本实验通过下调47k Da Anxa7表达后,检测Bcl-2、Bax、Caspase3、Caspase 8、Caspase 12、Fas、Fas-L及Cytochrome C凋亡相关蛋白的改变,进而揭示47k Da Anxa7参与的凋亡通路。此外本实验还通过采用线粒体膜电位、免疫共沉淀及WB等方法,进一步验证47k Da Anxa7参与的凋Ferrostatin-1核磁亡通路及相关凋亡蛋白的分布与改变。目的1.构建p GPU6/GFP/Neo-sh RNA-Anxa7和p GPU6/GFP/Neo-sh RNA-NC表达载体,稳定转染至低淋巴道转移细胞株Hca-P细胞中,得到Pd细胞、Pdn细胞。2.研究小鼠肝癌P、Pdn及Pd细胞组中,47k Da与51k Da Anxa7在三LGX818购买组细胞中不同亚细胞定位及表达的变化。3.研究小鼠肝癌Hca-P细胞47k Da Anxa7基因表达水平下调后,P、Pdn及Pd细胞组凋亡及迁徙能力的变化。4.研究小鼠肝癌Hca-P细胞47k Da Anxa7基因表达水平下调后,P、Pdn及Pd细胞组细胞增殖能力及凋亡相关蛋白Bcl-2、Cytochrome-C、Cselleck激酶抑制剂aspase-3、Bax、Caspase-12、Fas、Fas L、Caspase-8的表达变化。5.研究小鼠肝癌Hca-P细胞47k Da Anxa7基因表达水平下调后,Anxa7参与的凋亡通路相关机制的探索。方法1.构建p GPU6/GFP/Neo-sh RNA-Anxa7和p GPU6/GFP/Neo-sh RNA-NC表达载体,稳定转染至Hca-P细胞,获得Pd、Pdn,P细胞为阴性对照。