结论1.NC对结肠癌HCT116细胞具有抑制增殖、侵袭、迁移和诱导凋亡作用。2.NC对结肠癌裸鼠皮下移植瘤有抑制瘤体生长和血管生成作用。3.PI3K/Akt信号通路是NC抗结肠癌的关键信号通路。4.mTOR、BCL2、CDKN1B、EGFR等是NC对结肠癌HCT116细胞的重要作用靶点,NC通过影响这些基因的表达发挥抗结肠癌作用。
目的LBH589本研究采用细胞生物学试验观察、网络药理学分析寻找、细胞蛋白质组学筛选、蛋白印迹法检测和整体动物试验验证,探寻巴西甘菊花中抗结肠癌作用的活性单体成分及其作用机制。方法①MTT法探寻巴西甘菊花中抗结肠癌活性单体成分巴西甘菊花经化学提取、分离和纯化研究,获得6个含量较多的单体成分,采用MTT法观察单体成分对结肠癌细胞HT-获悉更多29增殖情况,获取具有抗结肠癌活性的单体作为研究对象。②细胞生物学试验观察确定坡模酸(PA)及其吡喃葡萄糖酯(PAO)的抗结肠癌作用采用MTT法检测PA抗HT-29细胞增殖情况,倒置显微镜下观察细胞形态变化,细胞计数仪直接读取HT-29细胞存活率;采用Honest 33342染色、AO/EB染色和AnnexinV-F还有ITC/PI流式细胞术观察细胞凋亡情况,PI单染流式细胞术测定细胞周期变化;采用划痕试验观察HT-29细胞迁移情况。③网络药理学分析寻找PA和PAO的作用靶点利用大数据平台收集PA和PAO潜在作用的靶点以及筛选结肠癌疾病靶点,并将两者预测靶点进行交集,建立预测靶点蛋白相互作用网络;采用富集分析得到靶点生物学功能以及涉及通路情况,最后将PA和PAO分子与核心靶点进行对接来初步确定寻找到的作用靶点。