研究表明,p38MAPK存在于胰腺细胞激活的早期,在炎症细胞浸润到组织内时就活化。各种不同刺激均可以激活p38MAPK, p38MAPK介导了细胞内TNF-a, IL-1β, IL-6, IL-8的产生和表达,这种调控机制的论点刚刚开始提出。胰腺腺泡细胞是细胞因子表达的源头,通过RT-PCR, 时间 Western blot,免疫细胞化学等方法显示有大量的单核细胞趋化蛋白-1和IL, TNF-a等其它大量的细胞因子产生。细胞因子的表达可以被p38MAPK的抑制剂或部分被NF-kB抑制剂所抑制。p38MAPK抑制剂如SB203580可抑制细胞因子mRNA表达。 TNF-a是一个多效性细胞因子,其活化可诱导基因表达,细胞生长及细胞死亡。TNF-a产生这些效应的生物学机制仍不明确。p38MAPK活化与TNF-a介导的细胞因子表达之间存在相关性。细胞凋亡是由基因控制的细胞自动的程序性死亡,调控机制复杂,凋亡不引起炎性刺激,与细胞坏死在许多方面有着显著的差别和不同。在实验模型及临床急性胰腺炎中均发现有胰腺腺泡细胞的凋亡存在,研究表明急性胰腺炎中胰腺腺泡细胞的凋亡可能是对机体有利的保护性反应,并可能与急性胰腺炎病情严重程度呈负相关。重症急性胰腺炎时,尤其是SAP早期即产生了大量的TNF-a,在动物实验和临床都已证实TNF-a明显增高会诱发内毒素血症、引发多器官功能障碍综合征,但此时TNF-a并没有对胰腺起到保护作用,合理的解释是：SAP发生后,机体发生了剧烈地炎症反应,诱导细胞凋亡过程复杂,急性胰腺炎时TNF-a对凋亡的影响及机制仍不明确,过量的TNF-a对机体的损害可能大于保护作用。
重症急性胰腺炎是一种泛发的严重腹腔内病变,截至目前,没有的特异性方法能够确切地降低其发病率及死亡率,SAP的治疗仍然和以前一样主要采用对症支持,尽管日趋完善,但仍未能下调严重的全身性炎症。从上游直接抑制胰腺腺泡细胞内的初始信号,从而抑制其引发的细胞因子和趋化因子的释放,减轻胰腺腺泡细胞的损伤,有关这方面的研究不多。我们试验的目的在于通过对上游调控因子的抑制来观察是否能更根本抑制炎症的产生,并探讨p38MAPK抑制剂SB203580对TNF-a的表达及对胰腺腺泡细胞凋亡的影响。 方法： Wistar大鼠63只,随机分为三组：假手术对照组(S组),重症急性胰腺炎组(P组),SB203580治疗组(T组),每组21只。SAP模型由5%牛磺胆酸钠大鼠胆胰管逆行注射诱发而成。模型成功后,胰腺炎组(P组)不做处理：治疗组(T组)立即行SB203580腹腔注射10mg/kg;对照组(S组)仅开腹,不做其他处理；术后各组于1、2、4h三个时间点处死大鼠,各时间点Elisa法测血清TNF-a水平,并取胰腺组织行病理检查,免疫组化法检测p-p38MAPK表达,TUNEL法检测胰腺腺泡细胞凋亡。采用SPSS13.0统计软件,统计学数据用均数±标准差(x±s)表示,计量资料满足正态性,方差齐性采用单因素方差分析(one-way
Tie-2 kinase activty ANOVA),多组均数间的两两比较采用LSD-t方法；P
目的研究三聚氰胺导致大鼠肾肾小管上皮细胞(NRK-52e)氧化损伤的程度和细胞凋亡情况以及Trolox对NRK-52e细胞的保护作用和p38MAPK通路在三聚氰胺致NRK-52e细胞凋亡过程中的作用。 方法将三聚氰胺直接溶解于DMEM培养基中,分别稀释至40mM,30mM,24mM,16mM,8mM,0mM,通过MTT试验确定三聚氰胺对该细胞的半数抑制浓度(IC50)。根据三聚氰胺对该细胞的IC50选择三个剂量24mM,16mM,8mM作为实验组,并每组都设立向对应的Trolox保护组,、其中Trolox的终浓度为5mM。用三聚氰胺和Trolox于培养基中混匀作用于细胞8h后,收集细胞培养液并将细胞裂解收集细胞裂解液。对细胞裂解液分别采用氮蓝四唑显色法(NBT法)检测样品中总SOD活性、紫外比色法检测样品中的GSH-Px的活性、硫代巴比妥酸法(TBA法)检测样品中的MDA含量。另外,对于细胞培养液采用2,4-二硝基苯肼法检测其中的乳酸脱氢酶(Lactate
ICG-001半抑制浓度 dehydrogenase, LDH)活性。采用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧的水平。通过免疫细胞化学方法检测p38和磷酸化p38(p-p38)在细胞内的表达情况。另外,用western blot方法对细胞内p38和p-p38两种蛋白的表达进行定量检测。最后,通过流式细胞术检测三聚氰胺致NRK-52e细胞凋亡的水平以及分别添加trolox和SB203580后细胞凋亡水平的变化。 结果三聚氰胺对NRK-52e细胞的IC50为28.22mM。经trolox处理后,IC50为33.05mM。在氧化损伤指标的检测中发现,随着三聚氰胺浓度的升高抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性下降。相对于空白组,低剂量组中SOD、GSH-Px活性下降显著(P<0.05),中、高剂量三聚氰胺可以导致细胞抗氧化酶SOD、GSH-Px活性下降极显著(P<0.01)。同时,各组MDA的含量有所升高。与对照组相比,低剂量显著升高(P<0.05),中、高剂量组升高极显著(P<0.01)。在Trolox保护组中,中剂量保护组SOD的活性显著高于中剂量毒素组(P<0.05)；高剂量保护组GSH-Px的活性极显著高于对应毒素组,而MDA含量也显著低于毒素组(P<0.05)。另外,培养液中LDH活性也随着三聚氰胺的浓度增加而不断升高,其中中剂量毒素组显著高于对照组(P<0.05),高剂量毒素组极显著高于对照组(P<0.01)。在Trolox保护组中,低中剂量保护组的LDH活性显著低于其毒素组(P<0.05)。细胞中活性氧的水平,中、高剂量组极显著高于空白组(P<0.01),而中剂量保护组活性氧水平显著低于毒素组(P<0.05)。经流式细胞术检测细胞凋亡时发现,NRK-52e细胞的凋亡率随着三聚氰胺浓度的升高而不断增加,差异显著(P<0.05)。经trolox处理后,细胞凋亡率显著下降(P<0.