5/5.0μu mol/L)、联合Ⅰ组(0.5μ mol/L AZD6244+0.5μ mol/L GDC-0941)及联合Ⅱ组(5.0μ mol/L AZD6244+5.0μ

mol/L GDC-0941)。细胞经过不同组合浓度的抑制剂作用后,MTT法绘制增殖抑制曲线；平板集落形成法检测集落形成能力的改变；流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布；Western blot检测不同组中抑制剂靶点下游周期及凋亡相关蛋白表达的差异。 在两株NSCLC细胞中,单独抑制RAS/RAF/MEK通路或PI3K/AKT/mTOR通路效果较差。抑制剂AZD6244或GDC-0941作用于A549细胞的抑制率分别可达25.5%和38.1%,作用于NCI-H157细胞的抑制率分别可达16.9%和35.1%。Westernblot结果显示AZD6244抑制RAS/RAF/MEK通路后(降低pERK活化)激活PI3K/AKT/mTOR通路(增强pAKT活化)。相反,GDC-0941抑制PI3K/AKT/mTOR通路后激活了RAS/RAF/MEK通路。结果表明单通路突变的细胞,仅抑制该突变通路,效果差。未突变通路的抑制剂对肺癌细胞的增殖也有抑制作用。无论肺癌细胞是KRAS单突变,还是KRAS/PTEN双突变,单通路抑制效果较差,需要双通路联合抑制提高疗效。 哪里 RAS/RAF/MEK和PI3K/AKT/mTOR双通路联合抑制可增强KRAS/PTEN双突变的NSCLC细胞的生长抑制作用。在NCI-H157细胞中,低剂量的联合Ⅰ组表现为两药协同作用(q值=1.22),高剂量的联合Ⅱ组表现为两药相加作用(q值=0.92)；集落形成能力下降[77.2±1.54个/孔VS61.5±2.12个／孔,P<0.01]；凋亡率增加[18.3±0.82%VS21.32±0.56%,P<0.01]和[27.14±1.58%VS42.45±4.42%,P<0.01]；凋亡率显著增加[37.85±3.18%VS52.27±4.36%,P
背景二甲双胍在临床上是治疗II型糖尿病的最佳方案药物之一,上市以来其疗效比较显著、毒副作用小、价格相对便宜,使其在临床上被广泛推广应用。近一些年来国外学者的研究报告中发现,长期、适当剂量服用二甲双胍的糖尿病患者罹患乳腺、前列腺、胃、肺等部位恶性肿瘤的发生概率会明显降低,同时在一些体外实验过程中也发现二甲双胍对多种恶性肿瘤细胞的细胞株也表现出了明显的抑制增殖的作用。我们针对二甲双胍是否也存在对骨肉瘤细胞增殖产生影响这一命题提出设想,设计了本实验,采用CCK-8法检测二甲双胍对骨肉瘤MG63细胞增殖的影响,并检测Akt、PoxO1蛋白的磷酸化水平,为进一步观察二甲双胍对骨肉瘤细胞增殖的影响提供依据。

已经 目的观察二甲双胍对骨肉瘤细胞增殖及蛋白激酶B(Akt)信号通路中Akt、叉头框转录因子O亚族1(FoxO1)蛋白磷酸化的影响,探讨二甲双胍抑制骨肉瘤细胞增殖的作用机制。 方法以骨肉瘤MG63细胞株为研究对象,采用含有10%胎牛血清的RPMI1640培养液在体外培养至细胞融合到70%时,更换终质量浓度为50mmol/L的不含血清的培养液继续培养,在加入实验剂量的二甲双胍后12、24、36、48、72h分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞的增殖,收获24h的细胞,提取总蛋白后采用Western Blot技术检查Akt、磷酸化Akt (p-Akt)、FoxO1、磷酸化FoxO1(p-FoxO1)的表达。 结果二甲双胍可显著抑制MG63细胞的增殖,呈明显的时间依赖性,用药48h后,MG63细胞内Akt、FoxO1的磷酸化水平明显下降。二甲双胍组的p-Akt和对照组的p-Akt水平分别为0.62±0.04和1.33±0.16(P<0.05),二甲双胍组的p-FoxO1和对照组的p-FoxO1水平分别为0.82±0.02和1.71±0.05(P
在肿瘤的形成和发展过程中,抑癌基因p53常常发生突变或缺失,而这种突变或缺失又是导致肿瘤进展和化疗耐药产生的重要原因。目前,尽管自噬在肿瘤形成过程中的促生长和促死亡作用仍存在争议,但大量体内外实验研究支持：在化疗药物所致的微环境压力下,肿瘤细胞会激发自噬作为一种保护性的机制来对抗化疗药物的细胞毒性,最终导致化疗耐药的产生。最近,越来越多的研究证实MAPK信号通路调控的自噬是引起化疗耐药的重要机制。

Rapamycin 目的：研究抗肿瘤药物5-FU在耐药的p53缺失结肠癌细胞HCT116p53-/-和p53突变结肠癌细胞HT-29中的自噬表达情况,分析其与5-FU耐药的相关性并探讨其可能的分子机制。 方法：通过Western blotting分析野生型p53(HCT116p53+/+和RKO).缺失型p53(HCT116p53-/-)和突变型p53(HT-29)四种肠癌细胞中5-FU诱导的自噬的表达情况并分析其差异；在5-FU作用条件下,通过MTT、流式细胞技术、Western blotting.