1).用ATM抑制剂KU-55933处理细胞,然后用流式细胞术检测细胞凋亡水平。 2).用免疫印迹检测ATM抑制剂对DNA损伤应答蛋白(pp53, Chk2,γH2AX,RAD51等)的影响。 第三章.检测BRCA1/2与Aurora-A之间的关系,并研究BRCA1/2对肿瘤放化疗抵抗的影响以及与DNA损伤应答之间的关联。 1).在乳腺癌,胰腺癌和卵巢癌细胞中选择Aurora-A低表达的细时间胞系(MCF-7,PANC-1和OVCA420),以及Aurora-A高表达的细胞系(MDA-MB-231, BXPC3和OVCA429),通过反转录病毒法或Fugene6转染试剂使细胞沉默或者过量表达BRCA1/2。 2).用免疫印迹检测BRCA1/2与Aurora-A之间的关联。 3).通过细胞计数和软琼脂克隆试验分别绘制细胞生长曲线和克隆形成率柱状图。 4)通常.用流式细胞术检测细胞周期进展。 5).细胞放化疗处理后用流式细胞术检测细胞凋亡水平。 6).免疫印迹检测BRCA1/2对DNA损伤应答蛋白(p53, pp53, ATM, Chk2, RAD51, yH2AX)的影响。 结果： 第一部分 Aurora-A可促进细胞增殖,细胞周期进展和软琼脂克隆形成,而Aurora-A沉默可抑制细胞增殖,细胞周期进展和克隆形成。 ISRIB第二部分 放化疗处理后,Aurora-A转入的细胞系凋亡明显降低,而Aurora-A沉默或者用Aurora-A抑制剂VX680处理的细胞系凋亡明显增加；顺铂处理后,Aurora-A转入的细胞系IC50增加,而Aurora-A沉默的细胞系IC50降低。 第三部分 第一章.Aurora-A降低了放射后γH2AX灶点形成,且Aurora-A可异常调节DNA损伤应答。 第二章.ATM抑制剂可增加放化疗引起的肿瘤细胞凋亡,并且影响DNA损伤应答蛋白表达。