Apelin-13浓度依赖性(0-1μM)和时间依赖性(0-24h)促进培养大鼠H9c2心肌细胞中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Be

Apelin-13浓度依赖性(0-1μM)和时间依赖性(0-24h)促进培养大鼠H9c2心肌细胞中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin1的表达; 6.PI3K特异性抑制剂LY294002(25μM)和Akt特异性抑制剂1701-1(10μM)可以抑制apelin-13引起的自噬标志蛋白LC3-II/LC3-I的表达增加,但是对apelin-13诱导的Beclin1的表达增加无明显影响; 7.自噬抑制剂3-MA(5mM)抑制apelin-13诱导的培养大鼠H9c2心肌细胞内IL-8的分泌; 8. Apelin-13抑制培养大鼠H9c2心肌细胞LDH、AST分泌。 结论PI3K-自噬途径介导apelin-13促大鼠H9c2心肌细胞分泌IL-8。
目的:通过观察电针“尺泽、合谷”和“足三里、三阴交”两组穴位对脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损评分、脑组织形态学、细胞凋亡及磷酸化p38MAPK的影响,探讨电针对抗脑缺血再灌注损伤的可能作用机理,为临床应用针灸防治脑缺血再灌注提供部分实验依据。

方法:250只健康雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、电针组、阻滞剂组、电针+阻滞剂组,50只/组。每组大鼠依据再灌注的不同时间点,随机分为5个时间点亚组:2h组、6h组、1d组、3d组、1w组,每亚组10只。除假手术组外,其余组大鼠均采用改良线栓法制备脑缺血再灌注模型,电针组予每日1次电针治疗,阻滞剂组于造模前30min在相应脑区注射p38MAPK阻滞剂SB203580,电针+阻滞剂组造模前注射SB203580,后予电针治疗。采用神经功能缺损评分测试大鼠神经缺损症状,HE染色和TTC染色法观察大鼠脑组织形态学改变,TUNEL法检测大鼠神经细胞凋亡指数,免疫组化法检测缺血区p-p38MAPK蛋白表达情况。 JQ1 结果: 1.神经功能缺损评分比较:造模后,与假手术比较,其余四组大鼠神经缺损评分明显高于假手术组,有显著的统计学差异(p<0.01),说明脑缺血再灌注造模成功。随着缺血再灌注时间的延长,神经缺损评分呈降低趋势。治疗后,与模型组比较,电针组、阻滞剂组、电针+阻滞剂组评分均低于模型组,且各组3d及1w时间点评分降低,具有统计学意义(p<0.05),SB+EA组1w时间点评分下降,具有显著统计学意义(p0.05)。

2.HE染色观察缺血区脑细胞形态变化:假手术组细胞形态完整,结构清晰核膜完整,核仁清晰;模型组细胞间隙增宽,神经元数量减少,排列紊乱,核膜与周围分界不清,核仁固缩;电针组、阻滞剂组及电针+阻滞剂组神经组织损伤较模型组轻,细胞排列较整齐,结构较完整,胞体轻中度肿胀,存活神经元较多。

selleck产品 3.TTC染色观察脑组织大体形态学改变:假手术组大鼠脑组织被染成均匀一致的红色,其余组大鼠造模后,脑组织出现大小不一的苍白色区域,差异具有统计学意义(P<0.01),随着时间的延长,梗死面积逐渐增加。与模型组比较,电针组、阻滞剂组、电针+阻滞剂组梗死面积不同程度的缩小,再灌注6h后,各组大鼠面积缩小具有统计学意义(p<0.05)。3d及1w时,阻滞剂组梗死面积较电针组、电针+阻滞剂组大(p<0.05),电针+阻滞剂组梗死面积较电针组小(p<0.01)。模型组大鼠阳性细胞数呈时间依赖性,1d时达高峰,3d减少最多,与模型组比较,电针组、阻滞剂组、电针+阻滞剂组凋亡指数均下降,多数组与模型组比较有较明显下降(p<0.05或p<0.01)。阻滞剂与电针刺激合用时,凋亡指数下降明显,与单独使用时比较,1d时间点差异具有统计学意义(p0.05)。 5.脑组织p-p38MAPK表达比较:与假手术组相比,其余四组大鼠脑组织酸化p38MAPK蛋白含量提高(p<0.05)。模型组磷酸化p38于再灌注后2h开始升高,1d显著升高,3d达到峰值,此后逐渐下降,1周时阳性细胞率仍高于假手术组。与模型组相比,电针组、阻滞剂组、电针+阻滞剂组各时段阳性率均有所下降,部分亚组差异具有显著性(p<0.05或p0.05)。 selleck化学药品 结论: 1.电针“合谷、尺泽”和“足三里、三阴交”两组穴位,能明显改善脑缺血/再灌注损伤大鼠的神经缺损症状及脑组织病理形态学变化,能显著降低缺血区神经细胞凋亡指数,提示电针“合谷、尺泽”和“足三里、三阴交”两组穴位对脑组织的缺血损伤具有一定的保护作用。 2.电针“合谷、尺泽”和“足三里、三阴交”能抑制磷酸化p38MAPK蛋白的表达,提示电针“合谷、尺泽”和“足三里、三阴交”对脑缺血损伤的保护作用可能是通过抑制p38MAPK信号通路的表达来完成的。 3.电针“合谷、尺泽”和“足三里、三阴交”对脑缺血/再灌注大鼠的神经功能缺损、脑组织病理形态、缺血区神经细胞凋亡指数及p-p38MAPK的改善在再灌注后3天时较明显,说明该时间点可能为促进脑缺血神经修复的较好治疗时间窗。 4.

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