01）。在Ins+血脂康组、AngII+血脂康组、Ins+AngII+血脂康组相比于对应未加入血脂康的Ins组、AngII组、Ins+AngII组COX-2mRNA和蛋白表则明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。
(3) PGI2表达结果：血脂康组PGI2表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；Ins组、AngII组、Ins+AngII组相比于对照组PGI2表达量明显减少（P＜0.05）；且Ins+AngII组相比于Ins组、AngII组减少更为明显（P＜0.01）；而在Ins+血脂康组、AngII+血脂康组、Ins+AngII+血脂康组相比于Ins组、AngII组、Ins+AngII组PGI2表达量升高（P＜0.05）。 结论： 通过体外实验表明，AngII、Ins能促进细胞增殖，同时也能促进HUVECsCOX-2的mRN和蛋白表达，使得PGI2合成减少，且两者具有协同作用；而血脂康能一定程度上抑制细胞增殖，同时也可使AngII、Ins诱导的HUVECs的COX-2的mRNA和蛋白表达上调，PGI2合成水平增加。为研究AngII、高胰岛素血症促AS及他汀类抗AS作用进一步提供了理论依据。
研究背景和目的：吸烟是引发慢性阻塞性肺部疾病(Chronic http://www.selleckchem.cn/products/bay80-6946.html obstructive pulmonary diseases, COPD)的主要危险因素。香烟含有大量的氧化物质,这些氧化物能激活蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2(protein tyrosine
phosphatase, Shp2)。Shp2是一种由PTPNII基因编码的蛋白酪氨酸磷酸酶,含有2个SH结构域,其作为细胞因子、生长因子及其他胞外刺激因素的下游信号分子广泛地表达于机体各种组织和细胞中,参与细胞增殖、分化、死亡等诸多细胞生命活动环节。我们之前研究证明吸烟和香烟烟雾提取物(Cigarette 这个 smoke extract,CSE)能够激活人上皮细胞Shp2mRNA和蛋白的表达,Shp2抑制剂干预和肺上皮细胞Shp2基因敲除小鼠或细胞可减轻吸烟诱导的肺部炎症反应与上皮细胞炎症因子表达。本课题中我们探讨抑制和基因敲除Shp2减轻吸烟诱导小鼠肺纤维化的作用及机制。 方法： 1、整体实验：观察Shp2特异性抑制剂PHPS1干预和肺上皮细胞Shp2基因敲除小鼠对吸烟引起的肺纤维化指标的影响。小鼠每天吸烟10支,连续10天,诱导肺纤维化模型,检测指标包括转录生长因子β1(Transforming growth factor-β1, TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproleinase-9, MMP-9)、钙结合蛋白(Calcium binding protein, S100A4),胶原纤维沉积以及Shp2表达。 1)收集肺泡灌洗液(BALF),采用酶联免疫吸附(Elisa)法检测BALF上清中MMP-9和TGF-β1蛋白表达；
2)收集肺组织,制备匀浆上清液,采用定量多聚合酶链反应(Q-PCR)法测定匀浆上清液中MMPs和TGF-β1基因的表达； 3)制作肺组织切片,采用免疫组化染色法检测小气道周围Shp2、MMP-9和S100A4表达； PHA-739358体内 4)肺组织切片,采用Masson胶原纤维染色法检测小气道周围胶原纤维沉积。 2、离体实验：观察Shp2特异性抑制剂PHPS1处理肺上皮细胞和Shp2基因沉默肺上皮细胞对CSE诱导的MMP-9和TGF-β1表达的影响,以及对信号分子的影响。 香烟烟雾提取物(CSE)刺激小鼠正常肺上皮细胞MLE-12： 1)采用MTT法测定MLE-12细胞活性； 2) Western blot (WB)法检测CSE诱导p-Shp2和Shp2表达； 3)CSE刺激MLE-12细胞,Q-PCR法检测MMPs基因表达,WB法检测MMP-9蛋白表达； 4)Shp2特异性抑制剂PHPS1干预细胞后进行CSE刺激,采用Q-PCR和WB法检测Shp2对CSE诱导MMP-9基因和蛋白的影响； 5)Shp2siRNA沉默Shp2基因后进行CSE刺激,采用WB法检测Shp2对CSE诱导MMP-9的调节作用。 香烟烟雾提取物(CSE)刺激人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549： 6)CSE刺激A549细胞,半定量多聚合酶链反应(RT-PCR)和Elisa法检测TGF-β1基因和蛋白表达； 7)Shp2特异性抑制剂PHPS1干预A549细胞后进行CSE刺激,采用Q-PCR法检测Shp2对CSE诱导TGF-β1基因表达的影响； 8)作用机制研究：预先给予Erk1/2抑制剂U0126, JNK抑制剂SP600125,p38抑制剂SB203580阻断Erk1/2, JNK和p38的活性,CSE刺激MLE-12细胞后,Q-PCR和WB法检测CSE诱导MMP-9表达,研究分析其可能的作用机制。 结果： 1、整体实验： 1)小鼠经香烟烟雾暴露10天后,肺泡与小气道上皮细胞的Shp2表达显著增高； 2) BALF上清中MMP-9及TGF-β1的蛋白表达显著性增强；肺组织中MMP-9和TGF-β1基因水平表达明显升高；肺组织MMP-9、S100A4的表达量以及胶原纤维沉积明显升高； 3)与对照组小鼠相比,烟雾暴露小鼠经Shp2特异性抑制剂PHPS1干预后,BALF上清中MMP-9、TGF-β1的蛋白表达显著性下降；肺组织匀浆MMP-9和TGF-β1的基因表达水平亦明显降低,肺MMP-9、S100A4表达量以及胶原纤维沉积明显减少； 4)肺上皮细胞Shp2基因敲除小鼠与对照组小鼠相比,BALF上清中MMP-9和TGF-β1蛋白释放显著性下降,肺组织匀浆中MMP-9和TGF-β1的基因水平表达明显降低,肺MMP-9、 S100A4的表达量以及胶原纤维沉积同样明显减少。 2、离体实验： 1)细胞活力检测中,不同浓度的CSE(0.