8%，IL-1β分别降至22%和45%，TNF-α分别降至22.4%和16.3%。 (5) TLR2抗体预处理THP-1细胞30min后再用6μg/mL pORF5蛋白刺激THP-1细胞12h，IL-1β、IL-8和TNF-α产生水平与处理前相比，IL-1β、IL-8和TNF-α分别降低9.8%、32.7%和25.3%。 结论: (1) Ct pORF5蛋白可诱导THP-1细胞产生前炎症CKs：IL-8、IL-1β和TNF-α；
(2) pORF5蛋白可激活p38/MAPK和ERK1/2/MAPK通路，活化的p38/MAPK和ERK1/2/MAPK通路通过TLR2参与pORF5诱导前炎症细胞因子IL-8、IL-1β和TNF-α的产生。
本文利用功能性细胞模型对中草药及其分离组分进行筛选分析，并用免疫荧光，蛋白印迹等生化实验技术进一步验证其作用机制，这种建立在TCRP（Time/dose-dependentcell 无 response pattern）技术上的功能性细胞模型不仅为中草药的活性筛选和功能预测提供了一个很好的研究手段，也对中草药的开发应用具有一定的指导意义。鉴于中草药物种丰富、成分复杂的特点，为了更好地研究中草药，建立多种反映不同细胞功能的细胞模型也具有很大的价值，因此本文还基于该技术建立了肠道上皮屏障的细胞模型。主要内容如下： 1. TCRP技术的原理及其用于细胞学研究的概况 基于微电子阻抗的实时细胞功能分析仪可以监测到特定的细胞对外界刺激时间剂量依赖的反应，这项技术被称之为TCRP技术,本章主要对该技术的原理以及其在细胞功能学上的研究进展做一综述。
2．基于EGF/EGFR（Epidermal growth factor/Epidermal growth factor receptor）模型的怀山药抗肿瘤活性研究 本文利用EGF/EGFR模型对大批量的中草药进行筛选分析得到山药是具有抑制EGF信号功效的中药材之一。在山药分离的不同组分中，低极性组分具有明显的抑制EGF信号的作用，并用蛋白印迹实验检测到该组分降低了EGF信号通路中一个重要蛋白的磷酸化水平。另外还用顺铂诱导细胞凋亡的模型筛选了山药的不同分离组分，发现可以有效降低顺铂IC50的有效部位也该极性段，由此我们推测山药提取物的低极性组分可能具有抗肿瘤活性。 3．基于TCRP技术的肠道上皮屏障模型的建立 利用微电子传感器细胞实时分析仪动态监测肠上皮Caco-2细胞对乙醇刺激的反应所得到的阻抗值的变化趋势与传统评价上皮屏障功能的跨上皮电阻法所得到TER图谱非常吻合，免疫荧光图像显示细胞骨架蛋白F-actin与紧密连接蛋白ZO-1在乙醇的刺激下同步发生定位的改变。另外，表皮生长因子EGF，一氧化氮合成酶（iNOS）抑制剂在该系统上被检测出可以缓解乙醇对屏障的损伤，与前人的报道相一致，进一步证明了利用这项基于微电子阻抗的动态检测体系来评价上皮屏障功能的可行性。该方法与传统方法相比具有不需要标记，动态连续监测，高通量的优点，因此这个模型的建立为筛选保护屏障药物搭建了一个很好的平台。
从血水草根及根茎中提取的血水草总生物碱(Eomecon Gefitinib数据表 selleck screening library chionantha alkaloids, ECA)被课题组证实具有良好的杀螺作用,白屈菜红碱(chelerythrine, CHE)是ECA的主要成分之一。从ECA中分离单体白屈菜红碱进行杀螺作用及其杀螺机制研究,为血水草作为植物杀螺剂开发利用提供新的实验依据。 从血水草粉末中分离CHE。参考WHO规定的“杀螺剂实验室终筛方法”的浸泡法进行杀螺试验。于20℃、25℃、30℃温度下,观察钉螺在25mg/L、12.5mg/L、6.25mg/L、3.125mg/L、1.5625mg/L、0.7813mg/L、0.3906mg/L、0.1953mg/L浓度的CHE溶液中浸泡24、48、72、96h死亡率。设去氯水对照组。通过对数据进行逐步回归计算建立回归数学模型和因素分类区域处理,探讨温度、时间、药物浓度等各种因素对杀螺效果的影响及变化规律。
以钉螺肝脏为样本,探讨CHE杀螺机理。设置CHE20mg/L10mg/L、5mg/L水溶液和清水组25℃浸泡钉螺36h,解剖活螺,分离肝脏,提取肝细胞DNA,进行DNA琼脂糖凝胶电泳；将肝组织捣碎,制备肝细胞悬液,用流式细胞术检测CHE溶液是否诱导钉螺肝细胞凋亡 配制5mg/L CHE的水溶液,浸泡钉螺36h,解剖活螺取肝脏,提取CHE处理组和清水对照组钉螺肝脏蛋白质,双向凝胶电泳,ImageMaster2D5.0软件分析图谱,筛选差异蛋白质,并用质谱鉴定。分析CHE致钉螺肝脏蛋白质表达的变化。 CHE杀螺研究及对钉螺肝脏损伤机制研究发现： (1)CHE具有良好的杀螺作用。温度20℃、96h、CHE浓度25mg/L钉螺死亡率可达90％:25℃、CHE浓度0.7813mg/L以上、浸泡96h钉螺死亡全部死亡；温度30℃、CHE浓度0.1953mg/L以上、浸泡72h以上钉螺死亡率均达100%；浓度0.1953mg/L以上浸泡96h,20℃、25℃、30℃温度杀螺效果与对照组差异均具有显著性(P0.