bay80-6946.html obstructive pulmonary diseases, COPD)的主要危险因素。香烟含有大量的氧化物质,这些氧化物能激活蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2(protein tyrosine

phosphatase, Shp2)。Shp2是一种由PTPNII基因编码的蛋白酪氨酸磷酸酶,含有2个SH结构域,其作为细胞因子、生长因子及其他胞外刺激因素的下游信号分子广泛地表达于机体各种组织和细胞中,参与细胞增殖、分化、死亡等诸多细胞生命活动环节。我们之前研究证明吸烟和香烟烟雾提取物(Cigarette 这个 smoke extract,CSE)能够激活人上皮细胞Shp2mRNA和蛋白的表达,Shp2抑制剂干预和肺上皮细胞Shp2基因敲除小鼠或细胞可减轻吸烟诱导的肺部炎症反应与上皮细胞炎症因子表达。本课题中我们探讨抑制和基因敲除Shp2减轻吸烟诱导小鼠肺纤维化的作用及机制。 方法： 1、整体实验：观察Shp2特异性抑制剂PHPS1干预和肺上皮细胞Shp2基因敲除小鼠对吸烟引起的肺纤维化指标的影响。小鼠每天吸烟10支,连续10天,诱导肺纤维化模型,检测指标包括转录生长因子β1(Transforming growth factor-β1, TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproleinase-9, MMP-9)、钙结合蛋白(Calcium binding protein, S100A4),胶原纤维沉积以及Shp2表达。 1)收集肺泡灌洗液(BALF),采用酶联免疫吸附(Elisa)法检测BALF上清中MMP-9和TGF-β1蛋白表达；

2)收集肺组织,制备匀浆上清液,采用定量多聚合酶链反应(Q-PCR)法测定匀浆上清液中MMPs和TGF-β1基因的表达； 3)制作肺组织切片,采用免疫组化染色法检测小气道周围Shp2、MMP-9和S100A4表达； PHA-739358体内 4)肺组织切片,采用Masson胶原纤维染色法检测小气道周围胶原纤维沉积。 2、离体实验：观察Shp2特异性抑制剂PHPS1处理肺上皮细胞和Shp2基因沉默肺上皮细胞对CSE诱导的MMP-9和TGF-β1表达的影响,以及对信号分子的影响。 香烟烟雾提取物(CSE)刺激小鼠正常肺上皮细胞MLE-12： 1)采用MTT法测定MLE-12细胞活性； 2) Western blot (WB)法检测CSE诱导p-Shp2和Shp2表达； 3)CSE刺激MLE-12细胞,Q-PCR法检测MMPs基因表达,WB法检测MMP-9蛋白表达； 4)Shp2特异性抑制剂PHPS1干预细胞后进行CSE刺激,采用Q-PCR和WB法检测Shp2对CSE诱导MMP-9基因和蛋白的影响； 5)Shp2siRNA沉默Shp2基因后进行CSE刺激,采用WB法检测Shp2对CSE诱导MMP-9的调节作用。 香烟烟雾提取物(CSE)刺激人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549： 6)CSE刺激A549细胞,半定量多聚合酶链反应(RT-PCR)和Elisa法检测TGF-β1基因和蛋白表达； 7)Shp2特异性抑制剂PHPS1干预A549细胞后进行CSE刺激,采用Q-PCR法检测Shp2对CSE诱导TGF-β1基因表达的影响； 8)作用机制研究：预先给予Erk1/2抑制剂U0126, JNK抑制剂SP600125,p38抑制剂SB203580阻断Erk1/2, JNK和p38的活性,CSE刺激MLE-12细胞后,Q-PCR和WB法检测CSE诱导MMP-9表达,研究分析其可能的作用机制。 结果： 1、整体实验： 1)小鼠经香烟烟雾暴露10天后,肺泡与小气道上皮细胞的Shp2表达显著增高； 2) BALF上清中MMP-9及TGF-β1的蛋白表达显著性增强；肺组织中MMP-9和TGF-β1基因水平表达明显升高；肺组织MMP-9、S100A4的表达量以及胶原纤维沉积明显升高； 3)与对照组小鼠相比,烟雾暴露小鼠经Shp2特异性抑制剂PHPS1干预后,BALF上清中MMP-9、TGF-β1的蛋白表达显著性下降；肺组织匀浆MMP-9和TGF-β1的基因表达水平亦明显降低,肺MMP-9、S100A4表达量以及胶原纤维沉积明显减少； 4)肺上皮细胞Shp2基因敲除小鼠与对照组小鼠相比,BALF上清中MMP-9和TGF-β1蛋白释放显著性下降,肺组织匀浆中MMP-9和TGF-β1的基因水平表达明显降低,肺MMP-9、 S100A4的表达量以及胶原纤维沉积同样明显减少。 2、离体实验： 1)细胞活力检测中,不同浓度的CSE(0.

8%,共4.38%经粪便排泄。仅有少量VBE-6(0.34%)以原型药物形式经粪便排泄。 对VBE-6及其三个代谢产物进行的体外乳腺癌MCF-7细胞抗肿瘤试验结果表明,三个代谢产物均保持较强的抗肿瘤活性,与母药VBE-6活性相近。 因此,本课题完成了VBE-6的合成制备工艺建立,并对其大鼠体内进行了研究,结果表明,与VBE-1相比,大鼠口服给药VBE-6后,在体内不经历代谢失活历程,体外抗人乳腺癌MCF-7细胞试验中代谢产物依然保持较强的抗肿瘤活性。本课题的代谢数据将对VBE-6的临床前药理学及毒理学等方面的研究起到很好的辅助及补充作用,并为VBE-6抗肿瘤机制的深入研究提供基础,对开发应用前景良好的候选药物VBE-6具有深远的意义。
细胞信号转导在细胞的代谢、分裂、分化、生物功能及凋亡过程中起着重要作用,肿瘤的发生和发展与细胞的过度激活有关。PI3K/Akt信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,在细胞内发挥着抑制凋亡和促进增殖的关键作用。由于PI3K是肿瘤的一个重要靶点,PI3K抑制剂的研究吸引了广泛的关注。近年来,数个PI3K抑制剂已经进入临床研究阶段,包括PX-866、SF-1126、NVP-BEZ235、XL-147、GDC-0941、ZSTK474、GSK-615和GSK2126458。

噻吩并[3,2-d]嘧啶系列衍生物,作为一类新型PI3K制剂已经被广泛研究。通过对这些化合物的合成和生物活性的研究发现,GDC-0941具有很好的活性,其抑制活性分别为IC50=3、33、3和75 nM(PI3Kα、β、δ和γ),现正处于Ⅰ期临床研究阶段。我们以GDC-0941为先导物,用各种取代的三氮唑基替换了GDC-0941分子中噻吩环系上的4-甲磺酰哌嗪-1-基亚甲基结构,主要是考察芳杂环能否代替非芳香性的哌嗪基团,同时在三氮唑基团的侧链中引入叔胺片段以保持化合物的水溶性,此外对GDC-0941的吲唑环进行结构修饰,希望找到可以理想的替代基团。基于以上考虑,我们合成了一系列GDC-0941的类似物(TM1～16)。通过高效液相色谱、核磁共振谱、质谱等分析方法验证了类似物。并进行了体外抗肿瘤活性评价,期望从中筛选出活性优于GDC-0941的新型抗肿瘤候选药物。 www.selleckchem.cn/products/gsk1120212-jtp-74057.html 药理试验结果显示,与GDC-0941相比,大部分类似物显示了较强的抗癌活性,其中活性较好的化合物进行了小鼠体内药物代谢实验,但结果不是很理想,进一步的研究还在继续进行。
背景 GPCR Compound Library 5-FU是临床常用的广谱抗肿瘤药,主要通过干扰肿瘤细胞的DNA合成而杀死肿瘤细胞,但同时也杀伤机体正常细胞,从而引起诸多不良反应,如胃肠道损害、骨髓抑制、神经系统损害等。去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)主要表达于肝细胞表面,可特异识别去唾液酸糖蛋白的半乳糖残基而将其内吞清除。继而的研究发现,某些肿瘤细胞表面,如HepG2、Caco-2、HT-29细胞等,ASGPR高表达,因此,以去唾液酸糖蛋白受体为靶点研究抗肿瘤靶向药物成为目前的研究热点。目前这类药物大多数都是以携带有半乳糖基的载体为递药系统,将抗肿瘤药包裹或吸附,将药物转运到达肿瘤组织而释放,实现靶向抗肿瘤作用。但以化学合成方法,将药物以半乳糖残基修饰,靶向肿瘤组织,提高肿瘤局部浓度,达到肿瘤靶向效果的研究少见。因此,本研究拟采用半乳糖与5-FU共价结合,形成5-FU半乳糖苷,通过研究5-FU半乳糖苷的体内外抗肿瘤作用及其肿瘤靶向性,以期为肿瘤治疗及肿瘤靶向药物研发提供实验依据,用于肿瘤治疗。

方法 采用本实验室设计合成的5-FU半乳糖苷,进行体内、外抗肿瘤及肿瘤靶向研究: 1.体外抗肿瘤及肿瘤靶向研究:选取去唾液酸糖蛋白受体表达量不同的HepG2、Caco-2、A549细胞,采用MTT法观察5-FU及5-FU半乳糖苷对其增殖抑制作用,并计算其IC50值;将Caco-2细胞与5-FU及5-FU半乳糖苷分别孵育后,采用HPLC方法于2、5、10、15、30、60、120分钟检测活细胞内5-FU及5-FU半乳糖苷的摄取情况; 2.体内抗肿瘤及肿瘤靶向研究:采用皮下注射肿瘤细胞悬液的方法,建立HepG2荷瘤小鼠模型,饲养于SPF环境,观察肿瘤生长情况,待肿瘤生长至0.5×0.5 cm左右大小,随机分为模型组、5-FU组(0.2 mM/kg)及5-FU半乳糖苷0.2、0.1和0.05

mM/kg组。尾静脉给药,隔天1次,连续2周。给药治疗期间,观察小鼠一般状态,记录小鼠体重、肿瘤体积变化。停止给药后再连续观察一周。一周后,尾静脉再次给予5-FU及5-FU半乳糖苷,15分钟后收集小鼠静脉血,处死小鼠,分离小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、肠及肿瘤,称重,保存于冰浴。采用血球计数仪检测小鼠血常规;分离血浆,各组织器官匀浆,提取药物,以HPLC方法检测5-FU及5-FU半乳糖苷在血浆、肿瘤及各组织中的分布浓度。 selleck products 结果 1. western blotting结果显示:HepG2、Caco-2细胞有较高水平的去唾液酸糖蛋白受体表达,而A549细胞几乎无去唾液酸糖蛋白受体表达; 2.体外细胞增殖抑制试验表明:5-FU半乳糖苷对HepG2、Caco-2细胞增殖具有明显抑制作用,呈剂量依赖性,且作用较5-FU强;而5-FU半乳糖苷对A549细胞增殖亦有明显抑制作用,呈剂量依赖性,但与5-FU相比无明显差别。其中5-FU的IC50,HepG2:5.95×10-6 M/L,Caco-2:3.17×10-6 M/L,A549:6.24×10-6 M/L; 5-FU半乳糖苷IC50,HepG2:2.75×10-7 M/L,Caco-2:1.75×10-7 M/L,A549:6.05×10-6 M/L。 3.体外细胞靶向结果显示:Caco-2细胞对对5-FU半乳糖苷的摄取量较5-FU明显增多,其摄取量在一定时间内均呈时间依赖性,60 min后细胞摄取量达到饱和。 4.体内抑瘤结果显示:5-FU半乳糖苷可显著抑制裸鼠移植瘤生长,且呈剂量依赖性,同等剂量作用明显强于5-FU;5-FU半乳糖苷对裸鼠体重和血象无明显影响,毒性较小;而5-FU则显著降低裸鼠体重和荷瘤小鼠的血象,毒性较强。 5.体内组织靶向结果显示:末次静脉给药第15分钟后,5-FU半乳糖苷在荷瘤小鼠肿瘤组织的分布浓度较5-FU高。 结论 1.5-FU半乳糖苷对高表达去唾液酸糖蛋白受体的肿瘤细胞生长抑制作用较5-FU显著增强,其可能机制是细胞表面的去唾液酸糖蛋白受体可显著增加其对5-FU半乳糖苷的摄取。 2.与5-FU相比,5-FU半乳糖苷不仅可明显抑制裸鼠移植瘤的生长,且显著降低全身毒性及骨髓毒性,可能机制是含半乳糖基的5-FU半乳糖苷具有较高的肿瘤靶向性。 3.

05),且DXM治疗组较哮喘模型组ERK磷酸化水平有明显下降(P﹤0.05);p38磷酸化水平在哮喘模型组与正常对照组之间无明显变化,但DXM治疗组中p38磷酸化水平较哮喘模型组和正常对照组明显下降(P﹤0.05)。 结论哮喘模型组大鼠支气管肺组织OPN表达及ERK磷酸化水平均有明显增加,表明OPN可能在支气管哮喘发病中起了重要作用,并可能受ERK/MAPK信号转导通路激活而上调。DXM治疗组OPN表达及ERK、p38磷酸化水平均有明显下降,说明DXM有可能通过对ERK/MAPK、p38信号转导通路的双重抑制,下调OPN表达,使支气管肺组织炎症减轻,哮喘得以控制。因此,认为糖皮质激素有效治疗哮喘的原因部分可能是由于OPN表达抑制的作用。
目的 探讨ERK1/2信号通道在大鼠哮喘模型T淋巴细胞IL-13的产生和变化中的免疫调控作用。 方法 以外周血单个核细胞为研究对象,应用ERK信号通道的激动剂EGF和抑制剂PD98059为工具药。将40只SD大鼠随机分为哮喘组和正常对照组,每组20只;取外周血单个核细胞分为5组,分别为:正常对照组,哮喘组,哮喘EGF组,哮喘PD98059+EGF组,哮喘PD98059组。将培养的T淋巴细胞涂片,用免疫细胞化学染色方法检测p-ERK的表达;提取淋巴细胞,用RT-PCR方法检测ERK的mRNA的表达;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清液中的IL-13蛋白的表达。

Selleck Src 抑制剂 结果 1.与正常对照组淋巴细胞p-ERK蛋白的表达阳性率(3.09%±0.27%)相比,哮喘组淋巴细胞p-ERK的表达阳性率(15.63%±1.04%)显著增高(n=5, p0.05)。 4.与哮喘组淋巴细胞ERK mRNA (0.7119±0.052)相比较,哮喘EGF组淋巴细胞ERKmRNA的表达(0.9606±0.075)显著增高(n=5, p0.05)。 5.与正常对照组淋巴细胞IL-13蛋白的表达量(7.5±1.6)相比,哮喘组淋巴细胞IL-13蛋白的表达量(21.6±3.7)显著增高(n=5, p0.05)。 7. SD大鼠淋巴细胞p-ERK蛋白阳性率与培养液上清IL-13蛋白表达量呈显著性正相关(n=5,r =0.892, p
背景尾加压素II(urotensin II,UII)是继内皮素之后新发现的强力缩血管活性肽,能够促进血管平滑肌细胞、外膜成纤维细胞和心肌成纤维细胞增殖,促进心肌细胞肥大,促进成纤维细胞合成胶原,促进泡沫细胞形成,从而在多种心血管疾病发生和发展过程中发挥重要作用。近年我室研究发现UII尚能诱导血管外膜成纤维细胞迁移,并且骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)参与了该过程。由于骨桥蛋白是参与血管重塑和心肌重塑的重要活性因子,因此,阐明UII和骨桥蛋白表达之间的关系具有重要的意义。

已经 目的研究UII对大鼠主动脉外膜成纤维细胞表达OPN的影响及可能参与的细胞内信号转导通路。 方法取雄性SD大鼠,分离主动脉外膜,剪碎为1mm3大小,采用组织贴块法培养外膜成纤维细胞,实验用3-5代细胞,经无血清DMEM同步化培养24h后进行随机分组实验:(1)对照组:细胞置于无血清DMEM培养基培养;(2)UII刺激组:按照实验设计,分为不同浓度UII刺激组(10- BKM120 10、10-9、10-8、10-7mol/L)和不同时间刺激组,后者将细胞和UII(10-8mol/L)共孵育不同时间(1h,3h,6h,12h,24h);(3)UII+细胞内不同信号通路抑制剂组:培养液中预先加入不同信号阻断剂,如UII受体阻断剂SB710411(10-6mol/L)、钙通道阻断剂nicardipine(10-5mol/L)、PKC抑制剂H7 (10-5 mol/L)、钙调神经磷酸酶抑制剂环孢霉素A(10-5mol/L)、Rho激酶抑制剂Y-27632 (10-5mol/L)或丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)抑制剂PD98059 (10-5mol/L)刺激30min后,再加入UII(10-8 mol/L)共孵育6h或12h,分别收集细胞和培养基,用半定量RT-PCR测定细胞OPN

mRNA表达量;收集培养液,采用ELISA方法检测骨桥蛋白分泌量。 结果UII明显诱导大鼠主动脉外膜成纤维细胞表达OPN。不同浓度UII刺激细胞后,随UII浓度增加,细胞OPN表达量逐渐增加,至10-8 mol/l UII达到高峰。10- 10、10-9、10-8和10-7mol/L UII刺激组OPN mRNA表达分别较对照组增加20.1%(P>0.05)、59.8%(P<0.05)、88.7%(P<0.01)和68.3%(P0.05)、49.8%(P<0.05)、74.9%(P0.05)。UII(10-8 mol/L)刺激细胞后1h、3h、6h和12h OPN mRNA表达分别较对照组提高111.2%(P<0.01)、253.2%(P<0.01)、119.1%(P0.05);10-8 mol/L UII刺激成纤维细胞6h、12h和24h后OPN蛋白分泌量较对照组分别增加59.4%(P<0.05)、74.9%(P0.05)。UII的该作用能够被SB710411、nicardipine、H7、环孢霉素A、Y-27632和PD98059所抑制,OPN mRNA抑制率分别为25.2%、23.7%、20.4%、43.1%、15.6%、29.0%(均为P<0.01),其相应OPN蛋白抑制率分别为29.3%(P< 0.05)、52.7%(P<0.01)、24.7%(P< 0.05)、46. 7%(P<0.01)、38.7%(P<0.01)和39.