rDnaJ蛋白通过TLR4受体诱导小鼠BMDC成熟,与TLR2无关。5.

rDnaJ蛋白通过p38、ERK、JNK、PI3K-Akt和NF-κB等信号通路诱导小鼠BMDC成熟。6. rDnaJ蛋白通过TLR4刺激成熟的小鼠BMDC使初始CD4-T细胞向Th1和Th17细胞极化,诱导宿主产生Thl和Th17型免疫应答。结论本研究表明rDnaJ蛋白能够诱导强烈的BMDC免疫应答,该免疫应答是通过TLR4受体而不是TLR2受体、在MAPK、PI3K-Akt和NF-κB多条信号通路的参与下完成的。成熟BMDC可以使初始T细胞向Thl和Th17极化,引起宿主产生Thl和Th17型免疫应答。本研究初步阐明了肺炎链球菌DnaJ蛋白引起宿主免疫应答的机制,为肺炎链球菌DnaJ蛋白作为蛋白疫苗的研发奠定了基础。
目的：呼吸道疾病包括呼吸道感染、支气管哮喘、肺结核、肺纤维化和慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种全球性疾病,世界上有数百万人深受这类疾病的困扰。COPD导致的死亡预计到2020年将排世界第三位；全世界300百万人患有支气管哮喘,其导致的死亡人数每年达18万。人肺成纤维细胞(Human 和 pulmonary fibroblasts, HPF)不仅是肺的结构细胞,而且在肺固有免疫中扮演着重要角色。IL-32作为气道炎症中一个重要的炎症因子,促进肺部炎症发展,在肺部感染中有抵御感染的作用,在肺成纤维细胞当中的免疫学作用尚未有报道。TNF-a是气道炎症发展过程中一个关键的调节因子。研究气道炎症疾病中TNF-a调节人肺成纤维细胞表达IL-32的机制,有助于我们了解气道炎症的发展过程。方法：Q-PCR检测炎症刺激因子处理的人肺成纤维细胞中IL-32因子的mRNA表达变化；TNF-a单独或与其它因子联合处理的人肺成纤维细胞24小时后,采用ELISA检测上清中IL-32蛋白水平的变化；Western blot检测TNF-a处理的人肺成纤维细胞内信号通路蛋白JNK和Akt的磷酸化水平；采用信号通路抑制剂联合TNF-a处理的人肺成纤维细胞24小时后,采用ELISA检测上清中IL-32蛋白水平的变化。结果：TNF-a诱导可人肺成纤维细胞表达IL-32因子的四种mRNA剪接体(α、β、γ和δ)的表达增高,且具有一定的剂量依赖性。TNF-a诱导上调的IL-32蛋白主要是活性最强的IL-32γ蛋白,IL-32a蛋白并无诱导表达。与IL-17C、LPS、IFN-γ、PolyI:C、HMGB-1、Leptin和IL-27联合诱导HPF后,其IL-32y蛋白水平较TNF-a单独刺激组无显著差异,提示这些因子与TNF-a无协同作用。TNF-a激活人肺成纤维细胞后,在10分钟、20分钟时JNK和Akt的磷酸化显著增高。JNK抑制剂和Akt抑制剂联合TNF-a处理HPF组较单独TNF-a处理组的JNK和Akt的磷酸化显著降低,诱导的IL-32水平也显著下调。结论：TNF-a通过激活人肺成纤维细胞JNK和Akt信号通路诱导表达IL-32。
临床上2型糖尿病患者经常伴随高胆固醇血症。本研究利用胰岛β细胞株MIN6,考察了游离胆固醇对MIN6细胞的毒性作用。胆固醇的暴露诱导了MIN6细胞产生细胞凋亡,且这种作用方式具有时间和剂量依赖性的特点。甲基-β-环糊精的添加从细胞质膜上去除了胆固醇,并且使细胞免于胆固醇诱导的细胞凋亡。Western

Selleckchem EX527 Blot结果显示胆固醇施加后p38丝裂原活化蛋白激酶(P-p38 MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(P-JNK)的磷酸化水平显著增加,暗示应激活化蛋白激酶(SAPKs)信号通路被激活。特异性的p38抑制剂SB205830挽救了MIN6细胞免于胆固醇诱导产生的凋亡,但是JNK抑制剂SP600125没有这个效果,暗示胆固醇的施加特异性地活化了p38信号通路。内质网应激标记蛋白Bip和CHOP的表达没有受到影响,暗示在胆固醇诱导的β细胞凋亡中没有内质网应激的参与。利用活性氧荧光标记法测定细胞内活性氧(ROS)浓度的结果显示,在胆固醇施加后细胞内ROS水平显著增加,证明胆固醇诱导产生的氧化应激直接导致了细胞凋亡。综上,这些结果证明游离胆固醇通过介导氧化应激和活化p38 www.selleckchem.cn/products/kpt-330.html MAPK信号通路诱导MIN6细胞产生凋亡。
目的:5-硝基-2-3-苯丙胺苯甲酸(NPPB)属芳香族酸类非特异性氯通道阻断剂,同时其也是G蛋白偶联受体(GPCRs)家族中GPR35的激动剂,而氯离子通道与G蛋白偶联受体均与炎症有着密切的关系。近来的研究表明:炎症因子可激活血管内皮细胞氯电流,并且此电流依赖于Cl C-3氯通道的表达;而氯通道阻断剂、沉默Cl C-3氯通道蛋白以及Cl C-3基因敲除均可明显抑制内皮细胞粘附分子的表达,抑制单核细胞向内皮细胞的粘附;Cl C-3基因敲除可抑制炎症因子诱导的血管内皮细胞核转录因子-κB(NF-κB)的活化,这些均提示Cl C-3氯通道参与了炎症的过程,其调控的炎症通路可能为NF-κB信号通路。而GPR35在多种免疫细胞均有表达,与MAPK炎症通路的激活密切相关,且参与了某些炎症相关性疾病的发生,提示GPR35可能起到促进炎症的作用。NPPB兼有氯通道阻断剂和GPR35激动剂的双重作用,其在血管内炎症应答的作用机制已有较多的研究报道,而在巨噬细胞炎症应答中的作用及其机制究竟如何,目前尚未报道。因此本课题旨在探讨NPPB对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症因子的作用,并明确其作为氯通道阻断剂和GPR35激动剂对炎症因子的内在调控机制。方法:1.Western

blot和荧光定量PCR检测NPPB对LPS诱导的巨噬细胞炎症因子的作用;2.荧光定量PCR检测Cl C家族氯通道蛋白m RNA在巨噬细胞上的表达情况;3.免疫荧光法检测Cl C-3氯通道蛋白在巨噬细胞中的分布情况;4.si RNA沉默Cl C-3氯通道蛋白检测其对LPS诱导的巨噬细胞炎症应答的影响;5.Western blot检测其它氯通道阻断剂对LPS诱导的巨噬细胞细胞炎症因子表达的影响;6.Western blot检测NPPB对LPS诱导的巨噬细胞NF-κB、p38 MAPK、ERK、JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平的影响;7.Western blot检测GPR35激动剂对LPS诱导的巨噬细胞炎症因子的作用。结果:1.NPPB可上调由LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症因子蛋白质、m RNA的表达。2.Cl C-3氯通道蛋白在RAW264.7细胞上的表达明显高于其它Cl C氯通道亚型。3.沉默Cl C-3氯通道蛋白可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α的表达。4.不同氯通道阻断剂对LPS诱导的TNF-α表达的影响不同。5.NPPB下调LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB磷酸化水平。6.GPR35激动剂可上调LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α的表达。7.NPPB上调LPS诱导的RAW264.7细胞p38 MAPK磷酸化水平。结论:1.NPPB在基因、蛋白水平均可上调由LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.