方法体外培养小鼠卵巢,地塞米松(dexamethasone,Dex)诱导卵巢胰岛素抵抗模型,通过检测培养液葡萄糖含量、激素水平及逆

方法体外培养小鼠卵巢,地塞米松(dexamethasone,Dex)诱导卵巢胰岛素抵抗模型,通过检测培养液葡萄糖含量、激素水平及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)评估胰岛素抵抗模型卵巢功能的变化情况,检测胰岛素通路及激素合成通路关键分子的表达情况以及小檗碱对胰岛素抵抗的改善情况。结果(1)Dex诱导卵巢胰岛素抵抗的效果存在时间剂量依赖性,经浓度为300nmol/LDex处理48h后,卵巢购买LGK-974对葡萄糖的摄取量[(2.48±0.29)mg/g]较未用Dex培养卵巢48h组[(9.05±0.75)mg/g]下降(P<0.05);在胰岛素刺激下,Dex处理的卵巢对葡萄糖的摄取量[(1.94±0.19)mg/g]下降,与未用Dex处理72h组[(9.59±1.74)mg/g]比较,差异有统计学意义(P<0.01),卵巢胰岛素抵抗模型理想。应用中药小檗碱后,卵巢并且葡萄糖摄取量[(13.95±3.30)mg/g]较模型组[(1.89±0.33)mg/g]明显升高(P<0.05)。(2)模型组培养液中睾酮(T)和雄烯二酮(A2)水平升高,孕酮(P)和17-羟孕酮(17-OHP)水平明显下降,小檗碱能显著进一步降低T和A2浓度,并使得培养液17-OHP水平升高,但对P水平影响不大。(3)RT-PCR结果显示:Dex诱导后,卵巢1也许7-羟化酶(CYP17)、极微染色体维持蛋白(MCM-2)的mRNA表达水平升高,细胞外信号调节激酶-1(ERK-1)、蛋白激酶B(AKT-2)、糖原合酶激酶-3(GSK-3β)的mRNA表达水平下降,应用小檗碱后,上述分子指标明显逆转。结论(1)Dex能够诱导卵巢器官胰岛素抵抗,卵巢产生胰岛素抵抗对雄激素合成可能存在促进作用。(2)中药小檗碱能降低卵巢的胰岛素抵抗程度和雄激素合成,提示对胰岛素有增敏作用的中药,对多囊卵巢综合征有良好的治疗作用。

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