方法通过生物信息学方法筛选出与胰腺癌侵袭和转移相关的TRIM15分子作为研究对象,分析TRIM15对胰腺癌病人预后的影响。免疫组化

方法通过生物信息学方法筛选出与胰腺癌侵袭和转移相关的TRIM15分子作为研究对象,分析TRIM15对胰腺癌病人预后的影响。免疫组化实验检测胰腺癌组织芯片中TRIM15的表达情况。Western Blotting实验检测TRIM15蛋白在胰腺癌病人癌组织和胰腺癌细胞系中的表达情况。选取胰腺癌细胞系PANC-1,Bx PC-3和SW1990,分别转染TRIM15的sh GSK2879552花费RNA和过表达质粒。通过荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western Blotting分析转染效率。Transwell小室和划痕实验检测转染后细胞的侵袭和迁移能力。RT-q PCR和Western Blotting实验分析转染后细胞EMT相关标志物的表达情况。构建稳定敲除和过表达TRIM15的胰腺癌细胞系,裸鼠肺转移模型评估TRIM1INCB018424分子量5对转移的影响。利用生物质谱技术和免疫共沉淀(Co-IP)实验技术寻找与TRIM15相互作用的蛋白质,筛选出与TRIM15相关的分子APOA1。在胰腺癌细胞系中转染APOA1的sh RNA和过表达质粒,通过RT-q PCR和Western Blotting实验验证转染效率,同时检测EMT相关标志物的表达。在胰腺癌细胞系中转染TRIM15的s寻找更多h RNA和过表达质粒,通过RT-q PCR和Western Blotting实验检测APOA1 m RNA和蛋白的表达情况,确定上游分子。加入蛋白合成抑制剂放线菌酮(CHX),检测APOA1蛋白的半衰期。泛素质粒和TRIM15的sh RNA或过表达质粒共转染胰腺癌细胞系,免疫沉淀和免疫印迹实验检测APOA1蛋白的泛素化水平。结果三重基序蛋白TRIM15在胰腺癌组织和胰腺癌细胞系中高表达,并且与胰腺癌的预后不良相关。

Comments are closed.