8%，IL-1β分别降至22%和45%，TNF-α分别降至22.4%和16.3%。 (5) TLR2抗体预处理THP-1细胞30min后再用6μg/mL pORF5蛋白刺激THP-1细胞12h，IL-1β、IL-8和TNF-α产生水平与处理前相比，IL-1β、IL-8和TNF-α分别降低9.8%、32.7%和25.3%。 结论: (1) Ct pORF5蛋白可诱导THP-1细胞产生前炎症CKs：IL-8、IL-1β和TNF-α；

(2) pORF5蛋白可激活p38/MAPK和ERK1/2/MAPK通路，活化的p38/MAPK和ERK1/2/MAPK通路通过TLR2参与pORF5诱导前炎症细胞因子IL-8、IL-1β和TNF-α的产生。
本文利用功能性细胞模型对中草药及其分离组分进行筛选分析，并用免疫荧光，蛋白印迹等生化实验技术进一步验证其作用机制，这种建立在TCRP（Time/dose-dependentcell 无 response pattern）技术上的功能性细胞模型不仅为中草药的活性筛选和功能预测提供了一个很好的研究手段，也对中草药的开发应用具有一定的指导意义。鉴于中草药物种丰富、成分复杂的特点，为了更好地研究中草药，建立多种反映不同细胞功能的细胞模型也具有很大的价值，因此本文还基于该技术建立了肠道上皮屏障的细胞模型。主要内容如下： 1. TCRP技术的原理及其用于细胞学研究的概况 基于微电子阻抗的实时细胞功能分析仪可以监测到特定的细胞对外界刺激时间剂量依赖的反应，这项技术被称之为TCRP技术,本章主要对该技术的原理以及其在细胞功能学上的研究进展做一综述。

2．基于EGF/EGFR（Epidermal growth factor/Epidermal growth factor receptor）模型的怀山药抗肿瘤活性研究 本文利用EGF/EGFR模型对大批量的中草药进行筛选分析得到山药是具有抑制EGF信号功效的中药材之一。在山药分离的不同组分中，低极性组分具有明显的抑制EGF信号的作用，并用蛋白印迹实验检测到该组分降低了EGF信号通路中一个重要蛋白的磷酸化水平。另外还用顺铂诱导细胞凋亡的模型筛选了山药的不同分离组分，发现可以有效降低顺铂IC50的有效部位也该极性段，由此我们推测山药提取物的低极性组分可能具有抗肿瘤活性。 3．基于TCRP技术的肠道上皮屏障模型的建立 利用微电子传感器细胞实时分析仪动态监测肠上皮Caco-2细胞对乙醇刺激的反应所得到的阻抗值的变化趋势与传统评价上皮屏障功能的跨上皮电阻法所得到TER图谱非常吻合，免疫荧光图像显示细胞骨架蛋白F-actin与紧密连接蛋白ZO-1在乙醇的刺激下同步发生定位的改变。另外，表皮生长因子EGF，一氧化氮合成酶（iNOS）抑制剂在该系统上被检测出可以缓解乙醇对屏障的损伤，与前人的报道相一致，进一步证明了利用这项基于微电子阻抗的动态检测体系来评价上皮屏障功能的可行性。该方法与传统方法相比具有不需要标记，动态连续监测，高通量的优点，因此这个模型的建立为筛选保护屏障药物搭建了一个很好的平台。
从血水草根及根茎中提取的血水草总生物碱(Eomecon Gefitinib数据表 selleck screening library chionantha alkaloids, ECA)被课题组证实具有良好的杀螺作用,白屈菜红碱(chelerythrine, CHE)是ECA的主要成分之一。从ECA中分离单体白屈菜红碱进行杀螺作用及其杀螺机制研究,为血水草作为植物杀螺剂开发利用提供新的实验依据。 从血水草粉末中分离CHE。参考WHO规定的“杀螺剂实验室终筛方法”的浸泡法进行杀螺试验。于20℃、25℃、30℃温度下,观察钉螺在25mg/L、12.5mg/L、6.25mg/L、3.125mg/L、1.5625mg/L、0.7813mg/L、0.3906mg/L、0.1953mg/L浓度的CHE溶液中浸泡24、48、72、96h死亡率。设去氯水对照组。通过对数据进行逐步回归计算建立回归数学模型和因素分类区域处理,探讨温度、时间、药物浓度等各种因素对杀螺效果的影响及变化规律。

以钉螺肝脏为样本,探讨CHE杀螺机理。设置CHE20mg/L10mg/L、5mg/L水溶液和清水组25℃浸泡钉螺36h,解剖活螺,分离肝脏,提取肝细胞DNA,进行DNA琼脂糖凝胶电泳；将肝组织捣碎,制备肝细胞悬液,用流式细胞术检测CHE溶液是否诱导钉螺肝细胞凋亡 配制5mg/L CHE的水溶液,浸泡钉螺36h,解剖活螺取肝脏,提取CHE处理组和清水对照组钉螺肝脏蛋白质,双向凝胶电泳,ImageMaster2D5.0软件分析图谱,筛选差异蛋白质,并用质谱鉴定。分析CHE致钉螺肝脏蛋白质表达的变化。 CHE杀螺研究及对钉螺肝脏损伤机制研究发现： (1)CHE具有良好的杀螺作用。温度20℃、96h、CHE浓度25mg/L钉螺死亡率可达90％:25℃、CHE浓度0.7813mg/L以上、浸泡96h钉螺死亡全部死亡；温度30℃、CHE浓度0.1953mg/L以上、浸泡72h以上钉螺死亡率均达100%；浓度0.1953mg/L以上浸泡96h,20℃、25℃、30℃温度杀螺效果与对照组差异均具有显著性(P0.

52μg/mL。细胞实验结果显示，紫菜多糖和龙须菜寡糖均能够显著抑制Th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）水平，促进Th1细胞因子（IFN-γ，紫菜多糖还能促进IL-10的产生）的产生，紫菜多糖和龙须菜寡都能有效缓解空肠组织的过敏病理现象。紫菜多糖诱导IFN-γ的产生是通过JNK和JAK2两条信号通路途径。 综上所述，紫菜多糖和龙须菜寡糖均能够显著降低小鼠血清特异性IgE和IgG1的水平，促进IgG2a的水平，能够促进Th1细胞因子的水平，抑制Th2细胞因子的水平，能有效缓解空肠组织的过敏病理现象。这些结果说明紫菜多糖和龙须菜寡糖能够有效调节辅助性T细胞的免疫功能向Th1细胞转换，使Th1、Th2细胞重新处于相对平衡状态，从而抑制Th2细胞主导的食物过敏反应。
肿瘤（Tumor）已成为当前人类健康的一大杀手，严重威胁着人们的生命与健康。肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤，是导致癌症相关死亡的主要因素。于此同时，动物肿瘤病的发病率和病死率也呈上升趋势。马立克氏病（Marek’s

disease，MD）等肿瘤病具有高致病性和传染性，给畜牧业生产造成了严重损失。中药治疗肿瘤具有许多优势，从天然植物中寻找抗肿瘤活性成分是抗肿瘤药物研发的热点。秦岭主峰太白山为我国三大“药山”之一，中草药资源丰富，其中有149种以“七”字命名的药用植物，即太白“七药”。本研究从太白“七药”中筛选出6味中草药组成抗肿瘤中药方剂“肿瘤消”。为了验证“肿瘤消”方剂的抗肿瘤活性和作用机理，以人肺腺癌A549细胞和马立克氏淋巴瘤MDCC-MSBl细胞为主要的体外肿瘤细胞模型，对“肿瘤消”方剂诱导肿瘤细胞凋亡的作用和机理进行了研究，目的在于为科学、合理地开发太白山中草药资源提供指导，为临床抗肿瘤药物筛选提供理论支持。

一般 （1）“肿瘤消”方剂对多种肿瘤细胞具有抗肿瘤活性。采用MTT法对“肿瘤消”方剂的抗肿瘤活性进行了检测，结果表明“肿瘤消”方剂对马立克氏淋巴瘤MDCC-MSBl细胞、人肺腺癌A549细胞、大鼠胶质瘤C6细胞、小鼠骨髓瘤SP2/0细胞和人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用，但对正常人胚肾293A细胞的增殖无显著影响。 那个 （2）“肿瘤消”方剂具有明显的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。采用细胞形态学观察和Hoechst332580染色法对“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡的作用进行了检测，两种方法均证实“肿瘤消”方剂具有诱导A549细胞凋亡的作用；采用DNA片段化分析和线粒体膜电位势能检测法对“肿瘤消”方剂诱导MDCC-MSBl细胞凋亡的作用进行了检测，两种方法均证实“肿瘤消”方剂具有诱导MDCC-MSBl细胞凋亡的作用；采用AnnexinV/PI双染法，流式细胞仪检测分析“肿瘤消”方剂对肿瘤细胞（MDCC-MSBl、A549、C6、SP2/0、HeLa）凋亡率的影响，结果证实“肿瘤消”方剂作用后肿瘤细胞的凋亡率明显上升。 （3）“肿瘤消”诱导A549细胞凋亡涉及到p38MAPK信号通路的持续活化，是由死亡受体途径和线粒体途径共同介导的。采用Western Blotting对“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡的死亡受体通路和线粒体通路进行检测，同时对细胞凋亡信号通路相关调控基因（p38、p-p38、p53、p-p53、Bax、Bcl-2）的表达水平进行检测。Western 还有 Blotting检测结果证实“肿瘤消”诱导A549细胞凋亡涉及到p-p38MAPK信号通路的持续活化，与死亡受体（TNF-R1、DR5）活化以及caspase8活化有关，启动细胞凋亡外源性死亡受体途径。此外，“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡过程中，上调了p53基因的蛋白表达水平，进而上调Bax表达水平，同时下调Bcl-2的表达水平。在Bcl-2和Bax共同调节作用下，线粒体膜电位下降，cytochrome

c从线粒体释放到细胞质，导致caspase9活化，启动细胞凋亡内源性线粒体凋亡途径。死亡受体通路和粒体途径在均caspase3处汇合，诱导A549细胞发生凋亡。
凡纳滨对虾（Litopeneaus vannamei），又称南美白对虾、万氏对虾，由于其具有生长速度快、抗病能力强、适合高密度养殖和营养成分高等优点，成为我国乃至世界对虾养殖中的主要品种，然而，我国凡纳滨对虾养殖仍然受到营养、品种及病害的制约。研究凡纳滨对虾肌肉生长发育和免疫系统根本机制，为提高凡纳滨对虾生长速度和抗病能力提供理论依据，对凡纳滨对虾高效健康养殖具有重要的意义。 本研究中通过同源克隆获得了凡纳滨对虾p38的cDNA部分序列并对其进行了生物信息学分析，同时利用实时定量PCR检测了p38的组织分布和蜕壳周期不同阶段表达量变化，然后通过双链RNA干扰和抑制剂阻断法分别沉默p38的表达和抑制p38酶活性后检测肌肉相关基因表达量的变化，最后分析了p38在不同细菌和病毒感染后的表达规律和白斑综合症病毒感染后虾体内病毒拷贝数的变化规律。 实验结果表明，本研究克隆获得了凡纳滨对虾p38cDNA部分序列，克隆片段长1206bp，包括1098bp的开放阅读框，编码365个氨基酸，蛋白分子量为41.87kDa、等电点约为6.

0软件进行分析，并用GraphPad Prism5软件进行处理。 结果：1.行为学结果发现SO Aβ1-42处理组较正常对照组，出现明显的认知障碍现象，同时表现出显著的抑郁样行为；而对于学习记忆的影响只有剂量为2mg/kg的SB203580能显著改善SOAβ1-42引起的记忆损伤，对于抑郁样行为剂量为2和4mg/kg SB203580均能显著缓解SO Aβ1-42引起的抑郁样行为，而激动剂PMA却显著阻断了SB203580的作用。2. Western blot法检测海马组织的目标蛋白发现，海马中SO Aβ1-42处理组p-p38MAPK的表达量明显高于正常对照组，而SB203580（2和4mg/kg）能逆转p-p38MAPK的表达上调，而PMA显著阻断SB203580的上述作用；海马中SO Aβ1-42处理组与正常对照组相比，p-CREB和p-Ser9-GSK3β表达显著下调，而SB203580（2及4mg/kg）能显著逆转Aβ1-42对p-CREB和p-Ser9-GSK3β的下调作用，并且PMA显著阻断了SB203580的上述作用；而海马中各组间CREB、p-Tyr279-GSK3α、p-Tyr216-GSK3β和GSK3α/β均无显著性差异；且皮层中上述所有蛋白均未发现有显著的表达差异。 实验二：不同浓度SO Aβ1-42处理海马DG区或CA1区对小鼠认知行为，抑郁样行为及神经肽VGF表达的影响 方法：ICR雄性小鼠选择海马DG或CA1区微注射SO

Aβ1-42（0.5、1μg/side）或对照制作小鼠模型，分为八组：H组[DG区正常对照组]、I组[DG区Aβ42-1处理组]、J组[DG区Aβ1-42（0.5μg/side）]、K组[DG区Aβ1-42（1μg/side）]、L组[CA1区正常对照组]、M组[CA1区Aβ42-1处理组]、N组[CA1区Aβ1-42（0.5μg/side）]和O组[CA1区Aβ1-42（1μg/side）]，12天后开始行为学检测，结束后取各组小鼠海马检测神经肽VGF，蛋白表达量用Odyssey Selleck INK 128 V3.0软件进行分析，并用GraphPad

Prism5软件进行处理。 结果：1. SO Aβ1-42处理海马DG或CA1区得到相似的实验结果，行为学结果显示，在DG或CA1区注射1μg/side SO Aβ1-42均能显著引起小鼠记忆损伤和抑郁样行为，但在强迫游泳和悬尾实验中只有0.5μg/side MAPK抑制剂 SO Aβ1-42处理DG区能显著延长不动时间，而CA1区注射0.5μg/side SO Aβ1-42却未见其显著诱导抑郁样行为。2.各组小鼠海马组织检测神经肽VGF蛋白表达量，结果显示不论是DG还是CA1区，与正常对照组或者逆序列Aβ42-1组相比，低剂量和高剂量的SO Aβ1-42均使其表达量显著下调。 结论： SB203580能够改善SO Aβ1-42诱导的小鼠记忆损伤和抑郁样行为，其作用可能与海马组织中p-p38MAPK、p-CREB和p-Ser9-GSK3β的表达变化有关，p38MAPK/GSK3信号通路在SOAβ1-42诱导的认知障碍与抑郁共患中发挥关键调节作用。其次，我们发现SO Aβ1-42诱导小鼠记忆损伤和抑郁样行为与神经肽VGF表达改变密切相关，提示神经肽VGF可能是一种重要的认知障碍与抑郁样行为的调控靶标，并在AD和抑郁症的发生发展过程中扮演着重要的角色。
背景与目的： 肺癌是目前全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，发病呈逐年上升趋势。作为威胁全世界人类健康的重大疾病，肺癌发病隐匿，早期症状不明显易被忽视，大部分患者在初次诊断时已是晚期，这是目前肺癌疗效不佳的主要原因。作为肿瘤的两大生物学特性，侵袭和转移是导致肿瘤复发以及患者死亡的主要原因之一。而通过对肺癌细胞发生侵袭和迁移的机制的研究，对于控制肺癌的复发和转移有着重要的意义，这也是当今肺癌研究的热点。肿瘤细胞发生侵袭和迁移的过程有多条信号通路参与。其中MAPK信号通路中的一条经典途径——P38MAPK信号通路在肿瘤细胞侵袭和迁移发挥着重要的作用，活化的P38MAPK可以通过调节特定的转录因子的表达和生物活性，实现对肿瘤细胞生物学特性的影响。肿瘤细胞的上皮-间叶转变是指上皮源性肿瘤中的某些细胞在与周围间质相互作用时，丧失其上皮源性，表现为间质细胞特征，也是肿瘤发生侵袭和转移的重要环节，其相关蛋白的表达水平变化与EMT的发生密切相关；EMT发生时，上皮源性肿瘤中的某些细胞在与周围间质相互作用时，丧失其上皮源性，表现为间质细胞特征，是肿瘤发生侵袭和转移的重要原因之一。此外基质金属蛋白酶9因参与基底膜与ECM主要成分IV型胶原的降解，而在肿瘤的侵袭和转移过程中也发挥着重要的作用。研究表明P38MAPK信号通路对肿瘤的复发和转移的影响可分别通过影响EMT相关蛋白的表达或者影响MMP9的活性而实现，但在肺癌中，三者之间的关系尚不明确。为此，本实验将通过抑制P38的活性，观察人肺癌细胞系（H1299、95C）的侵袭和迁移能力的改变，并重点研究其与EMT相关蛋白的表达水平的变化以及MMP9的活性水平和蛋白表达水平的差异，来探讨肺癌中P38参与调节肺癌的侵袭和转移能力的可能的机制。

那个 方法： 通过两种P38抑制剂：SB203580和SB239063抑制P38的活性水平。通过划痕实验和Transwell实验的方法，观察抑制P38的活性水平对两种人肺癌细胞H1299和95C的侵袭和迁移能力的影响；通过明胶酶谱实验来检测抑制P38活性水平对MMP9的活性的影响；并通过Western-blot的方法来观察抑制P38的活性水平对EMT相关蛋白和MMP9蛋白的表达水平的影响。 结果： 实验结果表明，在H1299细胞和95C细胞两种细胞系中使用浓度为10μM的P38抑制剂SB203580和SB239063，可以明显抑制两种细胞的P38的磷酸化水平；划痕实验和无胶的Transwell实验结果表明，抑制P38的活性使得H1299细胞和95C细胞的迁移能力明显下降；铺胶的Transwell实验结果显示，抑制P38的活性对H1299细胞和95C细胞的侵袭能力没有明显的影响；明胶酶谱实验和Western-blot实验的结果表明抑制P38的活性对MMP9的活性以及蛋白的表达水平也没有显著的影响；Western-blot实验的结果表明，抑制P38的活性对使得H1299细胞中EMT相关蛋白β-catenin，和Vimentin的表达水平明显降低，snail蛋白的表达水平无明显变化；95C细胞中EMT相关蛋白β-catenin的表达水平明显降低，而Vimentin和snail蛋白的表达水平没有发生明显变化。 结论： 1.两种P38抑制剂SB203580和SB239063通过抑制P38的磷酸化水平抑制了P38的蛋白的活性；2.抑制P38的活性可以使得人肺癌细胞H1299和95C的迁移能力下降，而对侵袭能力无明显影响；3.

指纹图谱研究 采用高效液相色谱法建立了12种饮片的指纹图谱。白芍、炒白芍、酒白芍、土白芍、赤芍饮片的指纹图谱中各标定了5、7、6、5、9个特征峰；川芎、酒川芎的指纹图谱中标定了15个特征峰,在当归、酒当归的指纹图谱中标定了6个特征峰；黄芪、炙黄芪饮片中标定了12个特征峰；党参指纹图谱中标定了5个特征峰。其中白芍、川芎、当归均以对照药材为特征指纹图谱,采用中药指纹图谱相似度评价软件建立了炒白芍、酒白芍、土白芍、赤芍、酒川芎、酒当归、黄芪、炙黄芪、党参的特征指纹图谱。 采用高效液相色谱与质谱连用技术,对白芍、赤芍、川芎、当归、黄芪、党参饮片中部分色谱峰进行了指认。其中对白芍、赤芍中12个化学成分进行了指认,对川芎、当归中13个化学成分进行了指认,对黄芪中11个化学成分进行了指认,对党参中4个化学成分进行了指认。 3.含量测定研究 同时建立了白芍、炒白芍、酒白芍、土白芍、赤芍五种饮片中没食子酸、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、五没食子酰葡萄糖含量测定的方法；以阿魏酸为内标,建立同时测定川芎、酒川芎、当归、酒当归四种饮片中阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、藁本内酯4个化学成分含量的方法；建立了高效液相色谱-紫外检测-蒸发光散色检测联用(HPLC-UV-ELSD)测定黄芪、炙黄芪两种饮片中7-O-毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪甲苷含量的方法；建立了党参中党参炔苷含量测定的方法。所建立的12种饮片的含量测定方法精密度、稳定性、重复性、准确度良好,可作为这12种饮片的质量控制方法。

4.水煎出物与醇提取物差异性研究 临床上汤药的使用以及中成药生产过程中,中药饮片多采用水煎方法进行提取,其煎出物的化学成分与用有机溶剂提取的化学物质具有一定的差异性。本文对上述十二种中药饮片的水煎出物与醇提取物进行了差异性研究,以期为临床汤药的使用、中成药生产工艺研究,以及药理毒理研究提供参考。研究结果表明：白芍饮片及其炮制品、赤芍饮片水煮后,其中没食子酸含量升高,儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷含量无明显变化,五没食子酰葡萄糖含量下降；川芎、酒川芎、当归、酒当归水煮后阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ含量无明显变化、洋川芎内酯A、藁本内酯含量明显下降；黄芪、炙黄芪水煮后7-O-毛蕊异黄酮葡萄糖苷等化学成分含量均明显下降；党参水煮后化学成分发生了很大变化,而党参炔苷含量有所下降。
目的：通过应用四氯化碳(CCl4)复合法复制大鼠肝纤维化模型。在疏肝健脾活血法的指导下,运用经方柴胡桂枝汤对肝纤维化模型大鼠进行治疗,并研究此方药对纤维化肝脏中纤维连接蛋白(FN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及血清中层粘连蛋白(LN)和透明质酸酶(HA)表达的影响。 INK 128体外 也许 方法：选取60只Wistar健康雄性大鼠,随机分为6组,分笼饲养,每组10只(分组情况：空白组、模型组、西药对照组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组)。造模采用CCl4复合法,两周后使用柴胡桂枝汤对中药治疗组大鼠进行灌胃,使用秋水仙碱对西药对照组大鼠进行灌胃。大鼠于8周后处死,取肝取血。采用免疫组化方法检测纤维化肝脏中FN、α-SMA表达情况,采用放射性免疫法检测大鼠血清中LN、HA的含量。

结果：模型组大鼠肝脏组织中FN、α-SMA表达明显增高,其中中药中剂量组与除空白组外其他各组表达情况相比,均具有显著性差异(P<0.01)；模型组大鼠血清中LN、HA含量明显增高,其中中药中剂量组与除空白组外其他各组含量相比,均具有显著性差异(P
目的：丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus, HCV）为单股正链RNA病毒，全长为9.6kb。目前全世界近3%的人口为HCV感染者，其中50-80%以上的患者由急性转为慢性持续感染，甚至发展为肝硬化、肝细胞癌。研究发现固有免疫系统和获得性免疫系统均参与了HCV感染、清除及慢性化过程，但其确切机制尚不十分清楚。TIPE2（Tumor necrosis factor-α-inducedprotein8-like2, TNFAIP8L2），即肿瘤坏死因子α诱导蛋白8型-2，是新近发现的一种免疫信号转导通路重要调节器。TIPE2是先天性免疫及获得性免疫的负性调节者，在炎症性疾病中发挥重要作用，也通过作用于Ras信号通路提供从炎症到肿瘤的分子桥梁。先前的研究表明TIPE2不仅高表达于免疫细胞和组织，如淋巴结、淋巴细胞和单核细胞等，也表达于其他非免疫细胞，如腺上皮细胞、分层或假复层上皮细胞及肝细胞、神经元细胞、软骨细胞等。而且对人TIPE2特性的研究表明TIPE2可能参与多种疾病的发生发展，如系统性红斑狼疮、糖尿病肾病、慢性乙型肝炎、肝癌、肾癌等，但具体机制尚不清楚。Luan等应用蛋白印迹法（Western

blot）和RT-PCR检测发现，从BALB/C小鼠脾脏分离提取的CD4+CD25+Treg细胞（简称Treg细胞）中可以检测到TIPE2的表达，且能增强Treg细胞的免疫抑制作用，提示TIPE2基因可能与Treg细胞介导的免疫调控机制有关，但是其具体机制尚不十分清楚。Treg细胞是一群具有免疫抑制作用的T细胞亚群，在感染、肿瘤免疫和移植中发挥了重要作用。据报道，Treg细胞可分泌免疫抑制因子从而直接抑制效应性T细胞的功能。在很多肿瘤疾病中，Treg细胞的广泛浸润提示着预后差、生存率低。人叉头样转录因子p3（forkhead/winged selleck产品 helix transcription factor p3, FOXP3）基因是转录因子forkhead/winged-helix家族成员之一，已被广泛认可是Treg细胞的特异性标记物，是调控Treg细胞发育、分化及成熟的关键转录因子。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（cytotoxic T lymphocyte-associatedantigen4, CTLA-4）是T细胞活化的负性调节子，是Treg细胞的细胞表面分子，对T细胞活化有着抑制作用。鉴于免疫系统内TIPE2基因的正常表达可以有效的防止机体过度反应和维持免疫稳态，我们推测TIPE2基因和FOXP3、CTLA-4在慢性丙型肝炎发病机制中具有某种关联性。 因此，本课题的主要目的是通过检测TIPE2基因及FOXP3、CTLA-4在慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclearcells, PBMCs）中的表达情况，一方面了解慢性丙型肝炎患者PBMCs中TIPE2基因表达情况，另一方面探讨TIPE2和FOXP3、CTLA-4在慢性丙型肝炎发病机制及进展中的作用，为进一步阐明TIPE2在慢性丙型肝炎发生和发展中的调控作用奠定基础。 方法： 1病例选择 慢性丙型肝炎患者60例，男31例，女29例，平均年龄49.40±14.

32倍和64.93倍,且相互呈交叉耐药状态。与亲代细胞相比,两株耐药细胞处于G1期和G2期的细胞增加、处于S期的细胞减少,随撤药时间的延长,细胞的增殖速度加快。两株耐药株的MDR1基因表达水平增高,分别为亲代细胞的4.05倍和5.96倍,P-gp表达为阳性。与MCF-7细胞株相比,MDA-MB-231细胞株ER、PR、HER2表达阴性,是典型的三阴性乳腺癌细胞株。结论成功建立MDA-MB-231/Doc和MDA-MB-231/Epi的耐药细胞株,其生长及耐药性稳定。
曲妥珠单抗(trastuzumab;商品名为Herceptin,赫赛汀)是靶向人表皮生长因子受体2(human

和 epidermal growth factor receptor 2,HER2)的人源化单克隆抗体,与化疗药物联用可显著提高患者的无进展生存期。然而,曲妥珠单抗的原发性和获得性耐药严重制约了其临床疗效及应用。PI3K/AKT/m TOR信号通路的异常活化、HER家族成员间的相互作用、药物压力下代偿性生存信号的激活、肿瘤干细胞表型形成等均可能成为曲妥珠单抗耐药的重要机制。随着曲妥珠单抗耐药机制研究的不断深入,克服耐药的治疗手段也越来越丰富。有研究表明,曲妥珠单抗与其他靶向HER2胞外域的单克隆抗体或靶向其他HER家族成员的抗体类药物联用可增强曲妥珠单抗的疗效。应用PI3K/AKT/m TOR信号通路的小分子抑制剂或耐药相关促生存信号通路的特异性抑制剂可有效逆转耐药发生,延长患者的疾病无进展生存期。深入研究曲妥珠单抗耐药的机制,不断探索逆转耐药的治疗策略,可为乳腺癌个性化治疗方案的建立提供依据。本文将对曲妥珠单抗耐药机制及克服耐药的研究进展做一介绍。
PI3k/Akt/m VE-821价格 TOR信号通路在细胞生长、增殖和生理条件下生存起着核心作用。该信号通路被认为是一个有效的靶向治疗癌症的创新性治疗策略,其异常激活已被证实与急性T淋巴细胞性白血病(T-ALL)相关。尽管多药联合和大剂量化疗等治疗手段不断改进及各类造血干细胞移植的应用和推广,对耐药或复发T-ALL患者治疗效果仍然较差,该病的总体疗效和预后远不如常见的B细胞系淋巴细胞白血病。因此,迫切需要寻找更有效和更少细胞毒性的抗白血病靶向药物,本文就PI3k/Akt/m

TOR信号通路与T-ALL关系的最新研究进展作一综述,以期为T-ALL发病的确切分子机制及治疗提供线索。
靶向药物治疗提升了HER2阳性乳腺癌患者的生存率,基于HER2等分子标记的预后预测及药物响应评估技术成为推动HER2阳性肿瘤精准医学持续发展的因素之一。本文梳理了HER2分子标记与预后预测、药物开发、药物响应评估、联合用药方案研究的国内外专利技术进展,以期为促进我国HER2阳性肿瘤个体化靶向治疗的发展提供参考。
目的:联合用药是近年来肿瘤化疗领域的热点之一,也是克服肿瘤耐药的有效方法之一。GDC-0941是新型的PI3K抑制剂,ABT-737为抗凋亡的Bcl-2家族蛋白Bcl-2,Bcl-xl和Bcl-w的抑制剂,两者均是具有良好临床应用前景的抗肿瘤药物。本实验主要研究GDC-0941与iABT-737联合治疗乳腺癌的体内外协同作用,并探讨两者合用的机制。方法:(1)采用MTT噻唑蓝比色法,测定化合物体外细胞毒作用,并采用软件Calcusyn,对GDC-0941和ABT-737
Phosphatidylinositol 3 kinase(PI3K) and mTOR are key components of the PI3K-Akt-mTOR

signaling cascade,one of the most frequently unregulated pathways in tumor biology.PI3Ks are lipid kinases,which can be divided into three classes:ClassⅠ,ⅡandⅢ2-Aryl-4-morpholinothieno[3,2-d]pyrimidines(e.g.GDC-0…
磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol SCH772984数据表 3-kinase,PI3K)是细胞内重要的信号转导分子,在细胞存活、增殖和分化过程中起重要调节作用。PI3K和其下游分子Akt所组成的信号通路可以激活下游信号分子,PI3K-AKT通路与乳腺癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌、前列腺癌等的发生发展密切相关。因此,近年来,PI3K、在抗肿瘤药物领域已是一个非常活跃的靶标。本文将对PI3K通路及其抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展作一综述。
Summary Regular use of aspirin after diagnosis was associated with longer survival among patients with mutated-PIK3CA colorectal cancer,but not among patients with PIK3CA wild-type cancer.In this study,we showed that combination treatment with clinically achievable concentrations of aspirin and A…

In our work, we report a summary of the main clinical trials(closed and ongoing) MK-1775数据表 that refer to biological therapy evaluation in pancreatic cancer treatment.
目的:观察mi R-409-3b对胃癌细胞侵袭转移的影响,探讨mi R-409-3b通过下调表皮生长因子蛋白7(epidermal growth factor like domain protein 7,EGFL7)调节胃癌侵袭和转移的具体机制.方法:通过基因芯片技术筛选出胃癌及癌旁组织差异性表达的微小RNA(micro RNA m i R N A);采用生物学信息学技术预测E G F L7调控相关m

i R N A,通过对比上述结果,筛选出mi R-409-3b;进一步以mi R-4093b慢病毒及mi R-409-3b mimics过表达mi R-409-3b后,用Western blot检测胃癌细胞中的EGFL7的表达变化;采用Transwell侵袭实验及划痕实验检测mi R-409-3b慢病毒感染后细胞体外侵袭能力的变化;q RT-PCR检测80例胃癌患者癌组织和癌旁组织中mi R-409-3b的表达差异,并分析mi R-409-3b的表达与胃癌患者临床病理之间的关系.结果:基因芯片及生物信息学预测发现m i R-409-3b在胃癌组织中低表达,同时又可能调控E G F L7,双荧光素酶实验证实m i R-409-3b可以结合在E G F L7上,m i R-409-3b慢病毒及mi R-409-3b mimics过表达m i R-409-3b都能在蛋白水平下调E G F L7;m i R-409-3b家族3条m i R N A的q RT-P C R结果表明癌旁组织相对含量高于胃癌组织;Tr

a n s w e l l侵袭实验结果表明:m i R-409-3b与感染空载慢病毒相比感染能显著降低胃癌细胞穿的能力.体外划痕实验的结果表明,经LV-mi R-409-3b感染空载慢病毒比BGC-823细胞的迁移能力明显升高.进一步统计结果表明,mi R-409-3b与淋巴结转移有关(P
目的研究GANT61对人肺癌细胞H1703和A549生长抑制作用,并探讨其作用机制。方法培养H1703和A549细胞,加入不同浓度GANT61 72 h后MTS法检测药物对细胞生长的抑制率;Western blot法观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对Gli1和Gli2蛋白表达的影响。Transwell侵袭实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对侵袭能力的影响。结果 MTS显示GANT61作用于H1703和A549的IC50值分别是8.6μmol/L和8.2μmol/L,GANT61对H1703和A549细胞有明显的生长抑制作用并且呈剂量依赖性。Western 和 blot显示GANT61可显著下调H1703和A549细胞Gli1和Gli2蛋白的表达。Transwell侵袭实验显示GANT61处理组H1703和A549细胞的侵袭能力均明显下降。结论GANT61可以明显抑制H1703和A549的细胞活力和侵袭能力,这表明Hedgehog通路的Gli1和Gli2在肺癌的发生和发展中起着重要作用,Gli有望成为新的抗肿瘤靶点。
目的探讨Hedgehog信号通路转录因子脑胶质瘤相关癌基因1(Gli1)蛋白在结直肠癌组织中的表达及作用。方法免疫组化法检测Gli1蛋白在147例手术切除结直肠癌组织中的表达;Western blotting法检测Gli1蛋白在19例结直肠癌新鲜组织和2个结肠癌细胞系中的表达;同时用共聚焦激光显微镜观察Gli1转录水平的抑制剂GANT61对8例直肠癌组织中直接分离的肿瘤细胞的影响。结果 147例结直肠癌根治切除标本中,Gli1蛋白在78.2%(115/147)的结直肠癌组织中表达升高,阳性信号表达在肿瘤细胞的细胞核和细胞浆。Gli1蛋白在结直肠癌组织中的表达与结直肠癌浸润前缘肿瘤细胞团数目、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(P
Hedgehog信号通路目前已证实对多种肿瘤(包括神经胶质细胞瘤)的发生、发展及迁移起重要作用。本文主要就近年来国内外对Hedgehog信号通路的组成及其与胶质瘤的发生、发展相关研究进行综述,并进一步阐述了Hedgehog信号通路抑制物的相关研究进展,以期能为神经胶质细胞瘤提供一些靶向性临床诊疗新思路。
目的:研究Hedgehog(Hh)信号通路特异性抑制剂环杷明(cyclopamine)对人肝内胆管癌细胞株RBE生物学行为的影响。方法:用台盼蓝染色计数法和MTT比色法检测环杷明对RBE细胞增殖的影响;流式细胞术检测凋亡率,Transwell检测环杷明处理前后RBE细胞侵袭能力的变化,Western

还有 blot检测环杷明处理前后RBE细胞中Gli1和MMP-9的蛋白表达变化。结果:环杷明对RBE细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。环杷明作用细胞24 h、48 h、72 h后,RBE细胞凋亡率逐渐升高,明显高于对照组的凋亡率。Transwell检测对照组穿透细胞数为154.52±13.61,而实验组穿透数为62.00±12.17,侵袭能力明显下降(P<0.01)。Gli1和MMP-9蛋白均在RBE细胞中表达,环杷明下调RBE细胞的Gli1和MMP-9表达。结论:阻断Hh信号通路能抑制RBE细胞的增殖,促进其凋亡,并抑制其侵袭能力。
Preclinical modelling studies are beginning to aid development of therapies targeted against key regulators of pancreatic cancer progression. Pancreatic cancer is an aggressive, stromally-rich tumor, from which few people survive. Within the tumor microenvironment cellular and extracellular components exist, shielding tumor cells from immune cell clearance, and chemotherapy, enhancing progression of the disease. The cellular component of this microenvironment consists mainly of stellate cells and inflammatory cells.

2倍,E6使细胞的运动活性增加1.8倍。在集落形成抑制实验中信号蛋白抑制剂PD98059能够完全抑制变异体RON△160介导导的集落形成。 结论: 一.抗-RON单克隆抗体G9和E6对RON受体具有高度的亲和性并且能够与受体的胞外域特异结合而使RON受体及其下游信号蛋白磷酸化;能够显著增加RON△160介导的致瘤活性,包括:诱导细胞形态改变,集落形成及运动活性增加,具有良好的配体模拟样作用,是配体MSP的有效替代者,也是我们研究变异体RON△160致瘤机制的又一有力工具。 二.RON受体酪氨酸激酶及其下游Erk1/2MAPK信号通路可能在RON及其变异体介导的致瘤活性中具有重要作用。
谷氨酸是中枢神经系统重要的兴奋性神经递质,在神经发育、突触传递、突触可塑性、学习、记忆等一系列脑功能活动中发挥重要作用。而过量谷氨酸可引起NMDA受体的过度活化并诱导神经元死亡,该作用被称为兴奋性神经毒(excitotoxicity)。兴奋毒在许多急慢性疾病中发挥重要作用包括神经退行性疾病、不同原因造成的神经损伤包括缺血/再灌的损伤。根据谷氨酸作用的相对强度和持续时间不同,兴奋毒引起的损伤可能存在坏死或凋亡等不同的细胞死亡形式。坏死性凋亡是新近发现的一种细胞死亡方式,由于兼具坏死及凋亡的特征因此得名,包括出现坏死的形态特征及某些凋亡的信号通路同时伴随自噬的活化。Necrostatin-1(Nec-1)是一种特异且有效的抑制坏死性凋亡的小分子物质,可用来鉴定在神经损伤中是否存在坏死性凋亡的途径。迄今为止,坏死性凋亡的机制并不清楚,Nec-1的发现为评价坏死性凋亡的特征及作用提供了唯一的可能。本研究利用Nec-1作为工具药,通过观察Nec-1对NMDA诱导的兴奋毒的抑制作用,从而明确NMDA诱导的兴奋毒中是否存在坏死性凋亡以及钙超载在其中的作用。实验中通过检测细胞活力、LDH释放及Calcein-AM染色观察NMDA的毒性作用及证实Nec-1的抑制作用,通过激光共聚焦检测NMDA引起的胞内Ca~(2+)升高及Nec-1的作用,证实Ca~(2+)超载在坏死性凋亡的作用。

确认细节 结果显示:1. Nec-1抑制NMDA引起的细胞活力的降低。换句话也就是说Nec-1预处理引起细胞活力的增加,并呈剂量依赖性。Nec-1(30μmol/L)和Nec-1(100μmol/L)分别使其增加12%(p 通常 < 0.05)和26%(p < 0.01),但Nec-1(10μmol/L)并不能抑制NMDA引起的细胞活力的降低。 2. Nec-1抑制NMDA引起的活细胞数的减少。Nec-1(30μmol/L)和Nec-1(100μmol/L)分别使活细胞数增加11%(p < 0.05)和23%(p < 0.01)。 3. Nec-1抑制NMDA引起的LDH释放的增加。Nec-1(30μmol/L)和Nec-1(100μmol/L)分别使LDH释放减少14%(p < 0.05)和28%(p < 0.01)。 4. Nec-1抑制NMDA引起的胞内Ca~(2+)的升高。Nec-1(100μmol/L)使NMDA诱导的胞内Ca~(2+)的升高降低36%(p

< 0.05)。 上述结果表明,除坏死和凋亡外,坏死性凋亡也参与兴奋性神经毒的病理过程。由于NMDA引起兴奋毒在多种损伤中发挥重要作用,因此预防和治疗兴奋毒对预防和治疗神经损伤有至关重要的意义。由于坏死性凋亡具有可调控的特征,因此提供了一个更有意义的预防治疗兴奋性神经毒的靶点。结论:1.坏死性凋亡参与NMDA诱导的兴奋毒;2.胞内Ca~(2+)升高可能是坏死性凋亡发生的机制之一;3.尽管坏死性凋亡在NMDA诱导的兴奋毒中起作用,但其作用可能仅占其中一小部分。
目的建立同步观察行为学和脑电波变化的槐定碱致痫大鼠癫痫模型,观察清醒状态下槐定碱致痫大鼠行为学和脑电波的变化;探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated 并且 protein kinase,MAPK)信号转导通路中的主要成员细胞外信号调节蛋白激酶ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2)通路及其活化形式—磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)在槐定碱致痫大鼠海马细胞的表达变化规律及其意义,进而探讨该通路在癫痫发病机制中的作用。 方法①Sprague Dawley大鼠随机分为生理盐水对照组和槐定碱致痫组,通过脑立体定位仪将自制埋藏电极植入大鼠海马一周后,腹腔注射槐定碱(sophoridine,SRI)建立急性化学点燃癫痫大鼠模型,对其行为学和脑电图上的痫性放电进行同步观察。②S D大鼠随机分为生理盐水对照组、槐定碱致痫组、苯巴比妥钠(phenobarbital sodium,PBS)﹢槐定碱组和PD98059﹢槐定碱组,应用免疫组化染色方法检测各组大鼠致痫后0.5h、1.5h、5.0h、8.0h海马CA1区和CA3区ERK1、ERK2和p-ERK1/2的免疫阳性神经元数量的变化和应用Western blot方法进一步检测各组大鼠各时间点海马该三种蛋白表达规律;同时采用HE染色方法和电镜技术观察海马CA1区和CA3区神经元组织病理学和形态学的改变。 结果 1.行为学及大鼠清醒脑电图表现 槐定碱致痫组大鼠腹腔注射槐定碱后,大鼠由活动状态逐渐变得安静,随后出现呆滞,部分动物出现呼吸急促,经8.46±1.62min的潜伏期后,大鼠逐渐出现癫痫样发作表现。开始出现须动、点头、咀嚼样动作,尾巴翘起,湿狗样抖动,伴流涎,至0.5h左右开始有面肌抽动、双前肢抬起阵挛或单肢抽搐,随后出现姿势失衡,跌倒,阵挛抽搐,继之发生全身强直,持续36.84±5.69min,点燃率达100﹪,达到Ⅳ级以上发作的成功率为80%,死亡率为20%。在大鼠痫性发作的同时脑电图出现频发性尖波单棘波,棘波、棘慢波,发作性节律波等癫痫样放电。生理盐水对照组大鼠脑电图均为基础波,且无癫痫样放电。槐定碱致痫大鼠癫痫发作过程中伴有与行为相一致的清醒脑电图改变。 2.

OGD was achieved by exposingthe cells to glucose-free DMEM and placing the 什么 cells in an anaerobic chamber flushed with 5% CO_2and 95% N_2 (v/v) at 37 ℃ for 1 hour.MAIN OUTCOME MEASURES: TTC staining

was used to measure infarct volume 7 days afterphotothrombotic stroke. Cell viability was evaluated using the MTT kit. Opening of the mitochondrialpermeability transition pore, intracellular concentration of superoxide anion, and calcium after OGDwere detected with fluorescence intensity of calcein-AM, hydroethidine, and fluo-3/AM.RESULTS: At 7 days after stroke, total infarct volume and cortical infarct volume were significantlygreater in the APP/PS1 transgenic mice compared with the wildtype littermates mice (P < 0.01). Aβ,OGD, and

Aβ + OGD significantly decreased cell viability and increased fluorescence intensity ofhydroethidine and fluo-3/AM (P < 0.01 以及 ). Compared with the Aβ or OGD group, Aβ + OGDsignificantly decreased cell viability (P < 0.01) and significantly increased fluorescence intensity ofcalcein-AM, hydroethidine, and fluo-3/AM (P < 0.01 or P < 0.05).CONCLUSION: The APP/PS1 double-transgenic mice were more vulnerable to ischemia. Thepossible mechanisms included enhanced opening of the mitochondrial permeability transition pore,overproduction of superoxide anion due to pore opening, and disturbed calcium homeostasisinduced by excess superoxide anion.
目的:探讨GSK3β在失代偿期肝硬化患者中感染早期炎症因子过表达中的作用及其机制。方法:分离失代偿期肝硬化患者与对照组的PBMCs,给予/不给予GSK3β抑制剂SB216763,同时使用LPS刺激,使用ELISA检测细胞上清液TNF-α、IL-6、IL-12的含量,使用Western blot检测细胞裂解液中p-GSK3β的表达情况。结果:LPS刺激肝硬化组PBMCs之后,可以产生过量的前炎症因子如TNF-α、IL-6、IL-12。GSK3β抑制剂SB216763抑制肝硬化组PBMCs的IL-12、TNF-α、IL-6的产生;LPS刺激肝硬化组患者PBMCs、GSK3β的磷酸化程度较对照组明显减低。结论:肝硬化患者PBMCs在LPS的刺激下,可以产生过量的前炎症因子如TNF-α、IL-6、IL-12,这是由于肝硬化患者中GSKβ的磷酸化减低,进而导致其活性增强而造成的;同时,肝硬化患者炎症细胞因子的过量产生,仍然可以被GSK3β的抑制剂所抑制。
目的探讨GSK-3β对小鼠骨髓树突状细胞(BMDC)成熟和功能的调控作用。方法脂多糖催熟BMDC,Western Epigenetics合成 Library查找购买 blotting检测刺激前后糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化水平的改变;利用GSK-3β的选择性抑制剂SB216763处理BMDC,检测表型、细胞因子表达和混合淋巴反应(MLR)的变化情况;构建过表达小鼠GSK-3β的慢病毒载体并转染DC2.4细胞,Western blotting检测过表达GSK-3β对调控树突状细胞(DC)成熟的关键调控因子鸟的网状内皮组织增生病毒癌基因相关B(Rel B)蛋白水平的影响。结果经脂多糖处理后,GSK-3βY216磷酸化水平下调,Ser9磷酸化水平显著上调,表明GSK-3β的活性显著下降。抑制GSK-3β的活性能上调DC表面共刺激分子CD40和CD86的表达,削弱脂多糖诱导的促炎细胞因子IL-6和IL-12表达上调,而对抗炎细胞因子IL-10的表达有促进作用,同时降低脂多糖诱导成熟的DC刺激同种异基因T细胞增殖的能力。在未成熟的DC2.4细胞中,过表达GSK-3β能够下调Rel

B的水平。结论 GSK-3β参与调控DC的成熟和功能,高活性的GSK-3β抑制未成熟树突状细胞(i DC)的自发性成熟,GSK-3β失活后促进DC表型的成熟,而在脂多糖诱导DC分化的过程中GSK-3β发挥促炎作用。GSK-3β能够下调Rel B的蛋白水平,有望成为构建新型耐受性DC的新靶点。
Pancreatic cancer is the fourth most common cause of cancer deaths worldwide. Although recent therapeutic developments for patients with pancreatic cancer have provided survival benefits, the outcomes for patients with pancreatic cancer remain unsatisfactory. Molecularly targeted cancer therapy has advanced in the past decade with the use of a number of pathways as candidates of therapeutic targets.

636、0.702和0.581,立体场和静电场的贡献分别为0.7和0.3,并用测试集进行了验证。测试集非交叉验证相关系数(r2pred)为0.808。该模型具有显著的统计学意义,为进一步开发新的双吗啉类PI3Kα抑制剂奠定了基础。
真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)在蛋白翻译起始过程中发挥重要作用,与肿瘤细胞的生长、增殖和分化等密切相关。随着对eIF4E功能及相关信号通路研究的不断深入,以eIF4E及相关信号通路为靶点的药物在肿瘤治疗中的作用日益引起重视。目前已有部分相关抗肿瘤药物上市或进入临床试验。本文综述了作用于eIF4E及相关通路的小分子抑制剂的研究进展。
癌症发生是一个多阶段的过程,涉及到调控着各种细胞功能的数以百计的基因和基因产物。当今的主流观点认为,可以利用靶向特定或多个癌基因、信号蛋白或转录因子的小分子抑制剂来预防癌症发生。多种食物成分被认为有望成为这样的抑制剂,其中很多似乎都作用于多种肿瘤相关的细胞信号通路,具有强抗癌活性、低毒性和有限的毒副作用。因此,联合用药或者多靶点药物的策略日益被认可。强有力的现代技术对于加速发现药物尤其是可抑制多条细胞信号通路的化合物是必需的。例如,结合超级计算机技术如虚拟筛选、蛋白结构测定和实验室验证分析来鉴定特定抗癌化合物的多种蛋白靶标。本文重点讨论了PI3-K/PTEN/Akt/mTOR和Ras-Raf-MEK-MAPK这两条在癌症发生中有重要作用的信号通路,描述了计算机技术在鉴定这些通路的小分子抑制剂中的应用。最后,本文介绍了几个运用上述组合策略所鉴定验证的可用于化学预防的小分子及其蛋白质靶标。
研究苯并咪唑类化合物对PI3Kδ抑制作用的三维定量构效关系。采用CoMFA(比较分子场)方法进行研究,建立CoMFA模型。结果:交叉验证系数q2=0.702,相关系数r2=0.981,F=104.661,标准偏差SD=0.211。结论:苯并咪唑类PI3Kδ抑制剂CoMFA模型具有较好的预测能力,本实验研究的三维定量构效关系,对开发和研制此类抑制剂能够起到重要的指导作用。
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)是细胞内重要的信号转导分子,在细胞存活、增殖和分化过程中起重要调节作用。PI3K是PI3K/AKT/mT0R信号转导通路中的关键节点蛋白,调控着重要的生命活动。现已证实磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks)是潜力巨大的药物治疗靶点,特别是PI3Kα现己成为抗肿瘤治疗的重要靶点之一。目前己有多种针对PI3Ks的抑制剂进入临床研究。然而现有抑制剂的化学类型不多且选择性不高、临床应用受局限。因此积极研究和开发结构新颖的PI3K选择性抑制剂对于疾病的靶向治疗具有重要意义。本文将对选择性PI3K抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展作一综述。
生物活性化合物作用靶点的确认是化学生物学和药物开发中的关键问题之一。随着科技的进步与发展,许多靶点鉴别的方法和技术已经被报道。目前的靶点鉴别方法主要有两大类:亲和色谱为基础的直接法,通过检测药物与其靶点的结合来鉴别靶点;非亲和为基础的间接法,通过生理学反应或生物化学标记而推断药物的靶点或作用途径。本文主要围绕这两类靶点鉴别方法进行综述。
PI3K-Akt信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,在体内发挥着促进细胞增殖和抑制凋亡的关键作用,它与人类多种肿瘤的发生和发展密切相关。本文就PI3K-Akt信号通路的功能、调节与肿瘤的相关性及其在肿瘤治疗中的应用等方面进行文献综述,以期能为以PI3K-Akt信号通路中某些关键分子为靶点的肿瘤治疗及靶向药物研究提供参考。
PI3K-AKT信号通路是重要的细胞内信号转导通路,与类风湿性关节炎(RA)的发生发展密切相关。该信号通路的活化状态受到严密调控:包括负调控因子PTEN、SHIP和正调控因子TNF-α、TGF-β、TRAIL等。RA患者滑膜细胞中此信号通路处于异常激活状态,导致下游抗凋亡基因高表达并且影响下游多种效应分子,在RA患者关节滑膜细胞增殖和凋亡失衡中发挥关键作用。过度增生的滑膜细胞向关节软骨和骨组织浸润生长,导致患者关节畸形和功能障碍。因此,使用PI3K-AKT信号通路抑制剂或上调该信号通路中的内源性负性调节蛋白的表达可逆转RA滑膜细胞的过度增殖,为治疗此疾病提供新靶点。
应用分子靶向药物治疗晚期肺腺癌已逐渐成为当今临床研究的主流,其中EGFR基因突变患者可从靶向治疗中获益。肺鳞癌驱动基因的研究相对较少,近期多种检测技术对肺鳞癌标本进行基因检测,结果发现多数标本存在多个可测靶点,针对这些靶点已开发出一系列药物,其疗效仍待观察。
目的检测瘢痕癌中PI3K/AKT信号通路中PI3K,AKT及其下游靶基因Bcl-2的表达,分析该通路靶向治疗靶点及靶向治疗的可行性。方法研究对象为瘢痕癌组织,以正常皮肤表皮为对照。免疫组织化学(SP法)技术检测PI3K,AKT,Bcl-2蛋白的表达;原位杂交技术检测PI3K

更多 17-AAG体外 Ibrutinib mRNA,AKT mRNA的表达。结合图像分析,分别计算被检组织中所检各项指标的平均光密度和阳性面积,所有数据运用SPSS16.0软件进行统计学分析。结果 PI3K蛋白及其mRNA在正常皮肤表皮呈阴性表达,在瘢痕癌组织中呈阳性表达。瘢痕癌组表达水平、表达强度与正常皮肤组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。AKT蛋白及其mRNA在正常皮肤表皮呈阴性表达,在瘢痕癌组织呈强阳性表达。瘢痕癌组表达水平、表达强度与正常皮肤组比较,差异有统计学意义(P0.

观察TGF-β1对外膜成纤维细胞增殖、迁移、表型转化和细胞外基质合成的影响。 2.探讨TGF-β1/Smad信号通路在外膜成纤维细胞增殖、迁移、表型转化和细胞外基质合成中的作用机制,并研究Smad2和Smad3在这些过程中的不同作用。 方法 1.体外原代成纤维细胞的培养与鉴定：采用组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉成纤维细胞。大概3-7天可见细胞从组织块周围爬出；SABC法行平滑肌肌动蛋白-α(alpha

smooth muscle actin,α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学染色鉴定。取第3-8代细胞用于实验。 2.小干扰RNA链的合成、有效浓度的筛选：设计并分别合成3条Smad2和Smad3特异性siRNA,同时合成荧光标记的阴性对照siRNA(FAM-siRNA)1条和Smad2/3非特异性阴性对照siRNA 1条。细胞密度达50%-70%时转染FAM-siRNA。转染后荧光显微镜观察荧光阳性细胞,计算转染效率,根据转染效率选择siRNA和Lipofectamine 2000最佳转染浓度。 3.细胞转染和小干扰有效链的筛选：根据Lipofectamin 2000的转染步骤,用western-blot检测各组siRNA的干扰效率,进行有效链的筛选。 4.MTT法检测细胞的增殖能力：接种细胞,按照说明进行细胞转染,24h后,加入含20 ng/ml TGF-β1的正常培养液,继续刺激24h。于刺激结束前4h每孔加入MTT,然后吸弃上清,加入DMSO,比色。 并且 5. Transwell检测细胞迁移能力：应用6孔板transwell小室行体外迁移实验。细胞分组和处理同前,处理过的细胞消化后用DMEM制成细胞悬液,取0.6 ml悬液以5×105/ml的密度接种于上室,下室中加入1.5 ml含10%FCS的正常培养基。37℃培养6h,将上室内侧附着的细胞用湿棉签擦去,固定,伊红和苏木素染色,倒置显微镜下随意取5个视野进行细胞计数(×100)。 6.实时定量PCR检测相关因子mRNA的表达：细胞处理同前,采用Trizol法提取总RNA,并在PCR热循环仪上将RNA逆转录为cDNA。观察基因沉默和TGF-β1处理后,Smad2、Smad3、Smad7、α-SMA、Ⅰ型及Ⅲ型前胶原肽mRNA的表达。采用2-ΔΔCt方法对mRNA表达进行相对定量分析。

7. Western-blot检测相关因子蛋白的表达：取对数生长期细胞消化计数,转染24h后,加入TGF-β1孵育24h,提取蛋白并定量,western-blot检测p-Smad2、p-Smad3、Smad2、Smad3、Smad7、α-SMA、Ⅰ型前胶原肽蛋白表达。 不 8.统计学处理所有数据资料均采用SPSS 16.0进行统计处理。实验数据用x±s表示,组间差异采用one-way ANOVA分析和t检验,P0.05)。 4.基因沉默Smad2或Smad3对外膜成纤维细胞迁移的影响 (1)与正常对照组相比,TGF-β1刺激后细胞迁移能力显著增强(P<0.01)；下调Smad2基因表达之后,细胞迁移较TGF-β1刺激组减弱(P0.05)。 5.基因沉默Smad2或Smad3对TGF-β1信号转导通路相关因子mRNA表达的影响 (1)经TGF-β1刺激后,Smad2、Smad3、α-SMA、Ⅰ及Ⅲ型前胶原mRNA表达均较正常组显著增强(P<0.05或P0.05).SiRNA介导Smad2表达下调后,与TGF-β1刺激组相比,α-SMA、Ⅰ及Ⅲ型前胶原mRNA表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P0.05)。 不 (2) Smad3基因被沉默后,α-SMA, I及Ⅲ型前胶原mRNA较TGF-β1刺激组减弱,其差异具有统计学意义(P<0.05或P0.05)。

(3)SiRNA-Smad2和siRNA-Smad3均能显著α-SMA、Ⅰ及Ⅲ型前胶原mRNA表达,但两者之间差别无统计学意义(P均>0.05)。 6.基因沉默Smad2或Smad3对TGF-β1信号转导通路相关因子蛋白表达的影响 (1)经TGF-β1刺激后,Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3、α-SMA、Ⅰ型前胶原蛋白表达均较正常组显著增强(P0.05)。SiRNA介导Smad2表达下调后,与TGF-β1刺激组相比,p-Smad2、α-SMA、I型前胶原蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P< 0.01),Smad7蛋白表达则无显著差异(P>0.05)。 (2) Smad3基因被沉默后,p-Smad3、α-SMA、Ⅰ型前胶原蛋白较TGF-β1刺激组减弱,其差异具有统计学意义(P0.05)。 (3)SiRNA-Smad2和siRNA-Smad3均能显著α-SMA,Ⅰ型前胶原蛋白表达,但两者之间差别无统计学意义(P>0.05)。 结论 1.实验中所选用siRNA可以高效并特异地阻断Smad2或Smad3的表达。 2. TGF-β1对外膜成纤维细胞的增殖有促进作用,Smad2和Smad3信号通路共同参与其中。 3. TGF-β1促进外膜成纤维细胞的迁移,这一过程需要Smad2和Smad3的共同参与。 4. TGF-β1诱导成纤维细胞转分化和胶原沉积,是依赖Smad2和Smad3信号转导通路的共同作用。 研究背景 高血压病是严重危害人类健康的常见病和多发病,其发病率逐年升高,目前我国成人发病率高达18.