0%和61.4%)明显高于癌旁正常组织;VEGF-C和p38MAPK蛋白在伴有淋巴结转移组的乳腺癌组织中的表达均高于无淋巴结转移组(P=0.005,P=0.005);在乳腺浸润性导管癌组织中VEGF-C和p38MAPK表达存在显著正相关(r=0.383,P=0.001),并与乳腺浸润性导管癌的TNM分期(P=0.019,P=0.010)有关;VEGF-C和p38MAPK蛋白表达与乳腺浸润性导管癌肿块的大小(P=0.203,P=0.086)和患者的年龄(P=0.0.266,P=0.087)无明显关系。Western Bcl-2抑制剂 blot也证实,VEGF-C和p38MAPK蛋白在有淋巴结转移组中表达高于无淋巴结转移组。结论

VEGF-C和p38MAPK的蛋白表达与乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移密切相关,其有望成为乳腺癌治疗的新靶点。
目的:研究雷公藤甲素对正常人肝细胞株L-02细胞凋亡诱导的作用及对细胞内钙离子及p38MAPK磷酸化的影响。方法:体外培养L-02细胞,Fluo-3AM标记与PI法观察雷公藤甲素对细胞的损伤作用,并测定雷公藤甲素作用下L-02细胞内钙离子浓度及Phospho-p38与Total-p38的含量。结果:雷公藤甲素体外诱导L-02细胞损伤,随着孵育时间的延长,细胞内钙离子浓度升高,至9h时达峰值(P<0.01),12h时有所下降(P<0.05);同时,雷公藤甲素促进细胞中P38MAPK的磷酸化(P<0.01),但对Total-p38无影响。结论:细胞内钙离子的释放及p38MAPK的磷酸化可能参与了雷公藤甲素引起的L-02细胞毒性。
The biological properties of tumor cells are known to be regulated by a multitude of cytokines and growth factors,which include epidermal growth factor receptor agonists and members of the transforming growth factor β family.Furthermore,the recent explosion of research in the field of chemokine function as mediators of tumor progression has led to the possibility that these small,immunomodulatory proteins also play key roles in carcinogenesis and may,therefore,be potential targets for novel therapeutic approaches.In this review,we

will summarize recently reported findings in chemokine biology with a focus on the gastrointestinal tract.
目的探讨c-Jun/激活蛋白1(AP-1)在活化的凝血因子Ⅶa促进SW620细胞增殖、迁移过程中的作用及其调控机制。方法 查找更多 Western blot检测人结肠癌SW620细胞中Ⅶa、组织因子(TF)、蛋白酶激活受体2(PAR2)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)抑制剂U0126、p38抑制剂SB203580处理后c-Jun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)的蛋白水平变化;MTT和Transwell法分别检测AP-1抑制剂姜黄素对细胞增殖和细胞迁移能力的影响。结果单克隆抗TF和PAR2抗体、U0126均能抑制Ⅶa促进SW620细胞中c-Jun/AP-1活化的过程(P<0.05)。姜黄素降低Ⅶa诱导的SW620细胞增殖和细胞迁移能力(P
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。生长因子、细胞因子以及激素等生物活性物质参与了乳腺细胞癌变以及转移的过程,这些活性物质介导的信号转导途径发生异常,可引起某些基因的过度扩增,导致正常细胞接受了异常的增殖、分化和生长信号,最终促使细胞发生癌变。
脑血管性疾病具有发病率、致残率和病死率高的特点,严重危害人类的健康,缺血性脑病更是列居首位。近年来其发病率呈不断上升的趋势,随着我国老龄化社会的到来,形势将更加严峻。
目的探讨右美托咪定逆转七氟烷对发育期大鼠的神经毒性作用及其可能机制。方法

mTOR 信号通路 Sprague-Dawley(SD)大鼠60只,雌雄不拘,日龄7d,体重15～20g,将大鼠随机分入0.9%氯化钠溶液对照组、右美托咪定对照组、七氟烷组和右美托咪定+七氟烷组。0.9%氯化钠溶液对照组、七氟烷组大鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液10μL,放入密闭箱内吸入混合气体(体积分数为0.3的氧气+体积分数为0.7的氮气);右美托咪定、右美托咪定+七氟烷组大鼠腹腔内注射右美托咪定10μL(25μg/kg,以0.9%氯化钠溶液稀释至10μL),放入另一密闭箱内,持续吸入混合气体+体积分数为0.02的七氟烷4h。结束后4h,每组各取6只幼鼠处死取海马组织,采用Western印迹法测定活化型半胱天冬酶3(caspase-3)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)的表达水平。各组余下的9只大鼠饲养至42d,采用Morris水迷宫行为学实验测定其学习记忆功能。结果七氟烷组的活化型caspase-3表达水平(0.1373±0.2000)显著高于0.9%氯化钠溶液对照组(0.0694±0.0900,P<0.01),右美托咪定+七氟烷组的活化型caspase-3表达水平(0.0958±0.1300)较七氟烷组显著降低(P<0.05)。七氟烷组的p-p38MAPK表达水平(0.0319±0.2100)显著高于0.9%氯化钠溶液对照组(0.0242±0.1600,P<0.05),右美托咪定+七氟烷组的p-p38MAPK表达水平(0.0210±0.1400)显著低于七氟烷组(P<0.05)。实验第45、46天,七氟烷组大鼠的逃避潜伏期均显著长于0.9%氯化钠溶液对照组同时间(P值均<0.05),而右美托咪定+七氟烷组大鼠均显著短于七氟烷组同时间(P值均<0.05)。七氟烷组的穿越平台次数为(1.33±0.46)次,显著少于0.9%氯化钠溶液对照组的(3.44±0.51)次(P<0.

0统计软件进行数据分析,计量资料用均数士标准差(X±S)表示。两样本比较采用独立样本t检验,多个样本均数的比较采用单向方差分析(one-way ANOVA)。根据方差齐性检验结果,如方差齐时多重比较采用LSD(Least-significant-Difference)方法检验；如方差不齐时方差分析采用Welch法校正的近似F检验,多重比较采用Dunnett’s T3方法检验。检验水准为a=0.05。结果 1.龟板对K562和人红系细胞珠蛋白基因表达及HbF合成的作用 1.1龟板诱导K562细胞向红系分化 联苯胺染色结果显示不同浓度龟板作用于K562细胞,各浓度组中以龟板5mg/ml组的BZ%值最高,峰值在96h BZ%达11.72±0.68%,与未加药组(2.47±0.20%)相比差异有显著性意义(P<0.05)；龟板诱导K562细胞72h、96h、120h后α珠蛋白基因mRNA表达水平分别为未加药组的0.63±0.02、0.62±0.02、0.50±0.01倍,诱导前后差别有显著性意义(P0.05)。证明龟板对K562细胞γ珠蛋白基因表达有上调作用,对a珠蛋白基因表达有下调的作用,对p珠蛋白基因的表达没有影响。 1.2.2龟板对地贫病人外周血培养的红系细胞珠蛋白基因表达作用：龟板诱导不同地贫病人外周血培养的红系细胞Y珠蛋白基因!mRNA表达水平升高为未加药组的4.94±1.17倍,诱导前后差别有显著性意义(P
目的：长期以来糖皮质激素（glucocorticoids, GCs）作为重要抗炎药物用于炎症性肺病（inflammatory lung disease, ILD）的治疗。ILD是由于炎症、免疫等各种因素导致肺及支气管内大量巨噬细胞、中性粒细胞等炎症细胞浸润，释放大量炎症介质产生瀑布级联，进而引起肺内炎性介质和抗炎介质失衡造成的肺脏疾病。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），可以通过刺激机体各种免疫细胞产生大量的细胞炎性介质，进而诱发ILD。肺泡巨噬细胞(alveolar

Smad抑制剂 macrophages，AMs)是LPS的主要效应细胞，释放内源性炎症因子产生瀑布级联是导致炎症发生、发展的根本原因。信号转导转录激活子-3（Signal transducers and activators of transcription-3,STAT3）的激活在调控ILD起着关键的作用。抑制丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信号转导通路能减少致炎症细胞因子的释放。本实验以小鼠AM为研究对象，观察激素与p38MAPK特异性抑制剂SB203580对LPS刺激的上述细胞分泌TNF-α、IL-10的影响，分析两者是否存在协同作用并进一步探讨STAT信号途径在其中的作用，为临床应用激素及p38MAPK抑制剂治疗ILD提供理论基础。

方法： 1.ELISA检测LPS刺激细胞上清液中的TNF-α浓度。培养MH-S细胞株，调节细胞浓度到1×10~6/ml，于24孔板中培养过夜，随机分组：①对照组：加入与各实验组体积相同的无血清RPMI1640培养液；②LPS+Dex组：终浓度为1×10~(-6)mol/L的DEX预孵育2h后LPS刺激2h、6h、12h；③Dex组：终浓度为1×10~(-6)mol/L的DEX刺激2h、6h、12h；④Dex+SB203580+LPS组：终浓度为1×10~(-6)mol/L的DEX预孵育2h后，终浓度为10μmol/L的SB203580预孵育20min后LPS刺激2h、6h、12h；⑤LPS+SB203580组：终浓度为10μmol/L的SB203580预孵育20min后LPS刺激2h、6h、12h；⑥LPS组：终浓度为100ng/ml的LPS刺激2h、6h、12h。 各组细胞刺激成功后取上清液， BAY 73-4506制造商 ELISA测定细胞上清液中TNF-α的含量。 点击此处 2. ELISA检测LPS刺激细胞上清液中的IL-10浓度。方法及分组同TNF-α测定。 3.免疫细胞化学法检测MH-S细胞中p-STAT3的表达。将MH-S细胞于24孔板中进行爬片，调节细胞浓度到1×106/ml，培养过夜，随机分组：①对照组：加入与各实验组体积相同的无血清RPMI1640培养液；②LPS+Dex组：终浓度为1×10~(-6)mol/L的DEX预孵育2h后，LPS刺激30min；③Dex组：终浓度为1×10~(-6)mol/L的DEX刺激30min；④Dex+SB203580+LPS组：终浓度为1×10~(-6)mol/L的DEX预孵育2h后，终浓度为10μmol/L的SB203580预孵育20min后，LPS刺激30min；⑤LPS+SB203580组：终浓度为10μmol/L的SB203580预孵育20min后，LPS刺激30min；⑥LPS组：终浓度为100ng/ml的LPS刺激30min。各组MH-S细胞刺激成功后，用免疫细胞化学法检测各组细胞中的p-STAT3表达变化。

4.Western blot方法检测MH-S细胞内p-STAT3、STAT3的表达。实验分组同免疫细胞化学法，于6孔板中上述各组细胞刺激成功后收集细胞，检测细胞内p-STAT3、STAT3表达。 数据以均数±标准差()表示，各组比较用单因素方差分析(Oneway ANOVA)，各组之间进一步用Student-Newman-Keuls(SNK-q)检验进行两两比较分析是否有显著性差异，P<0.05)；DEX预处理后，抑制LPS诱导的TNF-α增加，与LPS组在2h、6h、12h分别比较差异有统计学意义(P<0.05)；SB203580预处理后，抑制LPS诱导的TNF-α增加，与LPS组在2h、6h、12h分别比较差异有统计学意义(P<0.05)；DEX和SB203580共同预处理后发挥协同作用，进一步抑制LPS诱导的TNF-α增加，与DEX+LPS组在2h、6h、12h分别比较差异有统计学意义(P<0.05)，与SB+LPS组在2h、6h、12h分别比较差异也有统计学意义(P<0.05)；DEX预处理后，抑制LPS诱导的IL-10增加，与LPS组在2h、6h、12h分别比较差异有统计学意义(P<0.05)；SB203580预处理后，抑制LPS诱导的IL-10增加，与LPS组在2h、6h、12h分别比较差异有统计学意义(P<0.05)；DEX和SB203580共同预处理后发挥协同作用，进一步抑制LPS诱导的IL-10增加，与DEX+LPS组在2h、6h、12h分别比较差异有统计学意义(P<0.05)，与SB+LPS组在2h、6h、12h分别比较差异也有统计学意义(P<0.05)；与LPS组比较，DEX+LPS组、SB+LPS组、DEX+SB+LPS组p-STAT3表达均显著减少(P<0.05)；与DEX+LPS组、SB+LPS组比较，DEX+SB+LPS组p-STAT3表达进一步减少(P<0.05)；与LPS组比较，DEX+LPS组、SB+LPS组、DEX+SB+LPS组p-STAT3表达均显著减少(P<0.

5的为下调,FC在0.5到2之间为无显著变化。结果表明,0.5h时有154个基因上调表达,188个基因下调表达；1h时有213个基因上调表达,223个基因下调表达；3h时有531个基因上调表达,665个基因下调表达。3个时间点都上调的基因有75个,都下调的基因有81个。 进一步对差异表达的TCS基因分析发现,SSU05_0427、SSU05_0906、 SSU05_0944、SSU05_1358、SSU05_1595、SSU05_1660和SSU05_1685等7个基因一直上调表达；而SSU05_0883、SSU05_2090,2个基因一直下调表达；SSU05_0430、SSU05_1910和SSU05_2148,3个基因先下调表达后上调表达；SSU05_1094基因先上调表达,然后下调表达。

3.TCS基因缺失突变株对致病性和炎症反应的影响 在SS2与天然免疫细胞猪中性粒细胞的相互作用过程中,双组份调控系统基因呈现不同的表达情况,且在不同时间发挥作用。1094HK/RR、1660HK/RR和1910HK/RR基因分别在免疫反应的早期、中期和后期发挥作用。 以CD-1小鼠为模型,动物实验结果表明,双组份调控系统基因1910HK/RR、1094HK/RR和1660HK/RR缺失后,降低了宿主促炎症因子的表达水平,在12小时宿主炎症反应最为强烈；SS2抵抗PMNs吞噬的能力,以及SS2的致病性明显降低。
心肌重构是一种引起多种心血管疾病发病率和死亡率显著升高的独立危险因素，可引起心力衰竭和恶性心律失常，最终导致死亡。逆转左心室肥大和重构已成为当前抗高血压和治疗慢性心力衰竭的重要目标之一。汇利心康（HLXK）是本实验室针对在心肌重构过程中发挥关键作用的Gq蛋白α亚单位羧基末端，设计制备的一种多肽药物，能通过抑制Gq蛋白信号传导，有效抑制血管紧张素Ⅱ和去甲肾上腺素诱导的离体心肌细胞肥大反应，以及多种不同动物模型的心肌重构。 Selleckchem GSK1210151A selleck化学 然而，心肌细胞的信号转导系统是一个十分复杂的网络，由众多的神经体液分子、受体、G蛋白、效应器、第二信使、转录因子等共同组成。其中多个信号分子之间都存在着反馈调节和交互作用，任何一个节点的变化都可能对整个网络系统产生影响，从而精细调控整个细胞的信号转导乃至组织器官功能。HLXK拮抗Gq功能后，不仅会影响Gq蛋白下游信号分子的表达和功能，而且可能对其他通路的信号分子产生影响。因此，研究HLXK对心肌细胞信号转导网络的影响不仅有助于进一步深入理解其抗心肌重构作用机制，而且有助于了解其对心肌功能的整体影响。

方法： 1.动物分组：SHR雄性大鼠18只，随机分为模型组、氯沙坦组和HLXK组(n=6)，分别给予生理盐水（normal saline, NS）2ml/kg（ip, bid)、氯沙坦6mg/kg（ig, qd)和HLXK90μg/kg（ip, bid)，连续8W；并设立WKY大鼠正常对照，给予NS(2ml/kg, ip, bid)，连续8W。 2.实验过程中，密切观察大鼠的一般情况及其死亡情况。末次给药后，称量体重，颈椎脱臼处死，称重法测定大鼠的心脏指数和左心室指数。 3.采用定量PCR芯片技术检测大鼠心肌组织中心肌重构相关通路的信号分子表达情况。 4.结合PCR芯片筛选结果，采用Real-time PCR和Western blot进行验证。 结果： 1．与WKY大鼠相比，SHR出现明显心肌重构；HLXK能明显降低SHR大鼠的心脏指数和左心室指数，改善左心室重构； 2．在SHR心肌重构信号传导网络中，信号转导分子表达明显上调的有Serpine1、Jun、S1pr3、Max、Grm1、Il1r1、Cdkn1a、Crhr1、Chhr2、Ctgf、Edn1、Fgf2、Bcl2l1、AC5和Akt1；表达明显下调的有Bai1、Ccnd1、Gcgr、Nos2(iNOS)、Pik3cg、Ptgdr、Sctr、Tnf和Vcam1。

3．RT-PCR芯片结果显示HLXK能有效抑制Cdkn1a、Ctgf和Edn1基因表达，上调Grm4、Nos2和Tshr基因的表达。 也许 4．HKXK能明显增加SHR α-MHC mRNA的表达，降低CaN mRNA、CDKN1AmRNA和β-MHC mRNA的表达； 5．HKXK能明显增加SHR α-MHC蛋白表达，降低CaN、CDKN1A和β-MHC蛋白表达。 结论： 1．自发性高血压大鼠发生明显心肌重构，其心肌细胞信号转导网络明显紊乱，数条信号通路的多种神经体液因子、生长因子、受体、效应酶，细胞周期调节蛋白、癌基因和肥大相关基因表达失衡。 2.多肽药物汇利心康能明显改善SHR心肌重构。 3．汇利心康抑制心肌重构作用与其下调CDKN1A、CTGF、ET-1、CaN表达，上调GRM4、NOS2和TSHR表达，纠正α-MHC和β-MHC的表达失衡有关。
目的体外培养骨骼肌L6细胞，诱导其分化成熟，采用棕榈酸诱导的方法，建立骨骼肌L6细胞胰岛素抵抗（IR）模型。给予不同条件的人工干预，探讨骨骼肌源性脂联素对胰岛素抵抗模型中GLUT4表达的影响，及其中p38MAPK信号通路的地位和作用。 方法（1）体外培养大鼠L6成肌细胞并诱导分化为成熟骨骼肌L6细胞，给予不同浓度（0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mmol/L）的棕榈酸（PA），并应用葡萄糖氧化酶法分别测定不同时间（2、4、8、12、24、36h）细胞培养上清液葡萄糖浓度，观察不同浓度PA对L6细胞摄取葡萄糖的影响，据此判断胰岛素抵抗模型建立成功与否。（2）根据干预条件的不同，实验分为四组：NC组（对照组，骨骼肌L6细胞组）；NC+SB组(对照+阻滞剂SB203580组)；IR组（胰岛素抵抗模型组）；IR+PIO组(胰岛素抵抗模型+吡格列酮组)。应用Western blot方法分别测定上述四组APN、p-p38MAPK和GLUT4蛋白表达水平。 结果(1)0.4mmol/L的棕榈酸在作用12、24、36h以及0.6，0.8mmol/L棕榈酸作用8、12、24、36h，或1.0mmol/L棕榈酸作用4、8、12、24、36h后，细胞培养上清液中葡萄糖含量，明显高于对照组（P＜0.05）。据此判断胰岛素抵抗模型建立。（2）Western blot结果显示：①与NC组比较，IR组APN和GLUT4蛋白表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05），而p-p38MAPK虽减少，但无统计学意义（P＞0.05）；②与NC组比较，NC+SB组p-p38MAPK和GLUT4的蛋白表达减少（P＜0.05），差异有统计学意义，尽管APN蛋白表达水平减少，但无统计学意义（P＞0.05）；③与IR组比较，IR+PIO组其APN、p-p38MAPK和GLUT4蛋白表达增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论1.大鼠L6肌细胞株通过培养并分化成熟后，经过一定浓度和时间的棕榈酸诱导，可以建立大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗模型；2.大鼠L6肌细胞可以分泌和表达脂联素，并影响L6肌细胞GLUT4蛋白的表达；3.