..π堆积间的相互作用形成的。
含有苯并咪唑骨架的化合物,具有广泛的生物活性,特别是在医学中的抗菌、抗病毒、抗炎和抗癌；农药中的杀虫、除草和植物生长等方面的作用就更为显著；研究表明含有苯并咪唑骨架的季铵盐还可成为优良的阴离子识别探针。本文设计了简捷高效的方法,首次合成了一类新型的具有三脚架型、复合功能的分子,探究了其在医药、农药、和阴离子识别中的应用,并研究了其对阴离子识别过程的作用方式,具体的内容如下： 首先,苯并咪唑因其高效、低毒和合成简便等特点已被广泛的应用到医药、农药等方面,通过活性叠加原理,将三氯三乙胺与苯并咪唑反应,得到了重要的中间体TBM,然后将TBM与不同取代的苄氯、溴代烷反应,首次合成了25个未见报道的新型目标产物TBMQ。探究了TBM和TBMQ合成的最佳条件分别为：TBM的合成最佳条件：物料比为苯并咪唑：三氯三乙胺(mol/mol)=3.2:1,溶剂为四氢呋喃,以NaH为碱,70℃下反应4h,收率达88%；合成TBMQ的最佳条件为：TBM与芳香苄氯反应,在110℃下,DMF为溶剂,反应48h所得到的收率最佳,最高可达78%。通过IR、1HNMR、13C

还有 HMR和HRMS等进行了结构表征,结果表明成功合成了具有三脚架型结构的目标化合物。 其次,对25个目标产物TBMQ进行了药物活性的研究。TBMQ对蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPlB)和细胞周期分裂蛋白酶(Cdc25B)的抑制活性测试结果表明,含有氨基、吡啶、氟原子的分子对蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)具有一定的抑制活性,尤其是含有吡啶基元的分子TBMQ-19抑制效果最为显著,IC50.0.31±0.05μg/mL,优于对比参照物齐墩果酸(IC50=1.27±0.19μg/mL)；含有吡啶、氨基、吲哚和氟原子的分子对细胞周期分裂蛋白酶(Cdc25B)具高效的抑制活性,其中以吡啶、氨基、吲哚为基元的分子IC50均低于对比物正矾酸钠(1.86±0.24μg/mL),特别是以氨基为基元的分子TBMQ-14的抑制效果最为显著,IC50=0.65±0.12μg/mL.有望成为PTP1B和Cdc25B的抑制剂,为该类药物的研发提供了重要的参考依据。

selleck化学 第三,对25个目标产物TBMQ进行了植物生长调节和除草活性的测试。通过黄瓜子叶生根法研究了TBMQ对细胞分裂素活性的促进作用,其中多数表现出了优良的效果,具有毗啶环结构的TBMQ-19促进效果最佳,可以达90.3%；通过小麦芽鞘法研究了生长素活性的促进作用,结果表明,含有吲哚的化合物TBMQ-17的活性最高,其活性可达47.8%,其余化合物多表现一定的活性；在对稗草除草活性的研究中,目标分子均表现出了一定的抑制作用,含有硝基的TBMQ-10除草效果最佳,可达95.6%。实验结果表明具有新型结构的目标分子在农药应用中具有潜在的应用价值。 最后,对目标产物在阴离子识别方面进行了探究。将浓度为1×10-5mol/L目标化合物分别和浓度为2×10-4mol/L的F-、Cl-、Br-、I-、H2PO4-和CH3COO-进行了荧光性能的测定,结果表明Ⅰ-产生了高效的猝灭效果,说明目标化合物TBMQ可作为Ⅰ-识别的荧光探针,同时对Ⅰ-的猝灭机理进行了研究：通过紫外吸收数据结果显示该类化合物和Ⅰ-作用时,没有产生紫外吸收峰的位移,而且变温荧光测试结果也显示,猝灭系数随着温度的升高而升高,1HNMR中也没有发生明显的位移。因此表明Ⅰ-的猝灭机理为动态猝灭。
目的本研究旨在探究12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯(12-Deoxyphorbol

13-palmitate, DP)对乳腺癌MCF-7细胞血管内皮生长因子(vascular selleck抑制剂 endothelial growth’factor, VEGF)和缺氧诱导因子1 alpha (hypoxia induced factor 1α, HIF-la)表达的影响,并且探索phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt/mammalian target of rapamycin (mTOR)通路在DP对VEGF和HIF-1α表达中的作用。方法1.采用MTT法检测DP对MCF-7细胞存活率的影响。2.酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)检测DP及PI3K抑制剂Wortmannin对MCF-7细胞VEGF蛋白分泌的影响。3. Real time PCR法检测DP对VEGF、HIF-1α mRNA表达的影响。4.细胞免疫荧光法(IF)检测DP对HIF-1α蛋白及表达位置的影响。5. Western blot法检测DP对HIF-1α蛋白表达、PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平的影响,以及DP和P13K抑制剂Wortmannin对TSC1和TSC2蛋白表达的影响。结果1.将细胞分为空白对照组(正常培养)、缺氧对照组(150 μM CoCl2)、 10 μM DP组(150 μM CoCl2+10 μM DP)、20μM DP组(150μM CoCl2+ 20 μM DP)和40μM DP组(150 μM CoCl2+40 μM DP)。MTT结果表明,150 μM CoCl2造模条件对细胞存活率无显著影响,而DP对MCF-7细胞存活率的抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05),且与缺氧对照组相比,剂量为10、20、40μM的DP对VEGF的下调作用具有显著性差异(P<0.05),而DP处理之后,HIF-1α表达随药物浓度的增加而降低(P0.05)。4.Western blot检测DP对PI3 K/Akt/mTOR信号通路的影响。发现在缺氧条件下,随着药物浓度的增加,p-PI3K、p-Akt、p-mTOR表达的降低呈剂量依赖性(P<0.05),而TSC1和TSC2的表达随之增高(P<0.

0个月和9.4个月。2013年TCGA对人类12肿瘤类型的3299例标本进行全基因组测序结果进行汇总分析,最后通过基因改变进行整理分类,绝大部分癌症可归类为突变组(M组)或扩增组(C组),肺腺癌属于M组,分子事件变化以突变为主,肺鳞癌则是C组,分子事件变化以扩增为主。肺腺癌的单个基因点突变即可驱动肺癌的发生和发展,而肺鳞癌高通量测序结果揭示了肺鳞癌与肺腺癌完全不同的分子特征,肺鳞癌分子变化更加多样和复杂,为肺鳞癌患者靶向药物的开发增加了难度。这些研究结果同样也部分解释了肺腺癌患者接受EGFR-TKI治疗效果优于肺鳞癌的原因。众多的临床靶向治疗疗效观察发现,肺鳞癌的治疗疗效较腺癌差,且肺鳞癌目前仅有约7%的患者有EGFR突变和／或ALK融合,有机会接受靶向治疗。所以对大部分肺鳞癌患者而言,标准化疗仍然是治疗的主要手段,但与肺腺癌相比较,肺鳞癌对化疗的敏感性也较肺腺癌差。肺鳞癌的靶向治疗研究方面目前仍然落后于腺癌的研究。目前肺鳞癌中的研究较多的驱动基因主要有：FGFR1基因扩增,DDR2基因突变、PI3CA基因扩增和突变、PTEN基因缺失,相关靶向药物的研究仍在进行,目前暂且没有有效的靶向药物用于临床。所以说,寻找有益于肺鳞癌靶向治疗的驱动基因有着非常重要的现实意义。大细胞肺癌因其发病率低,专门针对大细胞肺癌的基因组学及相应的分子靶向研究更为稀少,现代医学对大细胞的认识非常粗浅,大细胞的个体化治疗亟待研究。本研究所通过基因和组织芯片等技术发现BCL11A(B

许多 Cell Lymphoma/Leukemia 11A)基因在非小细胞肺癌的癌组织中明显高于癌旁组织,在肺鳞癌和大细胞肺癌中的表达较肺腺癌高,且BCL11A的表达水平受到miR30a的调控。不仅如此,临床资料分析发现BCL11A基因是早期非小细胞肺癌患者术后无疾病生存期(DFS)独立预后因子。BCL11A基因又称CTIP1基因,与鼠的Evi9基因同源,属于B细胞淋巴瘤／白血病BCL11基因家族,在人类主要定位于2号染色体短臂2p16位点,能够编码C2H2锌指结构蛋白,为kruppel样转录因子,发挥转录抑制作用,与造血系统的淋巴瘤、白血病以及地中海贫血疾病之间的关系较密切,而与其他肿瘤之间的关系仍在进一步的研究中。由于转录过程中拼接的不同,产生三个亚型,根据结构大小命名为eXtra-Long 因为 (XL; 5.9 kb/125 kD), Long (L; 3.8 kb/100 kD) and Short (S, 2.4kb/35kD),不同的BCL11A亚型存在不同的功能及亚细胞定位。目前,众多的基础研究发现,BCL11A在B淋巴细胞及B细胞来源的淋巴瘤/白血病细胞的生长、增值和分化过程中发挥重要作用,被认为是原癌基因。值得关注的是,2015年1月在Nature杂志上由Khaled等研究者发表的文章,首次在三阴性乳腺癌(TNBC)中证明BCL111A基因的致瘤作用,同时也成为TNBC治疗的一个潜在靶点基因。与肺鳞癌相比,肺腺癌在非小细胞肺癌中发病率较高,而驱动基因的研究也相对比较透彻,其中发挥重要作用的三个驱动基因的阳性率分别为：EGFR基因突变率达49.8%,ALK基因融合阳性率为7.7%,ROSl基因融合为1.2%-1.7%。与EGFR和ALK基因相比,ROS1基因融合是肺腺癌的一个少见基因。ROS1基因作为酪氨酸激酶受体家族的一员,基因发生重排以后,使得酪氨酸激酶区持续处于活化状态,从而促进肿瘤细胞的生长和肿瘤形成。研究发现ROS1基因和ALK基因在激酶区的氨基酸有49%的同源性,细胞实验发现ROS1阳性的肺癌细胞株(HCC78)对ALK抑制剂克唑替尼治疗有效,且ROS1阳性的非小细胞肺癌患者同样对克唑替尼有效,临床试验数据显示患者的客观反应率(ORR)为56.0%,疾病控制率(DCR)为85.0%。同时多个有关ROSl基因的临床试验均表明,ROS1基因作为肺腺癌的一个少见基因,可指导临床用药及预测疗效。目的本研究主要对非小细胞肺癌患者中的两个少见基因与预测和预后作用进行研究。首先,在前期研究的基础上,以BCL11A基因三个蛋白亚型的结构以及功能不同为基础,对人类非小细胞肺癌组织中BCL11A基因进行蛋白分型分析。其次,针对亚型差异表达情况与临床数据结合进行预后生存分析。最后,收集部分接受克唑替尼治疗的ROSl阳性的非小细胞肺癌患者,对其临床疗效进行总结,指出ROSI基因对非小肺癌患者的预后和预测作用。第一部分非小细胞肺癌中BCL11A基因的三个蛋白亚型分析方法1.实验标本的选取选取前期免疫组织化学验证BCL11A蛋白表达阳性的非小细胞肺癌组织标本共40例,肺鳞癌共选取27例(27/40,67.5%),大细胞肺癌选取8例(8/40,20.0%),腺癌选取5例(5/40,12.5%)。选择的主要依据是BCL11A基因在蛋白和RNA水平在肺鳞癌及大细胞肺癌中的表达水平均较腺癌高,所以主要研究对象是肺鳞癌及大细胞肺癌。2.实验抗体的选择选择依据是根据三个亚型的大小以及亚细胞定位不同进行选择。(1)BCL11

什么 A/123抗体(Active Motif公司),主要识别BCL11A蛋白亚型的637-835aa片段,而L和S两个亚型不具备该氨基酸片段,该抗体具有识别XL亚型的特异性,大量的文献实验结果也支持XL亚型验证。(2)Ab19487抗体(Abeam公司),主要识别172-434aa片段,为BCL11A-XL和L两个亚型共有的氨基酸片段,根据BCL11A-XL亚型结果,运用排除法可以确定二者的有无。另外一个原因是抗体Ab1987也是前期实验使用的抗体,为保证前后实验结果的一致性,所以选择该抗体。(3)Abl 8688抗体(Abeam公司),识别1-171aa片段,为三个亚型所共有,但是根据文献报道,BCL11A-XL和L亚型均分布于细胞核中,而S亚型主要存在于细胞质中,故根据蛋白定位可以识别S亚型的存在。(4)二抗选择带有辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠二抗和GFP标记的荧光二抗(GeneTex公司)。3.免疫组织化学实验3.1切片制备石蜡组织进行切片,厚约4-6微米,每例标本切取7张玻片,其中1张用作病理评估,3张做为实验阴性对照。3.

目前丹参酮类物质的生物合成技术也取得了瞩目的成就.此外丹参药理活性的研究主要集中于抗肿瘤、天然抗氧化、抗菌消炎、治疗心脑血管疾病等方面,且取得了很好的临床效果.这些研究为丹参的全面开发利用提供了参考.
Objective:To study the mechanism underlying the inhibitory effect of Qingluo Tongbi Granule(清络通痹颗粒,QTG) on osteoclast differentiation in rheumatoid arthritis in rats.Methods:Fibroblast and monocyte co-culture were used to induce osteoclast differentiation in adjuvant-induced arthritic(AIA) rats.Serum containing QTG was prepared and added to the osteoclasts,and activation of the tumor necrosis factor receptorassociated factor 6/mitogen-activated protein kinase/nuclear factor of activated Venetoclax T cells,cytoplasmic1(TRAF6/MAPK/NFATd) pathways was examined.Results:The induced osteoclasts

were multinucleated and stained positive for tartrate-resistant acid phosphatase(TRAP) staining.Serum containing QTG at 14.4,7.2 or 3.6 g/kg inhibited the Cisplatin核磁共振 activation of TRAF6,extracellular regulated protein kinase(ERK)1/2,c-Jun N-terminal kinase(JNK)and p38 and decreased the percentage of cells with nuclear NFATd in a dose-dependent manner,the high and middle doses exhibited clear inhibitory activity(P0.05).Conclusions:Serum containing QTG could generally inhibit the TRAF6/MAPK pathways and possibly inhibit the NFATd pathway.In addition,QTG may regulate other signaling pathways that are related to osteoclast differentiation and maturation.
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在对细胞外刺激因素进行应答时发挥着重要作用,介导多种细胞行为的变化。其中,p38信号通路是MAPK家族中关键通路之一,其介导细胞生长、发育、分化及死亡的全过程。丙泊酚除具有麻醉作用外,还可作用于一些MAPK,包括细胞外信号调节激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38MAPK,从而发挥抗肿瘤、抗炎、抗氧化和抗凋亡等积极作用。该文通过总结p38MAPK信号通路在丙泊酚对器官保护中所发挥的作用,为丙泊酚的临床器官保护作用机制提供一种新的研究思路。
心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是指心肌细胞缺血后重新恢复血液供应可产生更严重的损伤。MIRI与心肌细胞凋亡密切相关,心肌细胞凋亡可能是MIRI发病机制中的重要环节之一,已成为当今研究的焦点。近年来,关于细胞凋亡的信号转导通路越来越受学者们关注,有多条细胞凋亡相关的细胞信号转导通路参与MIRI的病理生理过程。本文从MIRI时细胞凋亡相关的细胞信号转导通路进行综述,旨在为MIRI的防治提供理论基础。
目的:探讨巴马系小型猪冠状动脉(冠脉)微栓塞(CME)致心功能损伤与程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的动态变化及关系。方法:60头巴马系小型猪经微导管左前降支注入微栓塞球构建冠脉微栓塞组;注射生理盐水构建假手术组,每组小型猪均为30只。每组小型猪随机分为0

PF-02341066化学结构 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h六个不同时间点观察(每个时间点小型猪均为5头)。应用心脏超声心动图检测心功能指标;组织病理切片苏木素-伊红(HE)染色和苏木素碱性复红苦味酸(HBFP)染色进行梗死区域测量;荧光定量多聚酶链反应(PCR)检测心肌组织PDCD4与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mR NA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织PDCD4与TNF-α蛋白表达。结果:超声心动图参数显示,冠脉微栓塞组除0

h、24 h外其余时间点左心室射血分数(LVEF)均较假手术组明显降低(P0.05)。荧光定量PCR结果显示,冠脉微栓塞组心肌组织PDCD4与TNF-αmR NA表达都是在3 h开始升高,9 h达高峰,12 h和24 h下降(P<0.05),差异均有统计学意义。结论:PDCD4参与了冠脉微栓塞致心功能的损伤,并呈现出明显的时间变化规律,可能是通过调控心肌TNF-α的表达实现。
牙龈卟啉单胞菌(Pg)是慢性牙周炎的重要病原菌,其毒力部分来自细菌细胞壁及产物,如脂多糖、菌毛、荚膜多糖和牙龈蛋白酶。这些化学成分在诱导宿主先天和后天的免疫反应中起重要的作用,如诱导巨噬细胞的极化和炎性细胞因子的释放。极化的巨噬细胞对炎症的进展、组织的破坏和炎症的抑制、损伤组织的修复与重建等具有重要作用。该文就巨噬细胞的极化特点以及Pg对巨噬细胞极化的影响进行综述,为牙周病的防治寻找新的途径。
目的研究p38β丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)对矿化诱导液诱导的人牙髓细胞(h DPC)成牙本质向分化的影响。方法体外培养hDPC,Western blot检测hDPC矿化诱导0、3、7、14 d后p38β蛋白表达情况;构建3条慢病毒载体p38β鄄shRNA并分别转染hDPC,Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测p38β蛋白及基因表达;设立空白对照组、矿化诱导(OM)组、OM+空载体(NC)组、OM+sh鄄p38β组共4组。成牙本质向矿化诱导1、7、14 d,实时荧光定量PCR检测成牙本质向分化指标牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)的基因表达;Western blot检测成牙本质向分化指标DSPP蛋白的表达;成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节的形成情况。结果 Western blot结果表明正常牙髓组织中存在p38β蛋白;成功构建p38β稳定低表达的hDPCs(实时荧光定量PCR显示三条序列干扰效率分别为55.4%、68.3%、54.

3%(19/35)和17.1%(6/35),血清和肿瘤组织EGFR基因突变的一致率为60%(21/35),Ⅲ和Ⅳ期患者血清EGFR基因突变率(35.7%,5/14)显著高于Ⅰ和Ⅱ期患者(4.5%,1/21)。结论

血清游离DNA为监测Ⅲ和Ⅳ期肺癌患者原发肿瘤中EGFR基因突变提供了新的来源。Scorpions ARMS是检测血清游离DNA和原发肿瘤组织中EGFR基因突变的可靠有效方法。磁珠法是是提取血清DNA的有效方法。
肝细胞生长因子受体(hepatocyte growth factor receptor, HGFR),又称c-Met (mesenchymal-epithelial mTOR inhibitor transition, MET),是在80年代发现的原癌基因产物,现已确定为受体酪氨酸激酶家族中的成员。HGF最初是作为大鼠肝细胞丝裂原(mitogen)而被发现,其作用与扩散因子(scatter factor)相似。现已证明,HGF主要由基质细胞产生,通过其受体c-Met,能刺激上皮细胞等细胞的增殖,运动,形态发生(morphogenesis)和血管生成。 在正常生理情况下,HGF与受体c-Met结合导致受体激酶区的酪氨酸发生磷酸化,进而导致受体及其下游信号通路的激活,在维持机体器官的发育和组织内环境稳定中发挥重要的作用。然而,HGF异常分泌,c-Met突变,扩增(amplification)以及高表达导致的c-Met通路的异常激活,可引起c-Met受体的持续激活与磷酸化,从而持续不断地激活下游信号通路,导致细胞的异常增殖,诱导正常细胞向癌细胞转化。 有许多方法用来抑制异常的HGF/c-Met信号通路,包括：HGF环状异构体拮抗剂(HGF variant antagonist),HGF抗体拮抗剂(HGF antibody antagonist), c-Met抗体拮抗剂(c-Met antibody antagonist)以及小分子c-Met抑制剂。目前发现的小分子c-Met抑制剂绝大多数都是作用在受体酪氨酸激酶的抑制剂。绝大多数化合物都通过与c-Met受体激酶区ATP口袋(ATP binding site)结合,抑制酪氨酸残基的磷酸化,抑制c-Met通路持续异常激活导致的肿瘤细胞异常增殖和生长。 间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)是胰岛素受体酪氨酸激酶家族成员之一。ALK在肿瘤中的异常改变主要是基因移位,异常的移位导致许多ALK融合蛋白(ALK fusion protein)产生,并持续激活ALK,导致肿瘤细胞的异常增殖和生长。同时抑制c-Met和ALK已经证明在胶质母细胞瘤等肿瘤细胞中有协同效应。因此,研究同时作用于c-Met和ALK的双重激酶抑制剂(c-Met/ALK

dual inhibitor)是非常有前景的抗肿瘤药物。美国FDA于2011年批准了c-Met/ALK双重抑制剂克唑替尼(Crizotinib)用于治疗有EML4-ALK融合蛋白形成的非小细胞肺癌患者。 虽然c-Met和ALK的双重激酶抑制剂是非常有前景的抗肿瘤策略,但在文献中报道的此类抑制剂很少,除Crizotinib外,还有一个是Xcovery公司研发的X-396,目前在进行一期临床试验。我们实验室多年来一直开展c-Met抑制剂的研究,本论文是在实验室前期的工作基础上,综合文献报道的结果以及临床上应用c-Met/ALK双重抑制剂克唑替尼(Crizotinib)成功的策略,设计和合成新的作用于c-Met和ALK的化合物,旨在发现新的高活性和高选择性的c-Met/ALK双重抑制剂。

Ibrutinib浓度 主要的实验方法和实验结果 一.SMU系列螺环化合物的设计与合成以及分子对接模拟 在我们实验室之前有关c-Met抑制剂的研发中,发现了一类螺环化合物是有效的高选择性c-Met抑制剂,这些化合物分子中的螺环片段能很好地适应c-Met的ATP结合口袋,而c-Met/ALK双重抑制剂克唑替尼分子中含有典型的激酶铰链区结合基团,即2-氨基吡啶。据此,我们的设计思路是：将螺环片断与激酶铰链区结合基团2-氨基吡啶片断结合成一个新的化合物,可能同时具有c-Met/ALK的双重阻断作用?因此,我们设计了3-位由带手性取代基的苄氧基取代的2-氨基吡啶化合物SMU-A及SMU-B;考虑到2-氨基吡嗪基与2-氨基吡啶基的相似性,又设计了毗嗪化合物SMU-C及SMU-D。上述四个化合物分子中都具有一个手性基团,化学合成难度高。为了减小化学合成的难度,我们除去3-位取代苄氧基中的手性甲基再设计了非手性化合物SMU-E及SMU-F。 然后,我们对设计的化合物与c-Met激酶晶体结构进行了分子对接模拟,发现这些化合物都能与激酶晶体结构进行对接。6个化合物根据Surflex-Dock程序的打分值依次如下：8.68,8.67,9.11,8.95,6.70和6.91,克唑替尼为8.67。以化合物SMU-B为例,c-Met激酶的ATP口袋能够很好地接纳SMU-B,并与其形成多个包括氢键、π-π堆积作用、范德华力等相互作用。在c-Met激酶晶体结构中,SMU-B能与克唑替尼很好地叠合,除了靠近溶剂区的部分,SMU-B与克唑替尼几乎达到完美的重叠一致。此外,SMU-B也能与ALK激酶晶体结构的ATP口袋很好地对接。由此预测,SMU-B应该具有对c-Met和ALK激酶的双重抑制作用。于是,我们合成了六个SMU系列的螺环化合物拟进行下一步的研究。 PF-06463922购买 二.SMU系列螺环化合物对c-Met和ALK激酶高选择性活性的确认 为了验证上述计算机分子模拟的结果,我们首先检测了化合物对细胞中c-Met激酶活性的影响。结果发现,六个化合物对MKN45胃癌细胞中c-Met激酶有显著抑制活性,IC50值依次为0.020,0.019,0.023,0.012,>10和9.0μM,克唑替尼为0.020gM,与计算机分子对接模拟的预测一致。进一步对上述化合物的生物利用度研究结果表明,SMU-B的口服生物度达到48%,因此确定该化合物进入下一步研究。 首先采用美国KINOMEscanTM公司的激酶高通量筛选技术,评价了SMU-B对人96种蛋白激酶生化活性的影响,发现SMU-B在100nM浓度下仅对c-Met,ALK和AXL三种受体酪氨酸激酶活性有显著的抑制活性,抑制率分别为94.4%,91.2%和95.

05)。与MOD组比较,INH组收缩压下降(P<0.05)。MOD组炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α表达量显著高于CON组(P0.05)；与CON组比较,MOD组P38 MAPK/NF-κB通路蛋白p-P38 MAPK、p-IκB显著增加。INH组p-P38 MAPK、p-IκB与CON组比较差异均不显著(P>0.05)。结论：体内环境下,CIH可能通过P38 MAPK/NF-κB信号通路引发血管内皮的炎症损伤,造成模型小鼠血压升高。P38

BGB324研究购买 MAPK抑制剂SB203580可通过抑制P38 MAPK/ NF-κB信号通路抑制CIH后的炎症状态并抑制小鼠血压升高。实验研究二补肾清肝方对间歇性低氧模型血管内皮P38 MAPK/NF-κB信号通路的干预效应研究第一部分补肾清肝方有效组分对人脐静脉内皮细胞间歇性低氧模型P38 MAPK/NF-κB信号通路的干预效应研究目的：体外环境评价中药复方补肾清肝方对IH后血管内皮炎症损伤的保护效应并探讨其作用机制。方法：在HUVECs的IH模型基础上,按1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml加入补肾清肝方有效组分(异钩藤碱、桃叶珊瑚苷、川芎嗪,GDC),进行最佳浓度筛选。最佳用药浓度确定后,实验分为4组：正常对照组(CON组)、间歇性低氧组(IH组)、IH+补肾清肝方有效组分组(GDC组)以及IH+P38 MAPK抑制剂组(INH组)。中药预处理30min后开始造模,造模方法同前。进行细胞粘附功能检测、QPCR检测ICAM-1、E-selectin、IL-1、IL-6、TNF-α含量,细胞免疫荧光及Western-blot法检测P38 MAPK/NF-κB通路蛋白的表达。结果：QPCR结果提示GDC 0.01μg/ml干预后炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α表达量均低于IH组(P0.05)。细胞粘附实验结果显示,GDC组HUVECs的粘附细胞数明显低于IH组(P<0.05),AB组降压效果优于BSQG-H组(P<0.05)。QPCR结果显示BSQG-H组IL-1、IL-6、TNF-α表达量低于MOD组(P0.05)。同时BSQG-H组抑制IL-1、IL-6优于阳性药对照(AB组)(P
肾小球硬化是肾小球肾炎和其他肾脏疾病发展过程中的一种常见病理改变,其主要病理特征是肾小球内细胞外基质(Exrtaclleluar

Bcl-2 lymphoma Mtarix,EcM)过度沉积。而肾脏系膜细胞(mesnaigal clle,MC)是目前公认的分泌肾小球ECM的主要细胞,在维持肾小球结构和功能完整性方面都发挥重要作用。Ⅳ型胶原(tyepⅣcollagen,collagneⅣ)是肾小球ECM的重要成分之一,特别是发生肾小球肾炎和肾小球硬化时,在MC能够影响到的系膜区和基底膜部位,Ⅳ型胶原的含量明显增多。因此,研究肾小球MC中W型胶原的表达及其影响机制,对于认识和调控肾小球硬化具有重要意义。MC可自分泌多种细胞因子,转化生长因子β1(Transfomring growth factorβ1,TGF-β1)就是其中的一种,TGF-β1是TGF-β超家族的成员,上调ECM基因表达、促进ECM沉积是其重要功能之一。因此,TGF-β1在肾小球硬化过程中发挥重要作用。TGF-β1主要靠其下游的信号传导通路来发挥作用,Smads家族是TGF-β1下游经典的信号传导分子。除此之外,还存在其他一些非Smad通路,如MAPK通路、AKT/IP3K通路等。MAPK信号通路是目前己证实的TGF-β1下游重要的非Smda信号通路之一,而且大量报道显示,TGF-β1/Smda和MAPK通路之间存在串话,其中以E双1/2与Smad之间的关系研究最多,JNK、p38与Smad通路之间的关系研究相对较少。饰胶蛋白聚糖(Decroin,DCN)是一种富含亮氨酸的小分子量蛋白聚糖,也是MC分泌的重要成分之一,主要分布在结缔组织中,属于ECM成分的一种。在调节细胞增殖分化、ECM合成沉积、细胞因子功能等方面发挥重要作用。DCN可以通过多种机制拮抗TGF-β1的生物学功能,因此,DCN是TGF-β1重要的抑制因子。我们实验室前期工作已证实,DCN可以抑制大鼠肾脏MC生长和基质合成,动物实验中,DCN可拮抗大鼠抗Thy-1.1肾炎模型病变肾小球的程度和发展。但其在肾小球病变中的作用机制目前还没有完全阐明。在肾小球硬化中,TGF-β1主要作用于肾脏MC。研究表明,肾小球病变时TGF-β1田在激活Smad信号通路过程中,也有MAPK通路信号分子被激活。但MC中MAPK-Smad信号分子之间的串话作用研究还是较少的。Hayshiad等曾证明人的MC中,ERK1/2依赖的Smda3连接区磷酸化能够促进Ⅰ型胶原的表达,但ERK1/2和Smda通路之间相互影响的复杂机制还是没有完全了解。因此,本实验中我们在体外培养的大鼠MC中继续深入研究MAPK和Smda通路之间的串话作用,特别是除ERK1/2分子外,JNK及P38与Smad2之间的串话,以及这些串话在MCTGF-β1即诱导的Ⅳ型胶原表达过程中的作用。同时,初步探讨DCN对Ⅳ型胶原表达的影响,及其对TGF-β1活化的MAPK和Smda通路的作用,为后续研究的展开做好铺垫。

获悉更多 第一部分TGF-β1诱导的大鼠系膜细胞Ⅳ型胶原表达过程中MAPK对Smad2通路的影响 目的探讨外源性TGF-β1对体外培养大鼠MC表达Ⅳ型胶原以及对MAPKs和Smad2信号通路的影响,同时观察该过程中MAPK对Smad2信号通路的影响。 方法培养大鼠MC,在培养液中添加外源性TGF-β1,采用Western Blot方法观察MC内Ⅳ型胶原和MAPKs表达的变化；或者通过预先在培养液中分别添加MAPK信号通路抑制剂U0126、SB203580、SP600125,再用外源性TGF-β1因子刺激,采用Western Blot方法观察MC内Ⅳ型胶原以及MAPKs和Smad2表达的变化,同时采用Real time RT-PCR检测不同处理后,Ⅳ型胶原mRNA水平的改变。 结果用不同浓度的TGF-β1刺激MC 6h,可见Ⅳ型胶原从1 ng/ml开始有上升趋势,其中以2.5ng/ml升高最明显(P<0.05),表明外源性TGF-β1诱导的MC内Ⅳ型胶原表达升高呈剂量和时间依赖性。与此同时,TGF-β1激活了MAPKs和Smad信号通路,TGF-β1作用15min后可见磷酸化的ERK、JNK、p38和Smad2均表达升高,其中磷酸化的ERK、p38和Smad2在TGF-β1作用后1h达高峰,磷酸化的JNK在2h达高峰(P<0.05),但使用JNK通路抑制剂后,仅P-Smad2C下调(P0.

ADAM22在前列腺癌细胞和组织中阳性表达;2. TNF-α能够有效增强ADAM22表达;3. ADAM22通过水解Fas而介导肿瘤对凋亡的耐受。
背景和目的:心脏直视手术需要在体外循环(cardio-pulmonary bypass,CPB)状态下暂时阻断心脏冠状动脉血液循环。CPB可以导致心肌缺血再灌注损伤(myocardial 很少 ischemia/reperfusion injury,MI/RI),再灌注损伤表现为心律不齐、可逆性收缩功能障碍——心肌顿抑、内皮功能障碍以及心肌超微结构的改变等,这些关系到心脏手术成败及患者预后。 目前,MI/RI是阻碍缺血心肌从再灌注疗法中获得最佳疗效的主要难题,预防或减轻再灌注损伤已成为抗MI/RI的重要课题。针对I/R损伤的发生,很多研究结果表明药物对MI/RI具有防治作用,可减少心律失常、出血性坏死以及梗塞面积扩大等,但是由于药物本身的一些毒副作用及机体状态的影响,使其很难发挥真正的效能,因此仍然多限于基础研究阶段。

为了进一步了解麻醉药、改善细胞能量代谢、NO合成的特异前体以及传统中药干预以后对心肌缺血再灌注药物的影响,本试验选择132例在CPB下行心内直视手术的心脏病患者,分为四大组,分别用异丙酚、氯胺酮、1.6-二磷酸果糖、左旋精氨酸及活血化瘀药物川芎嗪等不同药物干预,观察心肌组织热休克蛋白72、诱导型一氧化氮合酶和中性粒细胞NF-κB、Bcl-2的表达以及血清心肌肌钙蛋白T的变化。进一步认识不同药物干预对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机理。 方法:132例CPB下行心内直视手术的心脏病患者,根据试验时间分四大组。 组一(G1)28例,随机分为对照组(C组)川芎嗪干预组(M组),每组14例。M组麻醉诱导后经静内静脉滴入川芎嗪3 mg·kg~(-1),30 min内滴完,转流后追加1 ABT-263购买 mg·kg~(-1)于氧合器中,C组于上述时间给予等量生理盐水。在主动脉阻断(ACC)前后切取右心房心肌标本,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定心肌细胞中HSP72mRNA的相对表达量;分别于转流前、主动脉开放后30min和术后24

h测定外周血天冬酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)和肌酸磷酸激酶同工酶(CK-MB)的变化;分别于转流前和主动脉开放后30min取右心耳心肌组织,透射电镜观察心肌超微结构变化,并采用Flameng线粒体半定量分析法对心肌线粒体进行计分。 组二(G2)24例,随机分为对照组(C组)和氯胺酮干预组(K1组、K2组),每组8例。在劈胸骨时、主动脉插管时和主动脉开放前5min,干预组分别静脉注射氯胺酮0.5 mg·kg~(-1)或1.0 mg·kg~(-1),对照组注射等量生理盐水。于上腔静脉插管时(T1)、主动脉阻断后30min(T2)和主动脉开放后30min(T3)取适量右心耳心肌组织,一步法实时荧光定量RT-PCR技术(采用SYBR Green 1嵌合荧光法)检测心肌中iNOSmRNA和HSP72mRNA的表达量。并分别于T1、T2、T3和主动脉开放后2h(T4)取上腔静脉血4ml,检测血清中肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量。 组三(G3)40例,随机分为对照组(C组)、左旋精氨酸组(L组)、1,6-二磷酸果糖组(F组)和联合用药组(D组),每组各10例。根据L-Arg和FDP作用机制的不同,L组于主动脉开放后即刻给予L-Arg200 mg·kg~(-1),F组于主动脉阻断前给予FDP200 mg·kg~(-1),D组联合应用两种药物。分别于主动脉插管时、主动脉开放30min、2h、6h检测血浆心肌肌钙蛋白T(cTnT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)活力。 组四(G4)40例,随机分为对照组(C组)和异丙酚组(P组),每组20例。在麻醉诱导后,P组用TCI输注泵以2.5μg·ml~(-1)为初始血浆靶浓度持续输注异丙酚,根据麻醉深度调整异丙酚血浆靶浓度,最大可达3.4μg·ml~(-1)。分别于麻醉诱导后CPB前(T1)、主动脉阻断后30min(T2)、主动脉开放时(T3)、CPB停机后30min(T4)、停机后90min(T5)采集上腔静脉血检测血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)、血浆丙二醛(MDA)的浓度及超氧化物歧化酶(SOD)的活性,于T1、T4时间点采集上腔静脉血检测中性粒细胞NF-κB和Bcl-2的表达及中性粒细胞计数。

结果:G1组:与ACC术前比较,ACC术后两组心肌组织HSP72 mRNA表达量、心肌酶含量及线粒体记分均显著增高(P＜0.05或P＜0.01);与C组比较,ACC后M组心肌组织HSP72 mRNA表达量和线粒体记分显著增高,心肌酶AST、LDH、CK、CK-MB的升高幅度明显降低(P＜0.05)。心肌超微结构变化,CPB后对照组线粒体基质颗粒丢失,嵴断裂,肌浆网扩张,肌原纤维明显松弛,部分溶解、断裂。川芎组肌原纤维排列整齐,可见少数线粒体嵴肿胀模糊,嵴断裂,间隙增宽。局部内质网扩张。 G2组:与T1比较,三组T2和T3心肌iNOSmRNA和HSP72mRNA表达量均显著升高(P＜0.05、P＜0.01),CK、CK-MB含量在T2、T3、T4均显著增高(P＜0.01);与T2比较,三组T3心肌iNOSmRNA和HSP72mRNA表达量均显著升高(P＜0.05、P＜0.01),CK、CK-MB含量在T3、T4均显著增高(P＜0.01);与T3比较,CK、CK-MB含量在T4均显著增高(P＜0.01);与C组比较,K1组在T2而K2组在T2、T3心肌iNOSmRNA表达量及CK、CK-MB升高幅度在T2、T3、T4均显著降低(P＜0.05、P＜0.01),K1、K2组HSP72mRNA表达量在T2、T3均显著增高(P＜0.01);与K1组比较,K2组心肌iNOSmRNA表达量在T2、T3及CK、CK-MB升高幅度在T2、T3、T4均显著降低(P＜0.05、P＜0.01),HSP72mRNA表达量差异无显著性(P＞0.05)。 有 G3组:与T1比较,四组血浆cTnT、LDH、CK-MB、MDA和SOD在T2、T3、T4均显著增高(P＜0.05、P＜0.01);与C组比较,血浆cTnT值L组和F组在T4而D组在T3、T4显著降低(P＜0.01或P＜0.05),LDH升高幅度L组在T3而D组在T2、T3、T4显著降低(P＜0.01或P＜0.05),CK-MB和MDA的升高幅度L、F、D组在T2、T3、T4均有显著降低(P＜0.

05）。 3Western blot技术检测白藜芦醇对VSMCs SIRT1、 NADPH氧化酶-p47蛋白表达量的影响，结果显示：高糖能使NADPH氧化酶-p47蛋白表达明显增加，SIRT1蛋白表达减少（P＜0.05）；用Apocynin预处理后，NADPH氧化酶受到抑制，NADPH氧化酶-p47蛋白表达减少，SIRT1蛋白表达增加（P＜0.05）；用Sirtionl预处理后，SIRT1受到抑制，SIRT1蛋白表达减少，NADPH氧化酶-p47蛋白表达增加；而高渗组无明显改变；Res（25、50、100μmol/L）能显著降低高糖环境下NADPH氧化酶蛋白的表达，增加SIRT1蛋白的表达，并呈浓度依赖性（P＜0.05）。

结论： 1高糖可促进体外培养的VSMCs的增殖，促使细胞由G0/G1期向S期转化。其机制可能是高糖激活SIRT1/NADPH氧化酶-p47蛋白信号通路，抑制SIRT1蛋白表达，促进p47蛋白表达，从而促进细胞增殖。高糖状态诱导的细胞异常增殖可能是糖尿病大血管病变的发病机制之一。 2白藜芦醇通过干预SIRT1/NADPH氧化酶-p47蛋白信号通路，使SIRT1蛋白表达上调，抑制NADPH氧化酶-p47蛋白表达，抑制VSMCs增殖，减少进入S期的细胞数目，使细胞阻滞在G0/G1期，且呈浓度依赖性。提示白藜芦醇可能通过SIRT1/NADPH氧化酶-p47蛋白信号通路干预高糖诱导的VSMCs的增殖，对2型糖尿病的大血管病变起到防治作用。
目的：应用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型，以了解其肾脏组织中PEDF、VEGF的表达水平。同时观察坎地沙坦干预对肾脏PEDF、VEGF表达的影响，探讨PEDF、VEGF在糖尿病肾病（DN）中的作用以及坎地沙坦对肾脏发挥保护作用的可能机制。 不 方法：雄性Wistar大鼠36只，体重160-200g，随机分3组，其中正常对照组（NC组）12只，糖尿病组（DM组）12只，坎地沙坦干预组（DM-C组）12只。大鼠禁食12h后，DM组、DM-C组给予一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）50mg/Kg以诱导1型糖尿病大鼠的模型；NC组大鼠仅给予腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液。72小时后用血糖仪测定大鼠尾尖部血糖，随机血糖大于16.7mmol/L视为糖尿病大鼠造模成功；给予DM-C组大鼠坎地沙坦5mg·kg-1·d-1灌胃，而NC组和DM组仅等容积生理盐水灌胃。干预12周末，用代谢笼收集大鼠24h尿液，记尿量，测定24小时尿白蛋白排泄量（urinary

JQ1供应商 albumin excretion，UAE）；全部大鼠记录体重后留取血标本，测大鼠空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）、血肌酐(Scr)、尿素氮（BUN）；切取右肾后，去掉被膜，并称重，光镜及透射电镜下观察肾脏的形态学变化，免疫组化法观察肾小球和肾小管PEDF和VEGF的蛋白表达水平；快速切取左肾，并分装，将其置于-70℃冰箱中保存，RT-PCR方法检测肾组织PEDF及VEGF的mRNA表达水平。 Alisertib小白鼠 结果：实验结束时NC组、DM组、DM-C组大鼠分别存活12只、10只、9只大鼠。 1空腹血糖（FBG）、体重（BW）：DM组和DM-C组大鼠的FBG、BW较NC组大鼠显著升高，差异有统计学意义（P均＜0.01），而DM组与DM-C组大鼠FBG、BW差异无统计学意义（P均＞0.05）。 2各组大鼠肾功能（Scr、BUN）、KW/BW、UAE的比较：与NC组相比，DM组和DM-C组大鼠Scr、BUN明显增加，差异均有统计学意义（P均＜0.01）。DM-C组大鼠的Scr、BUN与DM组相比，差异无统计学意义（P均＞0.05）。与NC组大鼠相比，DM组和DM-C组KW/BW明显增高，24小时UAE明显增多，差异均有统计学意义（P均＜0.01），DM-C组较DM组KW/BW明显减小，24小时UAE明显减少，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。

3免疫组化：①NC组肾小球及肾小管均可见大量的PEDF表达，主要集中于肾小球系膜区和基底膜区域。而DM组和DM-C组肾小球和肾小管PEDF的表达较NC组明显减少（P均<0.01）；而DM-C组大鼠肾脏PEDF的mRNA表达水平较DM组大鼠明显增加(P<0.01）。②DM组和DM-C大鼠肾脏VEGF的mRNA表达水平较NC组大鼠显著增加（P<0.01）；DM-C组大鼠肾脏VEGF的mRNA表达水平较DM组大鼠显著减少（P<0.05），但仍高于NC组（P
目的：探讨右美托咪啶对慢性神经病理性疼痛的疗效,研究右美托咪啶镇痛机制是否与大鼠脊髓嘌呤受体P2X4(P2X4R) mRNA和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK) mRNA表达有关,进一步探究慢性神经病理性疼痛的机制,为治疗该病提供新的方法和依据。 方法：取体重在180-220g的雄性SD大鼠72只,随机分为3组(每组24只),即：假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和右美托咪啶组(Dex组)。S组大鼠只暴露坐骨神经但不结扎,NP组和Dex组大鼠采用坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)法建立慢性神经病理性疼痛模型。Dex组于术后即刻开始每日腹腔注射Dex50μg/kg,直至实验结束；S组和NP组每日腹腔注射与Dex等容量生理盐水。分别于术前1d,术后1、3、7、14d测定大鼠的机械痛阈(MWT)和热痛阂(TWL)。术后1、3、7、14d随机取测定痛阈后的大鼠6只,麻醉后开腹,取L4～6脊髓组织,使用RT-PCR法测定P2X4R mRNA和p38MAPK mRNA表达。 结果：S组内各时间点相互比较,MWT及FWL无统计学差异,脊髓P2X4R mRNA和p38MAPK mRNA表达无统计学差异(P>0.

目前用于研究的干细胞主要有神经干细胞、胚胎干细胞、诱导多功能干细胞、间充质干细胞等.本文回顾了上述细胞在移植治疗帕金森病研究中的进展,并介绍了近期出现的将体细胞直接重编程为神经细胞或神经干细胞的新技术.
多能干细胞具有能够分化为多种特定细胞类型的能力,主要包括胚胎干细胞、胚胎生殖细胞和诱导多能干细胞。猪因其在免疫学、形态学和生理结构上与人有着诸多类似的特点,正逐渐成为人类异种移植、细胞治疗和再生医学研究的理想生物学模型。然而,目前对猪多能干细胞的来源、特征及机制认识的不足直接阻碍了该研究领域的发展。因此,将对猪多能性干细胞的种类、鉴定标准、研究进展、亟待解决的问题进行详细地阐述,并在此基础上对猪多能性干细胞的研究进行了展望,希望为该研究领域的科研人员提供参考。
转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是生物体内重要的细胞因子,具有多种生物学效应,包括胚胎发育、伤口愈合、趋化作用和细胞周期调控等。上皮-间质转化(EMT)是肿瘤细胞获得侵袭和转移能力的最主要途径,而TGF-β是已知诱导肿瘤细胞发生EMT的关键因子,对肿瘤的发生、转移等起着非常重要作用。近年来对TGF-β抑制剂的研究取得了一些进展,已经有部分药物上市和进入临床研究,在肿瘤的治疗、疤痕修复、青光眼治疗和肝肾的纤维化疾病治疗等方面有广泛应用。本文主要对近年来设计合成的新型TGF-β抑制剂进行综述。
目的探讨JNK与Smad途径介导小鼠肺纤维化中Ⅰ型胶原的表达及二者相互作用的研究。方法选择雄性野生健康C57BL/6小鼠96只,随机分为正常组(N组)、模型组(M组)、p-Smad3阻断组(SB组)、JNK阻断组(SP组),每组24只。M组、SB组及SP组气管内滴注博莱霉素3.5

有 mg/kg诱导肺纤维化模型,于造模后给予相应药物,N组给予等剂量生理盐水。每组分别于造模后第7、14、28天随机处死8只小鼠,取肺组织病理切片行HE染色和Masson染色,观察肺泡炎和纤维化程度;碱水解法检测肺组织羟脯氨酸(Hyp)含量;免疫组化法测定肺组织Ι型胶原、p-JNK及p-Smad蛋白含量,各组进行对比。结果

M组第7天肺泡炎症明显,第28天纤维化改变显著;随着时间推移,羟脯氨酸含量呈逐渐上升趋势,第28天含量最高。SB组、SP组与M组比较,肺泡炎症及纤维化程度均有所减轻;第14、28天Hyp含量稍降低,Ⅰ型胶原、p-JNK及p-Smad蛋白的表达有所减少(P<0.05)。结论肺纤维化与JNK及Smad通路关系密切,JNK与Smad信号通路在TGF-β1诱导的ECM过度聚集发挥重要作用;JNK的活化会增加Smad3蛋白的磷酸化,而Smad途径的激活也会加强JNK的活化,两条通路的相互关联将为进一步治疗肺纤维化提供新思路。
目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制转化生长因子β1(TGF-β1)诱导NIH/3T3细胞活化的作用。方法:NIH/3T3细胞分8组:正常对照组、HSYA对照组、TGF-β1组、TGF-β1+0.5μmol/L

可能 HSYA组、TGF-β1+1μmol/L HSYA组、TGF-β1+2μmol/L Metformin体内 HSYA组、TGF-1+2μmol/L SB-431542和TGF-β1+SB-431542+2μmol/L HSYA组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖;细胞划痕实验观察细胞的迁移。结果:MTT法观察结果表明:与各时间点正常对照组相比,TGF-β1作用24,48及72小时后的OD 570nm值明显升高(均P<0.01),并且同时高于TGF-β1+HSYA各组(均P<0.05)和TGF-β1+SB-43154两组。在TGF-β1作用0,2,8,12及24小时后,与正常对照组相比,细胞迁移距离明显增加(均P<0.001),并且同时高于TGF-β1+HSYA组(均P
目的探索全反式维甲酸(RA)和SB431542对胚胎干细胞(ES)及诱导多能干细胞(i PS)分化为间充质干细胞(MSC)样细胞的影响。方法将培养的鼠ES和i PS根据不同的分化条件分为对照组、SB431542组及RA不同浓度组,对照组为达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)完全培养基,SB431542组为DMEM完全培养基中含10μmol·L-1SB431542,RA不同浓度组的DMEM中分别含0.05、0.10、0.20、0.40 nmol·L-1RA。分化培养4 d后观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物CD105和干细胞抗原1(Sca-1)的表达,以CD105+细胞和Sca-1+细胞的比例确定i PS和ES向MSC分化的程度。结果小鼠ES和i PS在ESGRO-2i培养基里生长较好。ES分化4 d后,对照组和SB431542组ES和i PS分化成内皮样细胞,在含有不同浓度RA的培养基中ES和i PS可有效分化为纤维状细胞。ES分化4 d后,SB431542组Sca-1+细胞比例显著高于对照组(P0.05)。在RA 0.05、0.10、0.20、0.40 nmol·L-1RA组中,ES分化的CD105+细胞比例显著高于对照组和SB431542组(P<0.05),Sca-1+细胞比例显著高于对照组(P<0.

908±0.102mm,在垂直板SDS-PAGE电泳方向上的平均位置偏差为1.032±0.108mm;未处理SGC-7901细胞在IEF方向上的平均偏差为0.838±0.116 mm,在垂直板SDS-PAGE电泳方向上的平均位置偏差为1.075±0.168 mm。表明我们成功地建立了分辨率较高,重复性较好的TGFβ1预处理SGC-790l细胞和未处理SGC-7901细胞的二维凝胶电泳图谱。使用PDquest分析软件对TGFβ1预处理SGC-7901细胞和未处理SGC-7901细胞的各蛋白质点的表达丰度进行分析,我们发现30个差异点,随机选取2个差异点,经原位酶解和MALDI-TOF质谱分析测定它们的PMF,初步鉴定了其中的2个蛋白质点。部分候选的蛋白质差异表达水平经Western

blotting分析可以看出SGC-7901细胞经TGFβ1处理后GST-π,MDR1蛋白表达上调,这些结果与我们蛋白质组学的分析结果是一致的。 4、应用免疫组织化学方法检测TGFβ1、GST-π和MDR1在胃癌组织中的表达情况并分析其与临床病理参数间的关系。结果表明:TGFβ1、GST-π和MDR1的阳性信号主要在细胞浆。在76例胃癌组织中,TGFβ1、GST-π和MDR1的阳性率分别为75%、81.5%及61.8%,且三种蛋白的表达均与分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P＜0.05),但与年龄和性别等无关(P＞0.05)。 5、利用Smad4 siRNA、MAPK通路特异性阻断剂处NSGC-7901细胞,然后分别检测GST-π、MDR1的表达水平,以期明确TGFβ1上调GST-π、MDR1表达的信号途径。结果表明:TGFβ1作用SGC-7901细胞后GST-π的表达水平明显上调,但经Smad4 购买Fulvestrant siRNA及PD98059预处理后,其表达水平随之降低;而在SB203580及SP600125处理组GST-π的表达水平无明显变化,提示TGFβ1可能通过经典Smad通路及ERK途径诱导SGC-7901细胞GST-π的表达。而利用外源性TGFβ1处理胃癌细胞SGC-7901,探讨其对SGC-7901细胞MAPK通路的影响时亦发现,SGC-7901的p-ERK表达水平上调,这亦再次表明ERK通路在此分子事件中发挥了重要作用。同时本实验中,我们亦发现TGFβ1作用SGC-7901细胞后MDR1的表达明显上调,但在经SP600125及PD98059预处理后,其表达水平随之降低;而在SB203580及Smad4

点击此处 siRNA处理组MDR1的表达水平无明显变化,这就提示TGFβ1可能通过JNK通路及ERK途径诱导SGC-7901细胞MDR1的表达。而利用外源性TGFβ1处理胃癌细胞SGC-7901,探讨其对SGC-7901细胞MAPK通路的影响时亦发现,SGC-7901的p-ERK、p-JNK表达水平上调,这亦再次表明ERK、JNK通路在此分子事件中发挥了重要作用。 四、结论 1、成功发现TGFβ1可诱导胃癌细胞耐药的发生,其部分机制可能与上调GST-π和MDR1的表达相关; 2、首次发现TGFβ1可分别通过经典Smad通路、ERK途径及JNK、ERK通路上调SGC-7901细胞GST-π和MDR1的表达。
随着社会经济发展和人们生活方式的改变,人类疾病谱正在发生变化,慢性肾脏病(CKD)已呈现流行特征,并成为21世纪全球性的公共卫生问题。CKD一旦发展为终末期肾脏病(ESRD),则必须依赖肾脏替代治疗(RRT),即血液透析、腹膜透析、或肾移植来维持生命,给患者家庭及社会带来沉重的经济负担和社会压力。因此,早期诊断及防治慢性肾脏病有着特殊重要的意义。研究表明,肾素—血管紧张素—醛固酮系统(RAAS),尤其是血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在CKD的发生和进展中发挥重要作用。AngⅡ是RAAS系统最主要的效应分子,业已证实AngⅡ不仅通过改变肾小球血流动力学促进肾小球硬化,还可促进系膜细胞、内皮细胞和肾小管上皮细胞增生、生长因子表达及细胞外基质积聚。AngⅡ的作用是通过与Gq蛋白偶联的Ⅰ型血管紧张素受体(AT1受体)完成的,而AT1受体为跨膜糖蛋白,本身不具有酪氨酸激酶(此酶介导有丝分裂的细胞信号)活性,也不直接与酪氨酸激酶发生联系。本研究将深入探讨AngⅡ介导肾小球系膜细胞增殖及炎症介质的表达的信号转导机制,这不仅有助于加深人们对CKD发病机制的认识,同时也为未来CKD治疗策略的制定提供理论依据。 本研究包括两部分内容: 一、c-Jun氨基末端激酶介导血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞增殖及炎症介质表达 目的:AngⅡ可诱导体外培养的系膜细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化,但其活化后的生物学意义仍不清楚。本研究选用新型的JNK特异性阻断剂SP-600125,探讨JNK-c-Jun/AP-1信号通路在AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞增殖及炎症介质表达中的作用。

一般 方法:体外分离培养人肾小球系膜细胞,应用SP-600125预处理后加入AngⅡ刺激,应用Western Blot检测JNK、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)和p38的活性以及c-Jun磷酸化;应用荧光素酶(Luciferase)活性检测法检测c-Jun转录活性及单核细胞趋化蛋白(MCP-1)启动子活性;凝胶电泳迁移率(EMSA)检测活化蛋白-1(AP-1)DNA结合活性;核酸酶保护法检测MCP-1 mRNA表达;ELISA检测培养上清中MCP-1、转化生长因子(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的分泌;~3H-胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法和细胞计数法测定系膜细胞的增殖。 结果:1.AngⅡ可呈时间依赖性和剂量依赖性的方式诱导JNK活化及c-Jun磷酸化,100 nmol/L AngⅡ刺激15 min后,c-Jun磷酸化显著增加,JNK活性明显上调,30分钟达到高峰,是对照组的6.2倍,1 h后几乎恢复到正常水平。 2.JNK特异性抑制剂SP-600125呈剂量依赖性的方式抑制AngⅡ诱导的JNK活化和c-Jun磷酸化,当浓度为10μmol/L和20μmol/L时其抑制作用分别达75%和90%,SP-600125对ERK1/2和p38 MAPK磷酸化水平均无抑制作用。 3.AngⅡ刺激后c-Jun转录活性及AP-1 DNA结合活性显著增加,SP-600125可呈剂量依赖的抑制AngⅡ诱导的c-Jun转录活性及AP-1 DNA结合活性的增加,20μmol/L SP-600125预处理几乎完全阻断c-Jun的反式激活。4.

21±0.39、2.27±0.28、2.21±0.27、1.93±0.30、1.64±0.31、1.85±0.41;人参皂苷Rg1各组p-JNK蛋白含量显著降低,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05),其中10 mg/kg组p-JNK蛋白含量最高,40 mg/kg组p-JNK蛋白含量最低;10、40 mg/kg组与阳性药物对照组比较有显著性差异(P＜0.05),而20 mg/kg组与阳性药物对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。 (2)假手术组、模型组、人参皂苷Rg1 10、20、40 mg/kg组和阳性药物对照组海马CA1区p-c-jun蛋白表达含量分别为0.51±0.07、2.02±0.17、1.21±0.11、0.87±0.22、0.69±0.07、0.80±0.18;模型组大鼠p-c-jun含量最高,假手术组p-c-jun含量最低;人参皂苷Rg1

20、40 mg/kg组p-c-jun蛋白含量显著降低,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05),其中40 mg/kg组p-c-jun蛋白含量最低;人参皂苷Rg1 10 mg/kg组与阳性药物对照组比较有显著性差异(P＜0.05),而Rg1 20、40 mg/kg组与阳性药物对照组比较无统计学差异(P＞0.05)。 结论: 1.人参皂苷Rg1可以显著改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能缺损症状。 2.人参皂苷Rg1能显著降低脑缺血再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡率;进一步研究显示Rg1可能通过抑制脑缺血后海马CA1区的JNK及其效应分子c-jun的活化,进一步调节死亡受体、线粒体依赖的凋亡途径,抑制脑缺血再灌注后的神经元凋亡,降低缺血后迟发性神经元死亡,控制缺血半暗带向梗死区的发展,以发挥其对脑缺血再灌注损伤的保护作用。
肝细胞癌是目前严重威胁人类生命安全的疾病之一。寻求高效低毒的抗肿瘤药物及治疗方法一直是科学界研究的热点。氯喹是老药,具有广泛的生理学效应,以往主要用来治疗疟疾、自身免疫性疾病等,近年来发现氯喹具有治疗肿瘤的作用。本研究旨在研究氯喹的抗肝细胞癌作用并对其作用机制进行探讨。采用MTT法检测氯喹对人肝细胞癌HepG2细胞生长抑制作用;采用流式细胞术检测氯喹对人肝细胞癌HepG2细胞周期和凋亡的影响;采用免疫印迹法检测氯喹对HepG2细胞周期蛋白cyclinB1及NF-кB、p-IкBa、ERK、p-JNK和P38蛋白表达水平的影响。结果表明,氯喹可抑制HepG2细胞生长,诱导细胞发生G2/M期阻滞而影响细胞周期进程以及通过抑制HepG2细胞周期蛋白cyclinB1表达、抑制NF-кB、p-IкBa及ERK和诱导p-JNK蛋白表达水平促进细胞凋亡和抑制细胞增殖有关。本研究结果将为肝细胞癌的治疗提供新的药物,并且对老药氯喹用于治疗肝细胞癌的临床应用提供重要的实验依据。
【目的】建立三种干细胞即神经干细胞(NSC)、骨髓问充质细胞(BMSC)和造血干细胞(HSC),及两种支持细胞即嗅鞘细胞(OEC)和雪旺细胞(SC)的体外培养技术,并将两种支持细胞分别和三种干细胞分别联合移植入SD大鼠和猴损伤的脊髓,筛选出细胞联合移植治疗SCI的优化方案,并探讨与其相关的分子表达,找出相对重要的调节分子,研究该分子在SCI中的作用。为寻找细胞移植治疗SCI的有效方法和相关的分子机制提供实验依据,为指导临床应用干细胞移植治疗SCI提供新思路。

因为 Pifithrin-α临床试验 【方法】 1.建立嗅鞘细胞、雪旺细胞、神经干细胞、骨髓间充质细胞和造血干细胞的体外培养技术,并对培养细胞进行鉴定。 2.建立SD大鼠脊髓T10全横断损伤模型。将动物分假手术组、单纯脊髓全横断手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组,NSC移植组、BMSC移植组、HSC移植组、SC细胞移植组,OEC移植组,以及NSC+OEC,BMSC+OEC,HSC+SC联合移植组。术后14d沿原切口暴露损伤脊髓,选取距离瘢痕5mm的脊髓上下端和瘢痕各取左右两个位点(脊髓上下端旁开脊髓后正中沟0.5mm,瘢痕处的左右侧位点参照脊髓上下端的左右位点定位),共6个位点用立体定向仪进行细胞移植(1.0×10~5/5uL,每个位点)。用5mg/kg/天腹腔注射环孢素(CsA)以减轻细胞移植后的免疫排斥反应。 有 3.后肢运动功能评分:移植术后1～24周,采用双盲法由三名观察人员每周末进行大鼠后肢BBB运动功能评分。最后将三人所得分值求平均分后进行统计学处理。筛选出促进脊髓损伤功能恢复最好的一组为NSC+OEC联合移植组。 4.神经电生理检测:对NSC+OEC联合移植组,及其相应对照组进行神经电生理检测,进一步探讨NSC+OEC联合移植组促进SCI的实验依据。 (1)运动诱发电位(MEP)的测定 采用了神经电生理经颅磁刺激器对NSC+OEC联合移植组14d组,及其对照组假手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组和OEC移植组的MEP进行检测。3.6%水合三氯乙醛麻醉固定动物后,用盘状电极通过导电膏粘附于大鼠耳朵作为地线,记录电极置于大腿股四头肌,正负电极间距1cm,磁力板中心置于大脑皮质运动区之上刺激大脑皮质,以刺激强度40%刺激大脑皮质,记录股四头肌收集到得电位变化,待波形稳定且重复3次时中止并描记结果。

(2)皮层体感诱发电位(CSEP)的测定 本实验采用了皮层体感诱发仪(MEDTRONIC公司产品-KEYPOINY)对移植14d的NSC+OEC联合移植组,及其对照组假手术组、脊髓全横断手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组和OEC移植组进行了检测。电流为方波脉冲型,刺激电极置于大鼠左下肢胫后神经处,正负电极间距为1cm,参考电极置于大鼠鼻正中皮下,记录电极置于大鼠右侧大脑皮层处皮下,接地电极置于大鼠耳朵。参数设置:扫描速度10ms/D,灵敏度10uv/D,滤波低频10Hz,滤波高频2KHz,刺激强度以引起大鼠后爪抖动为止。每次均记录300次波形后将其叠加平均得到最终的检测结果。 5.植入细胞存活检测: 在第12和24W末取部分动物用3.6%的水合氯醛进行腹腔注射麻醉,4%的多聚甲醛灌注固定后取材、冰冻切片,荧光显微镜下观察植入细胞存活,迁移。 6.PCR扩增疤痕组织的神经营养因子及其受体,和凋亡相关因子: 将14d、21d、28d的各组全横断脊髓(手术注射免疫抑制剂组、NSC移植组、OEC移植组和NSC+OEC联合移植组)活体取出疤痕部位及临近组织,匀浆、裂解、提取总RNA、逆转录合成cDNA,进行神经营养因子NGF、BDNF、NT-3、CNTF、PDGF-B、IGF-1、bFGF、TGF-β1,及其受体TrkA、TrkB和TrkC,和凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3及内参照β-actin的PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。测光密度值,进行统计学分析,筛选出有变化的因子。推测其中与SCI有关的重要分子。 7.