在胰腺癌细胞系中分别使用小干扰RNA敲低ADAR1与Dicer表达后,荧光定量PCR检测lncRNA GLS-AS,GLS pre

在胰腺癌细胞系中分别使用小干扰RNA敲低ADAR1与Dicer表达后,荧光定量PCR检测lncRNA GLS-AS,GLS pre-mRNA表达水平,以及α-鹅膏蕈碱处理上述转染细胞后GLS pre-mRNA的稳定性;Western Blot检测转染细胞中ADAR1、Dicer、GLS蛋白水平。体外模拟胰腺癌组织微环境,包括低氧、酸性、低糖以及低谷氨酰胺,荧光定量PCR检可能测lncRNA GLS-AS的表达,探究lncRNA GLS-AS在胰腺癌中低表达的驱动因素。RNA荧光原位杂交检测低糖、低谷氨酰胺环境下lncRNA GLS-AS的表达水平。荧光定量PCR、Western Blot检测低糖、低谷氨酰胺环境中GLS mRNA及蛋白的表达。Western Blot检测低糖、低谷氨酰胺环境中c-Myc蛋白表达水平。染Selumetinib体外色质免疫共沉淀(ChIP)验证c-Myc蛋白与lncRNA GLS-AS上游启动子结合序列。双荧光素酶报告基因检测c-Myc蛋白对lncRNA GLS-AS启动子转录活性的影响。LncRNA GLS-AS的慢病毒载体转染BxPC-3细胞系,以慢病毒空载体作为阴性对照(LV-Vector),构建裸鼠异种移植瘤模型,观察lncRNA GLS-AS过表selleck HPLC控制达在体内对肿瘤生长、转移的影响。研究结果长链非编码RNA GLS-AS(AK123493.1)在胰腺癌组织以及胰腺癌细胞系中低表达,且在细胞核内富集。体外细胞实验以及裸鼠异种移植瘤模型表明lncRNA GLS-AS低表达可以促进胰腺癌细胞的增殖和侵袭。胰腺癌组织中LncRNA GLS-AS与GLS表达水平呈明显负相关,在胰腺癌细胞中证实lncRNA GLS-AS低表达主要通过升高GLS蛋白水平来增强肿瘤细胞的生长、侵袭能力。

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