其次,在加入蛋白合成抑制剂放线菌酮CHX时,过表达FAT10可加速ZO-1的降解速率,而干扰FAT10后ZO-1的降解减慢,表明FAT10可以影响ZO-1的降解。而在加入自噬溶酶体抑制剂3-MA及Bafilomycin A1的同时改变FAT10的表达,发现自噬溶酶体抑制剂3-MA及Bafilomycin A1可阻断FAT10对ZO-1的调控。最后,我们通过免疫共沉淀发现,在结肠癌细胞中,FEPZ015666AT10与ZO-1不直接结合。表明FAT10是通过自噬溶酶体途径影响ZO-1的降解从而影响结肠癌的侵袭迁移能力,但FAT10不通过与ZO-1直接结合的方式来影响其表达。5)在明确FAT10可以通过自噬溶酶体途径调控ZO-1的表达后,我们进一步通过IP质谱发现FAT10可能可以直接与自噬相关基因ATG3直接结合,CO-IP、免疫荧光和Western blot进一步证Dorsomorphin实IP质谱结果及FAT10对ATG3的调控作用,在SW620结肠癌细胞中干扰FAT10的表达后ATG3表达下降,而在HCT-116结肠癌细胞中过表达FAT10后ATG3表达升高,而其m RNA水平不发生变化,表明FAT10可以调控ATG3的蛋白表达水平而不影响其转录。其次,通过泛素化实验我们证实FAT10稳定ATG3的分子机制为FAT10与泛素竞争结合ATG3,从DMH1生产商而达到稳定ATG3并促进结肠癌细胞内自噬水平的作用。随后,通过Western blot及免疫荧光相关回复实验我们证实ATG3是FAT10调控结肠癌细胞内自噬水平的关键分子。最后我们通过Western blot及免疫组化证实,在结肠癌组织中FAT10与ATG3高表达,两者呈正相关,而ZO-1在结肠癌组织中低表达,与FAT10呈负相关。结论FAT10在结肠癌细胞及组织中高表达,与肿瘤的转移及不良预后密切相关,下调其表达可抑制结肠癌的侵袭迁移能力。