本文设计合成的嘧啶苄基异羟肟酸类双靶点抑制剂可能是由于其多靶向性而明显提高抗肿瘤细胞增殖活性。所以,作用于不同的肿瘤通路的双靶点或多靶点抑制剂,具有较好的研究前景,可能成为将来肿瘤治疗领域的重要策略。
目的研究UHRF2与组蛋白H3乙酰化(H3K9ac和K3K14ac)的相互作用及两者相互作用结合区域的鉴定。探讨UHRF2分别在正常细胞和癌细胞中对K3K9ac和H3K14Dinaciclibac的影响及其分子机制。方法1. 在HEK293、LO2和HepG2细胞中转染UHRF2,进行免疫荧光后,激光共聚焦检测UHRF2与组蛋白H3、H3K9ac和H3K14ac在细胞内的共定位现象。再在上述细胞中转染UHRF2和空载质粒,采用免疫沉淀技术,研究UHRF2与H3K9ac和H3K14ac的相互作用。2. 通过双酶切鉴定UHRF2各缺失体质粒Gefitinib研究购买,将各缺失体质粒转染HEK293、LO2和HepG2细胞,进行免疫沉淀实验。研究UHRF2与H3K9ac和H3K14ac相互作用的结合区域。3. 通过免疫印迹和免疫组化化学方法检测内源性UHRF2、H3、 H3K9ac和H3K14ac蛋白在HEK293、LO2和HepG2细胞中以及在肝癌和癌旁组织中的表达情况。4. 采用瞬时转染技术上调UHRF2蛋LBH589白,通过免疫印迹检测UHRF2在HEK293、LO2和HepG2细胞中对H3K9ac和H3K14ac影响。同时通过免疫组织化学检测肝癌标本中UHRF2蛋白水平的高低与H3K9ac和H3K14ac蛋白表达情况的相关性。结果1. 激光共聚焦实验结果显示：UHRF2与H3、H3K9ac和H3K14ac在HEK293、LO2和HepG2细胞内均有存在共定位现象。免疫沉淀实验结果表明:UHRF2与H3K9ac在上述细胞中相结合存在相互作用。