5厘米大小时)进行实验。挑选35只肿瘤负荷较相近小鼠随机分为空白对照组、常山酮组、放射治疗组、放射治疗联合常山酮组,放射治疗联合T

5厘米大小时)进行实验。挑选35只肿瘤负荷较相近小鼠随机分为空白对照组、常山酮组、放射治疗组、放射治疗联合常山酮组,放射治疗联合TGF-β抑制剂组,每组7只。对照组不做处理;常山酮组于接种后第6天至第15天予常山酮腹腔给药,每只鼠2ug/0.1ml/d;放射治疗组于接种后第8天、9天给予移植瘤6MV-X线照射,放射治疗剂量为10Gy×2;放射治疗联合常山酮组给药处理同常山酮组,放射治疗的时间及剂量同放射治疗组;放射治疗联合抑制剂组于接种后第6天至第15天予TGF-β抑制剂(SB431542终浓度1u M)腹腔给药,每只小鼠0.1ml/d,放射治疗处理同放射治疗组。自治疗开始每隔l天用游标卡尺测量瘤径。接种后第15天(照射结束后第6天)各组随机处死3只小鼠,取脾脏制备单细胞悬液后行FACS检测脾脏淋巴细胞中CD4+CD25+Fox P3+调节性T细胞Treg细胞含量;剥离小鼠肿瘤组织,一部分制备单细胞悬液行FACS检测肿瘤组织浸润淋巴细胞中Treg细胞含量,剩余部分福尔马林固定及冻存并通过免疫组织化学、Elisa、Western

Blot等技术研究不同处理组移植瘤TGF-β信号传导通路的变化;剩余小鼠观察移植瘤生长抑制情况,并计算生存期。结果:流式结果显示:空白对照组、常山酮组肿瘤浸润淋巴细胞中Treg含量无明显差异(P=0.989),放射治疗组肿瘤浸润淋巴细胞中Treg含量较对照组明显升高(P<0.001),联合应用常山酮或TGF-β抑制剂组肿瘤组织浸润淋巴细胞中Treg含量较放射治疗组明显下降(P值均0.05),放射治疗结束后第5天,放射治疗组、放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组移植瘤体积开始小于对照组(P值分别为0.008、0.023、0.007),放射治疗组、放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组肿瘤体积无统计学差异(P值均>0.5),放射治疗结束后第9天,放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组肿瘤体积开始小于放射治疗组(P值分别为0.049、0.025),治疗后各时间点放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组肿瘤体积均无明显差异(P值均>0.05)。空白对照组及常山酮组小鼠生存期无统计学差异(P=0.784),OS分别为28天和34天,放射治疗组、放射治疗联合常山酮组及放射治疗联合TGF-β抑制剂组生存期均显著长于空白对照组(P值均<0.05)。结论:常山酮可以改善电离辐射所致的肿瘤免疫抑制状态并增强放射治疗疗效,其可能作用机制是通过抑制肿瘤细胞内TGF-β信号传导通路来实现的。
目的:研究烟草提取物(CSE)对体外培养的大鼠II型肺泡上皮细胞的影响并探究其中的潜在机制。方法:1.体外培养大鼠肺泡上皮RLE-6TN细胞株24

selleck chemicals MLN2238购买 h后,分别加入0.5%,1.0%和2.0%CSE共培养48 h, Hoechst染色法检测烟草提取物对细胞核变化的影响;流式细胞术检测细胞早期凋亡率;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测转化生长因子(Transforming Growth Factor-betal,TGF-β1), smad2的表达量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3裂解片段(Cleaved caspase-3)的活性。2.TGF-β1受体抑制剂(SB431542) 500 nmol·L-1作用RLE-6TN细胞株24h后,加入2.0%CSE共培养48 h。Western blot分别检测Smad2和Cleaved caspase-3的活性。 结果:1.经不同浓度的CSE(0.5%,1.0%,2.0%)作用RLE-6TN细胞48 h后,经Hoechst染色后,各CSE处理组均可见部分凋亡细胞,胞核发白、固缩、染色质边集等现象,对照组细胞核呈现均匀的淡蓝色荧光。随机视野内凋亡细胞百分数分别为:对照组(3.671±1.04)%,0.5%CSE处理组(16.606±6.645)%,1.0%CSE处理组(18.626±3.596)%以及2.0%CSE处理组(31.035±4.373)%,各CSE处理组凋亡细胞百分数较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。2.流式细胞术发现细胞早期凋亡率分别为:对照组(5.270±0.526)%,0.5%CSE处理组(22.563±1.048)%,1.0%CSE处理组(27.467±0.735)%以及2.0%CSE处理组(32.580±0.413)%,各CSE处理组细胞早期凋亡率与对照组比较,差异有统计学意义(PSmad2、磷酸化smad2

(p-Smad2)蛋白表达量与Cleaved caspase-3活性较对照组明显增加,差异有统计学意义(P
目的:观察香烟烟雾提取物(Cigarette smoke extract, CSE)是否导致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Rat alveolar Type Ⅱ epithelial cell, RLE-6TN)细胞周期的改变以及在这其中转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)是否有发挥作用。方法:选用健康清洁级SD雄性大鼠8只(重量:180~220g),完全随机平均分配为对照组、烟熏组,每组4只,给予烟熏组大鼠暴露于香烟烟雾中每天6小时连续3天,于第4天处死动物后取肺组织,进行石蜡包埋切片后,HE染色观察结构改变,免疫组化法测定CyclinD1的表达情况。体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,除对照组外,其余各组分别予0.25%、0.5%、1%浓度的CSE刺激48 h。TGF-β1受体抑制剂(SB431542)预处理细胞6 h,实验设计为对照组、1%CSE组、SB431542组、1%CSE+SB431542组,CSE刺激48 h。各组细胞于37℃、5% CO2培养箱中培养48 h后收集细胞,分别采用流式细胞仪检测细胞周期,ELISA、Western blot法测定TGF-β1、CyclinD1蛋白的表达情况。结果:烟熏组大鼠肺组织发生形态学及病理学的改变,TGF-β1表达增加、CyclinD1表达抑制(与对照组比较)。CSE暴露干预细胞后,G1期细胞的比例呈浓度依赖性与时间依赖性的增高,同时TGF-β1表达增加、CyclinD1表达抑制(与空白对照组比较P<0.

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