0个月和9.4个月。2013年TCGA对人类12肿瘤类型的3299例标本进行全基因组测序结果进行汇总分析,最后通过基因改变进行整理分类,绝大部分癌症可归类为突变组(M组)或扩增组(C组),肺腺癌属于M组,分子事件变化以突变为主,肺鳞癌则是C组,分子事件变化以扩增为主。肺腺癌的单个基因点突变即可驱动肺癌的发生和发展,而肺鳞癌高通量测序结果揭示了肺鳞癌与肺腺癌完全不同的分子特征,肺鳞癌分子变化更加多样和复杂,为肺鳞癌患者靶向药物的开发增加了难度。这些研究结果同样也部分解释了肺腺癌患者接受EGFR-TKI治疗效果优于肺鳞癌的原因。众多的临床靶向治疗疗效观察发现,肺鳞癌的治疗疗效较腺癌差,且肺鳞癌目前仅有约7%的患者有EGFR突变和／或ALK融合,有机会接受靶向治疗。所以对大部分肺鳞癌患者而言,标准化疗仍然是治疗的主要手段,但与肺腺癌相比较,肺鳞癌对化疗的敏感性也较肺腺癌差。肺鳞癌的靶向治疗研究方面目前仍然落后于腺癌的研究。目前肺鳞癌中的研究较多的驱动基因主要有：FGFR1基因扩增,DDR2基因突变、PI3CA基因扩增和突变、PTEN基因缺失,相关靶向药物的研究仍在进行,目前暂且没有有效的靶向药物用于临床。所以说,寻找有益于肺鳞癌靶向治疗的驱动基因有着非常重要的现实意义。大细胞肺癌因其发病率低,专门针对大细胞肺癌的基因组学及相应的分子靶向研究更为稀少,现代医学对大细胞的认识非常粗浅,大细胞的个体化治疗亟待研究。本研究所通过基因和组织芯片等技术发现BCL11A(B

许多 Cell Lymphoma/Leukemia 11A)基因在非小细胞肺癌的癌组织中明显高于癌旁组织,在肺鳞癌和大细胞肺癌中的表达较肺腺癌高,且BCL11A的表达水平受到miR30a的调控。不仅如此,临床资料分析发现BCL11A基因是早期非小细胞肺癌患者术后无疾病生存期(DFS)独立预后因子。BCL11A基因又称CTIP1基因,与鼠的Evi9基因同源,属于B细胞淋巴瘤／白血病BCL11基因家族,在人类主要定位于2号染色体短臂2p16位点,能够编码C2H2锌指结构蛋白,为kruppel样转录因子,发挥转录抑制作用,与造血系统的淋巴瘤、白血病以及地中海贫血疾病之间的关系较密切,而与其他肿瘤之间的关系仍在进一步的研究中。由于转录过程中拼接的不同,产生三个亚型,根据结构大小命名为eXtra-Long 因为 (XL; 5.9 kb/125 kD), Long (L; 3.8 kb/100 kD) and Short (S, 2.4kb/35kD),不同的BCL11A亚型存在不同的功能及亚细胞定位。目前,众多的基础研究发现,BCL11A在B淋巴细胞及B细胞来源的淋巴瘤/白血病细胞的生长、增值和分化过程中发挥重要作用,被认为是原癌基因。值得关注的是,2015年1月在Nature杂志上由Khaled等研究者发表的文章,首次在三阴性乳腺癌(TNBC)中证明BCL111A基因的致瘤作用,同时也成为TNBC治疗的一个潜在靶点基因。与肺鳞癌相比,肺腺癌在非小细胞肺癌中发病率较高,而驱动基因的研究也相对比较透彻,其中发挥重要作用的三个驱动基因的阳性率分别为：EGFR基因突变率达49.8%,ALK基因融合阳性率为7.7%,ROSl基因融合为1.2%-1.7%。与EGFR和ALK基因相比,ROS1基因融合是肺腺癌的一个少见基因。ROS1基因作为酪氨酸激酶受体家族的一员,基因发生重排以后,使得酪氨酸激酶区持续处于活化状态,从而促进肿瘤细胞的生长和肿瘤形成。研究发现ROS1基因和ALK基因在激酶区的氨基酸有49%的同源性,细胞实验发现ROS1阳性的肺癌细胞株(HCC78)对ALK抑制剂克唑替尼治疗有效,且ROS1阳性的非小细胞肺癌患者同样对克唑替尼有效,临床试验数据显示患者的客观反应率(ORR)为56.0%,疾病控制率(DCR)为85.0%。同时多个有关ROSl基因的临床试验均表明,ROS1基因作为肺腺癌的一个少见基因,可指导临床用药及预测疗效。目的本研究主要对非小细胞肺癌患者中的两个少见基因与预测和预后作用进行研究。首先,在前期研究的基础上,以BCL11A基因三个蛋白亚型的结构以及功能不同为基础,对人类非小细胞肺癌组织中BCL11A基因进行蛋白分型分析。其次,针对亚型差异表达情况与临床数据结合进行预后生存分析。最后,收集部分接受克唑替尼治疗的ROSl阳性的非小细胞肺癌患者,对其临床疗效进行总结,指出ROSI基因对非小肺癌患者的预后和预测作用。第一部分非小细胞肺癌中BCL11A基因的三个蛋白亚型分析方法1.实验标本的选取选取前期免疫组织化学验证BCL11A蛋白表达阳性的非小细胞肺癌组织标本共40例,肺鳞癌共选取27例(27/40,67.5%),大细胞肺癌选取8例(8/40,20.0%),腺癌选取5例(5/40,12.5%)。选择的主要依据是BCL11A基因在蛋白和RNA水平在肺鳞癌及大细胞肺癌中的表达水平均较腺癌高,所以主要研究对象是肺鳞癌及大细胞肺癌。2.实验抗体的选择选择依据是根据三个亚型的大小以及亚细胞定位不同进行选择。(1)BCL11

什么 A/123抗体(Active Motif公司),主要识别BCL11A蛋白亚型的637-835aa片段,而L和S两个亚型不具备该氨基酸片段,该抗体具有识别XL亚型的特异性,大量的文献实验结果也支持XL亚型验证。(2)Ab19487抗体(Abeam公司),主要识别172-434aa片段,为BCL11A-XL和L两个亚型共有的氨基酸片段,根据BCL11A-XL亚型结果,运用排除法可以确定二者的有无。另外一个原因是抗体Ab1987也是前期实验使用的抗体,为保证前后实验结果的一致性,所以选择该抗体。(3)Abl 8688抗体(Abeam公司),识别1-171aa片段,为三个亚型所共有,但是根据文献报道,BCL11A-XL和L亚型均分布于细胞核中,而S亚型主要存在于细胞质中,故根据蛋白定位可以识别S亚型的存在。(4)二抗选择带有辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠二抗和GFP标记的荧光二抗(GeneTex公司)。3.免疫组织化学实验3.1切片制备石蜡组织进行切片,厚约4-6微米,每例标本切取7张玻片,其中1张用作病理评估,3张做为实验阴性对照。3.