通过建立裸鼠成瘤在体模型观察胃泌素、曲妥珠单抗的协同抗肿瘤作用,绘制肿瘤生长曲线；并取裸鼠荷瘤组织开展免疫组织化学染色分析,观察CCKBR的表达及膜定位的影响,提取蛋白后Western-blot检测AE1、AE2、P16、CyclisD1等蛋白表达改变,在体研究胃泌素、曲妥珠单抗通过上调CCKBR抑制胃癌细胞增殖的分子生物学机制。 结果： 1.7种胃癌细胞株及永生化的正常的人类胃粘膜上皮细胞株GES-1中只有NCI-N87表达HER2蛋白,而CCKBR在大部分胃癌细胞株中均表达阳性。 2.曲妥珠单抗对HER2阳性的NCI-N87细胞有明显增殖抑制作用,对HER2阴性的SGC7901细胞无效。胃泌素对SGC7901、NCI-N87细胞均有增殖抑制作甩,细胞计数及克隆形成实验证实在NC1-N87、SGC7901细胞中,胃泌素、曲妥珠单抗联合用药与单药组相比有明显协同肿瘤增殖抑制作用。流式细胞术提示胃泌素、曲妥珠单抗可协同阻滞SGC7901细胞于G0/G1期。 3.胃泌素、曲妥珠单抗可协同上调CCKBR蛋白,Real-time PCR结果证实胃泌素、曲妥珠单抗不影响SGC7901细胞CCKBR

mRNA水平,但CHX、MG132实验结果显示胃泌素、曲妥珠单抗可协同增加CCKBR蛋白的稳定性并降低CCKBR蛋白的泛素化水平。 4. Western-blot证实胃泌素、曲妥珠单抗可协同下调SGC7901细胞中p16、AE1、CyclinD1、β-catenin蛋白表达,上调AE2蛋白,降低胞浆内p16蛋白并促进其入核。 Cabozantinib 5.裸鼠荷瘤实验显示胃泌素、曲妥珠单抗在体内亦有协同抗肿瘤作用,荷瘤免疫组织化学染色显示联合用药组细胞膜CCKBR蛋白表达较单药组明显增多,荷瘤组织提取蛋白做Western-blot示胃泌素、曲妥珠单抗在体内亦协同下调p16、AE1、CyclinDl蛋白、上调AE2蛋白,与体外实验结果一致。 SB525334核磁共振 结论： 1.胃泌素、曲妥珠单抗的体内、体外实验均证实对胃癌有协同抗肿瘤作用,并首次发现曲妥珠单抗在HER2阴性的胃癌细胞中同样具有协同抑癌作用。 2.胃泌素、曲妥珠单抗协同上调CCKBR蛋白表达并促进其膜定位,上调的CCKBR与胃泌素相结合启动并放大对下游信号分子的影响可能是胃泌素与曲妥珠单抗协同抗肿瘤增殖的关键环节。 3.上调的CCKBR与胃泌素结合后可影响AE1/p16/AE2复合体,使胞浆内p16减少、入核增加,AE1下调,AE2上调,细胞酸化,Wnt/β-catenin通路失活,CyclnD1下降,最终阻滞细胞于G1期从而抑制肿瘤细胞增殖。
目的：探讨mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1在新疆维、汉乳腺癌组织中的分子病理学机制。方法：随机选取285例于2005年3月-2009年9月期间就诊于新疆医科大学附属肿瘤医院的维吾尔族、汉族女性浸润性乳腺癌患者,检测磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达状况,分析其与各临床指标之间的关系及对预后的影响；选取46对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,使用免疫印记(Western-blot)蛋白方法检测磷酸化mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1的表达情况,并测定其相对定量。选取63对维、汉新鲜乳腺癌组织和癌旁组织样本,检测mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1mRNA的表达情况,并与蛋白检测的结果进行对照。结果：p-mTOR的表达阳性率分别是72%(206/285)和60%(170/285),,p=0.001；p-4EBP1的表达阳性率分别是26%(74/285)和8%(24/285),,p=0.000；p-S6K1的表达阳性率分别是42%(120/285)和18%(50/285),p=0.000,p值均小于0.01,差别均有显著统计学差异。三指标与各临床指标的单因素分析显示均与无病生存率无明显统计学差异,多因素分析显示不同民族(p=0.000)、BMI指数(p=0.048)、ki-67的表达(p=0.004)以及p-S6K1的表达(p=0.000)与无病生存率相关。无病生存的Log

SCH727965核磁共振 Rank检验的X2值分别为0.274,0.920和0.144,p值分别为0.619,0.337和0.704, p-mTOR、 p-4EBP1、p-S6K1的表达与无病生存率之间无明显统计学差异。在维吾尔族和汉族乳腺癌组织中,p-mTOR的表达阳性率分别是54%和46%(p=0.067), p-4EBP1的表达阳性率分别是62%和38%(p=0.020), p-S6K1的表达阳性率分别是49%和51%(p=0.695)。荧光定量rtPCR结果显示,mTORmRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的2-△△ct平均值分别是14.83、19.78, t=-1.376, p=0.174; S6K1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的2-ΔΔct平均值分别是66.06,87.51, t=-1.15, p=0.254;4EBP1mRNA在乳腺癌组织和癌旁组织中表达的平均值分别是12.70、10.33,t=0.379,p=0.706,三者差异均无明显统计学意义(p>0.05)。维、汉乳腺癌组织中mTORmRNA2－ΔΔct平均值分别为10.88和19.7,差异有统计学意义(p=0.045),4EBP1mRNA2－ΔΔct平均值分别为52.72和80.74,差异无统计学意义(p=0.128),S6K1mRNA2-－ΔΔct平均值分别为7.97和17.92,差异无统计学意义(p=0.