有鉴于此,我们拟通过实验研究Ackl以及P130CAS在前列腺癌细胞株表达情况及可能的相互关系；再构建Ackl基因敲减干扰细胞株的稳定模型,对沉默Ack后的PC-3细胞株进行相关的细胞生物学实验研究及药物干预实验研究,研究AckI蛋白基因敲减后PC-3细胞的生物学行为的改变,以及对药物干预的影响,借以充分挖掘AckI以及P130CAS在Obeticholic Acid订购前列腺癌的发生发展以及药物治疗方面的作用。 研究方法 1.采用Western blot及RT-PCR方法检测AckI及P130CAS mRNA和蛋白在激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP及激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3中的表达水平。 2.利用慢病毒介导的RNA干扰技术试行构建逆转录shRNA干扰AckI质粒,NSC683864订单转染激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞,干扰PC-3细胞AckI蛋白的表达,构建低表达蛋白的模型,并通过荧光显微镜观察、PCR双酶切和免疫印迹对其验证。 3.体外采用MTT实验、平板集落形成实验、划痕愈合实验、Transwell实验等方法以及研究沉默后相关小G蛋白家族以及P130CAS蛋白的表达情况,从体外5-FU化学结构层面进行AckI基因表达调节作用机制研究。 4.观察shRNA沉默AckI基因对PC-3细胞多西紫杉醇化疗敏感性的影响,实验分为PC-3+DTX组、PC-3+NC-shRNA+DTX组和PC-3+AckI-shRNA+DTX三组,每组另外设一个未化疗的平行对照组。转染后24小时起给予终浓度为0.25μM多烯紫杉醇,MTT法测各组细胞生长增殖变化；流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞的周期分布。