然而,复杂的PIF基质会影响到检测过程,还需进行预处理。本研究利用免疫磁分离和金纳米杂交探针策略,开发了一种快速和灵敏的可视化检测PIF中C. sakazakii的方法。抗体功能化的磁颗粒捕获C. sakazakii,金纳米探针对聚合酶链式反应的产物进行分析,这种探针法可以替代传统的电泳。免疫磁颗粒是由100 μL的磁颗粒、120 μL的PD98059购买碳化二亚胺盐酸盐、80 μL的C. sakazakii单克隆抗体和体积分数0.02%的吐温-20制备。这种方法仅检测C. sakazakii是阳性的结果。在纯培养基和不经预富集的人工污染PIF,分别能检测到10~(2) CFU/mL和10~(3) CFU/g的C. sakazakii。经过3 h预富集的过程,此方也法可以在PIF中检测到低至4.5×10~(1) CFU/g的C. sakazakii。可视化、电泳和紫外扫描光谱的结果是一致的。因此,免疫磁分离和金纳米探针的方法可以替代凝胶电泳,对于快速检测C. sakazakii重要的意义。这将有助于检测PIF样本的C. sakazakii。
该研究通过RT-PCRMK-0518体外扩增和测序从玉米幼苗中克隆到一个高温胁迫诱导的热激转录因子(heat shock transcription factors, HSFs)基因,命名为ZmHSF05,其开放阅读框(ORF)长度为1 080 bp,编码359个氨基酸。序列分析发现,ZmHSF05具有热激转录因子蛋白的典型结构特征,含有一个DNA结合域(BD)和一个AHA激活功能结构域(AD/AHA),并且具有核定位信号(NLS)。