57、593.3、558.47μg/ml*h, CL分别为1.003、0.380、0.589(mg)/(μg/ml)/h。与CPT组相比较,偶联物组AUC约提高了两倍,消除速率CL明显降低。

针对聚轮烷载体的优势以及喜树碱的作用效果、现有剂型的缺点等方面,本实验合成了以聚轮烷为载体的聚轮烷—喜树碱偶联物给药体系,并从偶联物的表征,含量、溶解度以及体外释放度的测定、体内外抗肿瘤试验的等方面进行了研究。研究结果表明,聚轮烷—喜树碱偶联物给药体系有良好的溶解度,大大改善了喜树碱难溶的缺点；体外释放结果表明其具有良好的缓释效果,体内外抗肿瘤试验表明,偶联物对肿瘤细胞及实体瘤有明显的抑制作用；生物利用度是药物制剂质量的一个重要指标,静脉注射偶联物药物代谢动力学研究结果表明,偶联物的AUC大大提高,半衰期延长,有效促进了药物的生物利用度。
研究背景与目的 时间 鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)是我国南方省份及东南亚高发的一种恶性肿瘤,具有明显的种族聚集性和地域性。其发生是一个多阶段、多途径、多机制的过程。流行病学调查显示,鼻咽癌的发生涉及到遗传倾向性和环境致癌因素,很可能是遗传易感性个体接受了致癌物的作用而发生的。EB病毒(EBV)、化学致癌物和胚性击中(即遗传因素或自发突变)构成NPC的主要病因,而发病阶段至少在两个以上。各种环境因素、EBV感染、遗传和表遗传学的改变导致瘤基因过表达及抑瘤基因表达下调或缺失,经过癌前病变,最终发生鼻咽癌。 肿瘤的生成涉及多种基因和基因以外的变化,任何单独一种基因的改变不足以致瘤,多种基因变化的积累才能引起控制细胞生长和分化的机制紊乱,使细胞的生长失控而瘤变。在这些基因的变化中,最常发生两类基因的异常变化,即瘤基因及肿瘤抑制基因。鼻咽癌的生成同样涉及多基因的表达改变。在过去几十年中,虽然我们对于鼻咽癌发生的分子基础认识已经有了很大的提高,但这些认识还是远远不能完全揭示鼻咽癌的发病机理。因此,鼻咽癌相关新基因的发现和研究仍将有助于进一步揭示鼻咽癌的发病机理。 NESG1基因(Genbank AF094758),官方名为CCDC19(NM_012337.1),是本课题组姚开泰教授指导的博士生黎众魁于1999年利用mRNA差异显示法,从人正常鼻咽上皮和软腭口腔上皮中筛选,并结合3′-RACE和5′-RACE技术,分别扩增出长约1.4kb和0.7kb的片段(其中包含了一段174bp的重叠产物以确认扩增的特异性),拼接后发现的一个全长约1850bp连续的cDNA序列。该基因位于1q22。预测其编码框长1161bp,编码386个氨基酸,分子量为46252Da,蛋白质等电点为9.99,SOSUI和PSORTⅡ网上预测其为可溶性核蛋白。BLAST比对发现,NESG1的cDNA序列与胎儿肺组织cDNA文库和Stratagene肺癌cDNA文库中的两个EST序列同源。多组织(包括鼻咽粘膜、气管、食管、大脑、心脏、膀胱、肝脏、肺脏、胃、肾脏、胸腺和大肠)Northern杂交显示,该基因特异性的表达于鼻咽和气管纤毛柱状上皮。

http://www.selleck.cn/products/cb-839.html 本课题在此研究基础上,对NESG1基因进行重新克隆测序分析及功能鉴定,并寻找NESG1基因相关的信号转导通路,探讨该基因在鼻咽癌中的作用机制,为进一步阐明鼻咽癌发病机理提供参考。 研究内容与方法 1. NESG1基因的序列修正以及新序列的生物信息学分析 对NESG1基因进行了重新克隆、测序分析并对其序列进行修正,重新预测编码框。对新校正序列进行生物信息学分析。 2. NESG1基因在鼻咽癌中表达水平检测 (1).NESG1基因mRNA表达水平 利用RT-PCR和Real-time PCR检测NESG1 mRNA在鼻咽癌细胞、鼻咽癌组织与非癌鼻咽组织中的表达情况；原位杂交检测NESG1基因的mRNA表达定位。 (2).NESG1兔抗人多克隆抗体制备及NESG1蛋白表达 构建pGEX-4T-1-NESG1-GST原核融合表达载体。IPTG诱导NESG1-GST基因融合表达。利用GST抗体纯化融合蛋白用于免疫大白兔,约100天后取兔血上清,并亲和纯化,最后获得所需的NESG1多克隆抗体。利用免疫组化和Western blot检测NESG1蛋白在鼻咽癌组织与非癌鼻咽组织中的表达情况。利用免疫组化检测鼻咽外多组织中NESG1的表达分布。 3. NESG1基因在鼻咽癌中的功能初步研究 (1).NESG1过表达对鼻咽癌细胞5-8F生物学特性的影响 构建与增强型绿色荧光蛋白融合表达的NESG1慢病毒载体,利用293FT细胞包装成成熟的慢病毒颗粒,感染具有高成瘤和高转移能力的鼻咽癌细胞5-8F。96孔板有限稀释法挑选阳性单克隆细胞,扩大培养,建立稳定过表达NESG1的鼻咽癌细胞株,以空载体同时进行病毒包装及感染鼻咽癌细胞5-8F,获得对照细胞株。利用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验等检测NESG1基因在细胞水平对细胞生长、细胞周期、迁移及侵袭能力的影响；检测稳定过表达NESG1的鼻咽癌细胞裸鼠皮下成瘤能力的改变。

(2).抑制NESG1表达对鼻咽癌细胞5-8F生物学特性的影响 和 构建靶向NESG1的shRNA慢病毒干扰载体,稳定干扰过表达NESG1基因的鼻咽癌细胞,利用MTT法、平板克隆形成实验、Transwell小室迁移实验及Boyden小室侵袭实验等观察NESG1表达抑制后细胞生长、迁移及侵袭能力的变化。进一步探讨NESG1基因在鼻咽癌细胞中的基本功能。 4. NESG1基因介导的分子基础初步研究 (1).应用Affymetrix全基因组芯片检测NESG1基因稳定导入前后对鼻咽癌细胞基因表达的影响,寻找差异表达基因 (2).利用生物信息学的方法,分析基因芯片差异表达基因介导的信号通路 (3).NESG1抑制细胞周期进展的初步分子机制 由于过表达的NESG1能阻滞细胞周期由G1向S期转化,因此,NESG1参与抑制了细胞周期的进展。基于基因芯片的数据,我们利用荧光定量RT-PCR和Western blot验证了S期相关的几个重要基因CCNDl、CCNAl、CDK4、p21、CDK2、CDC2的表达,初步探讨了NESG1基因抑制细胞周期进展的机制。 结果 1. NESG1基因的序列修正以及新序列的生物信息学分析 (1).NESG1基因的序列修正 最近,我们对NESG1基因进行重新克隆并测序分析时发现,测序结果与原提呈的AF094758(NM_012337.