将分离菌株与NCBI中10株已登录的标准菌株进行同源性比对,并用MEGA软件构建系统进化树,证明T2019与多种不同来源的奇异变形杆菌亲源性较近。药敏试验结果以及PCR体外扩增技术对相关耐药基因表型检测结果表明,T2019除对米诺环素和氯霉素表现为敏感,对四环素和多西四环素表现为中介以外,对其他所试抗生素均表现为耐药。检出耐药基因tetB、ant(3″)-I、stselleckrA和sul2,其他所试耐药基因未检出。这为奇异变形杆菌引起兔疾病诊断及合理使用常规抗生素药物提供科学依据。
为了提高杂交构树的组培效率,以蒺藜苜蓿为研究对象,进行生物信息分析,克隆蒺藜苜蓿目的基因AAT,构建表达载体,通过农杆菌转化方法将目的载体转入杂交构树组培叶片中,优化组培相关体系配比,抗生素筛选配比,RT-PCR和定量GSK1120212PCR检验重组植株。结果表明 最佳灭菌体系为75%乙醇消毒20 s,0.3%HgCl_2消毒15 min,污染率低,成活率高;最佳愈伤期激素配比为6-BA 2.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L,最佳壮苗期激素配比为6-BA 1.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L。最佳筛选抗生素配比为噻孢霉素(Cef) 300 mg/L、潮霉素(TozasertibHyg) 7.5mg/L;通过RT-PCR验证试验结果,并通过定量PCR测定AAT基因表达含量,重组植株与野生型相比提高2.5倍。试验首次建立了重组载体遗传转化杂交构树,对叶片组培及筛选方法具有重要意义。
近年来,食品安全事件频繁发生,严重威胁着社会公共健康。中国养殖业中普遍使用抗生素来降低畜禽致死率,促进畜禽生长,造成动物源性食品中的抗生素残留问题。因此检测动物源性食品中的抗生素残留是控制食品安全的关键环节。