05)。与MOD组比较,INH组收缩压下降(P<0.05)。MOD组炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α表达量显著高于CON组(P0.05)；与CON组比较,MOD组P38 MAPK/NF-κB通路蛋白p-P38 MAPK、p-IκB显著增加。INH组p-P38 MAPK、p-IκB与CON组比较差异均不显著(P>0.05)。结论：体内环境下,CIH可能通过P38 MAPK/NF-κB信号通路引发血管内皮的炎症损伤,造成模型小鼠血压升高。P38
BGB324研究购买 MAPK抑制剂SB203580可通过抑制P38 MAPK/ NF-κB信号通路抑制CIH后的炎症状态并抑制小鼠血压升高。实验研究二补肾清肝方对间歇性低氧模型血管内皮P38 MAPK/NF-κB信号通路的干预效应研究第一部分补肾清肝方有效组分对人脐静脉内皮细胞间歇性低氧模型P38 MAPK/NF-κB信号通路的干预效应研究目的：体外环境评价中药复方补肾清肝方对IH后血管内皮炎症损伤的保护效应并探讨其作用机制。方法：在HUVECs的IH模型基础上,按1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml加入补肾清肝方有效组分(异钩藤碱、桃叶珊瑚苷、川芎嗪,GDC),进行最佳浓度筛选。最佳用药浓度确定后,实验分为4组：正常对照组(CON组)、间歇性低氧组(IH组)、IH+补肾清肝方有效组分组(GDC组)以及IH+P38 MAPK抑制剂组(INH组)。中药预处理30min后开始造模,造模方法同前。进行细胞粘附功能检测、QPCR检测ICAM-1、E-selectin、IL-1、IL-6、TNF-α含量,细胞免疫荧光及Western-blot法检测P38 MAPK/NF-κB通路蛋白的表达。结果：QPCR结果提示GDC 0.01μg/ml干预后炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α表达量均低于IH组(P0.05)。细胞粘附实验结果显示,GDC组HUVECs的粘附细胞数明显低于IH组(P<0.05),AB组降压效果优于BSQG-H组(P<0.05)。QPCR结果显示BSQG-H组IL-1、IL-6、TNF-α表达量低于MOD组(P0.05)。同时BSQG-H组抑制IL-1、IL-6优于阳性药对照(AB组)(P
肾小球硬化是肾小球肾炎和其他肾脏疾病发展过程中的一种常见病理改变,其主要病理特征是肾小球内细胞外基质(Exrtaclleluar
Bcl-2 lymphoma Mtarix,EcM)过度沉积。而肾脏系膜细胞(mesnaigal clle,MC)是目前公认的分泌肾小球ECM的主要细胞,在维持肾小球结构和功能完整性方面都发挥重要作用。Ⅳ型胶原(tyepⅣcollagen,collagneⅣ)是肾小球ECM的重要成分之一,特别是发生肾小球肾炎和肾小球硬化时,在MC能够影响到的系膜区和基底膜部位,Ⅳ型胶原的含量明显增多。因此,研究肾小球MC中W型胶原的表达及其影响机制,对于认识和调控肾小球硬化具有重要意义。MC可自分泌多种细胞因子,转化生长因子β1(Transfomring growth factorβ1,TGF-β1)就是其中的一种,TGF-β1是TGF-β超家族的成员,上调ECM基因表达、促进ECM沉积是其重要功能之一。因此,TGF-β1在肾小球硬化过程中发挥重要作用。TGF-β1主要靠其下游的信号传导通路来发挥作用,Smads家族是TGF-β1下游经典的信号传导分子。除此之外,还存在其他一些非Smad通路,如MAPK通路、AKT/IP3K通路等。MAPK信号通路是目前己证实的TGF-β1下游重要的非Smda信号通路之一,而且大量报道显示,TGF-β1/Smda和MAPK通路之间存在串话,其中以E双1/2与Smad之间的关系研究最多,JNK、p38与Smad通路之间的关系研究相对较少。饰胶蛋白聚糖(Decroin,DCN)是一种富含亮氨酸的小分子量蛋白聚糖,也是MC分泌的重要成分之一,主要分布在结缔组织中,属于ECM成分的一种。在调节细胞增殖分化、ECM合成沉积、细胞因子功能等方面发挥重要作用。DCN可以通过多种机制拮抗TGF-β1的生物学功能,因此,DCN是TGF-β1重要的抑制因子。我们实验室前期工作已证实,DCN可以抑制大鼠肾脏MC生长和基质合成,动物实验中,DCN可拮抗大鼠抗Thy-1.1肾炎模型病变肾小球的程度和发展。但其在肾小球病变中的作用机制目前还没有完全阐明。在肾小球硬化中,TGF-β1主要作用于肾脏MC。研究表明,肾小球病变时TGF-β1田在激活Smad信号通路过程中,也有MAPK通路信号分子被激活。但MC中MAPK-Smad信号分子之间的串话作用研究还是较少的。Hayshiad等曾证明人的MC中,ERK1/2依赖的Smda3连接区磷酸化能够促进Ⅰ型胶原的表达,但ERK1/2和Smda通路之间相互影响的复杂机制还是没有完全了解。因此,本实验中我们在体外培养的大鼠MC中继续深入研究MAPK和Smda通路之间的串话作用,特别是除ERK1/2分子外,JNK及P38与Smad2之间的串话,以及这些串话在MCTGF-β1即诱导的Ⅳ型胶原表达过程中的作用。同时,初步探讨DCN对Ⅳ型胶原表达的影响,及其对TGF-β1活化的MAPK和Smda通路的作用,为后续研究的展开做好铺垫。
获悉更多 第一部分TGF-β1诱导的大鼠系膜细胞Ⅳ型胶原表达过程中MAPK对Smad2通路的影响 目的探讨外源性TGF-β1对体外培养大鼠MC表达Ⅳ型胶原以及对MAPKs和Smad2信号通路的影响,同时观察该过程中MAPK对Smad2信号通路的影响。 方法培养大鼠MC,在培养液中添加外源性TGF-β1,采用Western Blot方法观察MC内Ⅳ型胶原和MAPKs表达的变化；或者通过预先在培养液中分别添加MAPK信号通路抑制剂U0126、SB203580、SP600125,再用外源性TGF-β1因子刺激,采用Western Blot方法观察MC内Ⅳ型胶原以及MAPKs和Smad2表达的变化,同时采用Real time RT-PCR检测不同处理后,Ⅳ型胶原mRNA水平的改变。 结果用不同浓度的TGF-β1刺激MC 6h,可见Ⅳ型胶原从1 ng/ml开始有上升趋势,其中以2.5ng/ml升高最明显(P<0.05),表明外源性TGF-β1诱导的MC内Ⅳ型胶原表达升高呈剂量和时间依赖性。与此同时,TGF-β1激活了MAPKs和Smad信号通路,TGF-β1作用15min后可见磷酸化的ERK、JNK、p38和Smad2均表达升高,其中磷酸化的ERK、p38和Smad2在TGF-β1作用后1h达高峰,磷酸化的JNK在2h达高峰(P<0.05),但使用JNK通路抑制剂后,仅P-Smad2C下调(P0.