通过克隆形成实验和CCK8细胞增殖-毒性检测实验，筛选对PARP抑制剂PHE敏感的细胞，用于筛选PARP抑制剂的细胞模型。 实验结果表明，本论文成功构建了pFast-hPARP1质粒，通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，实现了hPARP1酶在Sf9昆虫细胞中的表达，产物经3-氨基苯甲酰胺柱亲和层析成功得到纯化，得率为80.8%，纯化倍数为3selleck化学药品8.72倍，比活达到1.988U/μg。SDS-PAGE和Western blotting结果显示纯化产物在116kDa处有特异性目标条带。PARP抑制剂体外筛选结果显示，在72种化合物中筛选出41个具有生物活性的PARP抑制剂，其中有7个化合物的IC_(50)低于500nmol/L，显示出良好的PARP抑制作用。细胞模获悉更多型筛选结果显示，中国人源胰腺癌细胞JF305对PARP抑制剂菲啶酮具有一定的敏感性。CCK8结果显示，筛选获得的PARP抑制剂HC-232（A）具有明显抑制JF305细胞的生长作用。 本课题通过分子构建、表达、纯化等步骤获得了hPARP1。利用hPARP1，成功筛选出具有一定生物活性的PARP抑制剂。获得了对PARP抑制寻找更多剂菲啶酮敏感的中国人源胰腺癌细胞JF305，这为筛选出具有自主知识产权的PARP抑制剂奠定了基础，并对后续研究提供了理论依据。
研究背景： 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发病率逐年上升,40-70岁是乳腺癌的高危年龄。据统计,全世界每年约有130万人诊断为乳腺癌,50万人死于乳腺癌,乳腺癌已经成为妇女健康的最大威胁之一。 乳腺癌的治疗手段目前主要有手术、放疗、化疗、内分泌治疗及分子靶向治疗等。