52μg/mL。细胞实验结果显示,紫菜多糖和龙须菜寡糖均能够显著抑制Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)水平,促进Th1细胞因子(IFN-γ,紫菜多糖还能促进IL-10的产生)的产生,紫菜多糖和龙须菜寡都能有效缓解空肠组织的过敏病理现象。紫菜多糖诱导IFN-γ的产生是通过JNK和JAK2两条信号通路途径。 综上所述,紫菜多糖和龙须菜寡糖均能够显著降低小鼠血清特异性IgE和IgG1的水平,促进IgG2a的水平,能够促进Th1细胞因子的水平,抑制Th2细胞因子的水平,能有效缓解空肠组织的过敏病理现象。这些结果说明紫菜多糖和龙须菜寡糖能够有效调节辅助性T细胞的免疫功能向Th1细胞转换,使Th1、Th2细胞重新处于相对平衡状态,从而抑制Th2细胞主导的食物过敏反应。
肿瘤(Tumor)已成为当前人类健康的一大杀手,严重威胁着人们的生命与健康。肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤,是导致癌症相关死亡的主要因素。于此同时,动物肿瘤病的发病率和病死率也呈上升趋势。马立克氏病(Marek’s
disease,MD)等肿瘤病具有高致病性和传染性,给畜牧业生产造成了严重损失。中药治疗肿瘤具有许多优势,从天然植物中寻找抗肿瘤活性成分是抗肿瘤药物研发的热点。秦岭主峰太白山为我国三大“药山”之一,中草药资源丰富,其中有149种以“七”字命名的药用植物,即太白“七药”。本研究从太白“七药”中筛选出6味中草药组成抗肿瘤中药方剂“肿瘤消”。为了验证“肿瘤消”方剂的抗肿瘤活性和作用机理,以人肺腺癌A549细胞和马立克氏淋巴瘤MDCC-MSBl细胞为主要的体外肿瘤细胞模型,对“肿瘤消”方剂诱导肿瘤细胞凋亡的作用和机理进行了研究,目的在于为科学、合理地开发太白山中草药资源提供指导,为临床抗肿瘤药物筛选提供理论支持。
一般 (1)“肿瘤消”方剂对多种肿瘤细胞具有抗肿瘤活性。采用MTT法对“肿瘤消”方剂的抗肿瘤活性进行了检测,结果表明“肿瘤消”方剂对马立克氏淋巴瘤MDCC-MSBl细胞、人肺腺癌A549细胞、大鼠胶质瘤C6细胞、小鼠骨髓瘤SP2/0细胞和人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用,但对正常人胚肾293A细胞的增殖无显著影响。 那个 (2)“肿瘤消”方剂具有明显的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。采用细胞形态学观察和Hoechst332580染色法对“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡的作用进行了检测,两种方法均证实“肿瘤消”方剂具有诱导A549细胞凋亡的作用;采用DNA片段化分析和线粒体膜电位势能检测法对“肿瘤消”方剂诱导MDCC-MSBl细胞凋亡的作用进行了检测,两种方法均证实“肿瘤消”方剂具有诱导MDCC-MSBl细胞凋亡的作用;采用AnnexinV/PI双染法,流式细胞仪检测分析“肿瘤消”方剂对肿瘤细胞(MDCC-MSBl、A549、C6、SP2/0、HeLa)凋亡率的影响,结果证实“肿瘤消”方剂作用后肿瘤细胞的凋亡率明显上升。 (3)“肿瘤消”诱导A549细胞凋亡涉及到p38MAPK信号通路的持续活化,是由死亡受体途径和线粒体途径共同介导的。采用Western Blotting对“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡的死亡受体通路和线粒体通路进行检测,同时对细胞凋亡信号通路相关调控基因(p38、p-p38、p53、p-p53、Bax、Bcl-2)的表达水平进行检测。Western 还有 Blotting检测结果证实“肿瘤消”诱导A549细胞凋亡涉及到p-p38MAPK信号通路的持续活化,与死亡受体(TNF-R1、DR5)活化以及caspase8活化有关,启动细胞凋亡外源性死亡受体途径。此外,“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡过程中,上调了p53基因的蛋白表达水平,进而上调Bax表达水平,同时下调Bcl-2的表达水平。在Bcl-2和Bax共同调节作用下,线粒体膜电位下降,cytochrome
c从线粒体释放到细胞质,导致caspase9活化,启动细胞凋亡内源性线粒体凋亡途径。死亡受体通路和粒体途径在均caspase3处汇合,诱导A549细胞发生凋亡。
凡纳滨对虾(Litopeneaus vannamei),又称南美白对虾、万氏对虾,由于其具有生长速度快、抗病能力强、适合高密度养殖和营养成分高等优点,成为我国乃至世界对虾养殖中的主要品种,然而,我国凡纳滨对虾养殖仍然受到营养、品种及病害的制约。研究凡纳滨对虾肌肉生长发育和免疫系统根本机制,为提高凡纳滨对虾生长速度和抗病能力提供理论依据,对凡纳滨对虾高效健康养殖具有重要的意义。 本研究中通过同源克隆获得了凡纳滨对虾p38的cDNA部分序列并对其进行了生物信息学分析,同时利用实时定量PCR检测了p38的组织分布和蜕壳周期不同阶段表达量变化,然后通过双链RNA干扰和抑制剂阻断法分别沉默p38的表达和抑制p38酶活性后检测肌肉相关基因表达量的变化,最后分析了p38在不同细菌和病毒感染后的表达规律和白斑综合症病毒感染后虾体内病毒拷贝数的变化规律。 实验结果表明,本研究克隆获得了凡纳滨对虾p38cDNA部分序列,克隆片段长1206bp,包括1098bp的开放阅读框,编码365个氨基酸,蛋白分子量为41.87kDa、等电点约为6.