结论 PGP通过抑制乳腺肿瘤细胞增殖,促进凋亡和抑制转移等机制从而控制乳腺肿瘤的发生发展。
目的探讨组织蛋白酶V (cathepsin V,CTSV)在辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬中的作用机制。方法以人乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,MuseSelleckchem AICAR细胞分析仪检测SAHA对细胞活力的影响;Real-time PCR和Western blot检测SAHA对CTSV的mRNA和蛋白的作用;CTSV-siRNA转染细胞,Real-time PCR和Western blot检测CTSV的mRNA和蛋白的情况;细胞免疫荧光法检测SAHA对LC3B表达的影响;Real-time PCR和WestAZD0156半抑制浓度ern blot检测SAHA诱导自噬相关ATG分子和LC3的mRNA和蛋白的变化;Bafilomycin A1抑制自噬,随后Western blot测定p62蛋白水平,Muse细胞分析仪检测SAHA对细胞活力的作用。结果 SAHA在抑制MDA-MB-231细胞增殖的同时促进CTSV的表达。CTSV-siRNA转染细胞后,CTSV的mRNARGFP966分子量和蛋白水平均明显降低。SAHA促进LC3免疫荧光点的增加,与CTSV-siRNA联合作用后可以恢复由CTSV-siRNA干扰引起的细胞自噬减弱。SAHA增强了Beclin1的表达,并伴有LC3B升高和mTOR降低。CTSV-siRNA的加入逆转了SAHA的效应。Bafilomycin A1阻断自噬后,被SAHA抑制的p62蛋白的表达和细胞活力明显增加。结论 SAHA靶定CTSV诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬。