01)。IL-1β组明显低于IL-1β+SB202190组和对照组,差异有显著性(P0.05)。(2)MMP-3的表达：3组间比较差异有显著性(P0.05)。 结论IL-1β抑制NIH3T3细胞COL1A2的合成,促进MMP-3的合成,可能对硬膜外瘢痕的形成有一定的抑制作用,而p38通路在IL-1β抑制瘢痕形成过程中起到重要的作用。
目的：观察七氟烷后处理对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤是否具有保护作用,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 PD0332991分子量 mitogen-activated protein kinases, p38 MAPK)信号传导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤中的意义。 方法：取出生1-3天的Sprague-Dawley (SD)大鼠心脏,利用酶消化法分离心肌细胞。通过倒置相差显微镜观察培养细胞的生长状态,并采用a-actin免疫细胞化学法鉴定培养细胞类型及心肌细胞特征。制作心肌细胞缺氧／复氧模型和七氟烷后处理模型,并将培养乳鼠心肌细胞随机分为7组：(1)正常对照组(Control组)细胞于C02培养箱中持续培养3h。(2)缺氧／复氧组(A／R组)细胞缺氧2h,复氧1h。(3)七氟烷后处理组(S-post组)细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min。(4)七氟烷后处理+SB203580组(S-post+SB组)细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min,并在七氟烷后处理同时给予p38

MAPK抑制剂SB203580(终浓度为5μmol/L;溶解于终浓度为0.1%的DMSO),持续20min。(5)七氟烷后处理+二甲亚砜组(S-post+DMSO组)细胞缺氧2h,3%七氟烷后处理20min,复氧40min,并在七氟烷后处理同时给予SB203580溶剂DMSO(终浓度为0.1%),持续20min。(6)SB203580组(SB组)细胞缺氧2h,复氧1h,并在复氧同时给予SB203580(终浓度为5μmol／L；溶解于终浓度为0.1%的DMSO),持续20min。(7)二甲亚砜组(DMSO组)细胞缺氧2h,复氧1h,并在复氧同时给予DMSO(终浓度为0.1%),持续20min。实验结束时各组分别用比色法检测乳酸脱氢酶(lactate

并且 dehydrogenase, LDH)活性、肌酸激酶(creatine kinase, CK)活性,台盼蓝排斥实验检测细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率,并提取细胞蛋白,应用Western blot检测]p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK (p-p38 MAPK)蛋白水平。 结果：成功培养出大鼠心肌细胞并经免疫组化鉴定证实,细胞数量达到实验要求。与Control组相比,A／R组LDH和CK活性升高、细胞存活率降低、流式细胞仪检测细胞凋亡率升高(P<0.05)。与A／R组相比,S-post组LDH和CK活性降低、细胞存活率提高、流式细胞术检测细胞凋亡率降低(P<0.05)。与S-post组相比,S-post+SB组LDH和CK活性升高、细胞存活率降低、流式细胞仪检测细胞凋亡率升高(P0.05)。各组间p38

还有 MAPK水平差别无统计学意义(P>0.05),与A／R组相比,S-post组p-p38 MAPK蛋白水平升高(P<0.05)。SB组p-p38水平低于A／R组(P0.05)。 结论：体外条件下成功分离、培养出乳鼠心肌细胞。缺氧／复氧可对乳鼠心肌细胞造成损伤。七氟烷后处理可以减轻乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤。七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护机制与激活p38 MAPK信号通路有关。
目的:随着人类社会的老龄化,绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis, PMOP)已成为影响老年妇女生活质量的一种多发病,其首要病因是绝经后雌激素水平的降低。具有骨靶向性的雌激素类药物可以在治疗PMOP的同时避开雌激素对乳腺、卵巢等非靶器官的毒副作用,因此该类药物已经称为目前抗骨质疏松药物研究的热点之一。本室以骨靶向分子大黄酸为载体,雌酚酮为母体,合成了骨靶向雌激素大黄酸哌嗪雌酚酮(rhein-piperizinyl-estrone,命名为LC),前期研究已证实LC对去卵巢大鼠具有明显的抗骨质疏松活性,并能够显著促进原代培养的大鼠成骨细胞增殖和分化。本课题进一步研究了LC对人成骨样细胞MG-63的增殖、分化功能、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/ NF-κB激活受体配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)/ NF-κB激活受体(receptor activator of NF-κB,RANK)系统以及白介素-6(interleukin-6,IL-6)及其受体表达的作用,并对其可能的作用机制进行了初步探讨。 方法:1.MTT法检测MG-63细胞的增殖能力。2.流式细胞仪检测细胞周期。3.磷酸苯二钠法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性。4.逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测OPG、RANKL、IL-6及其受体(IL-6Rα、gp130)mRNA的表达水平。5.酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immnosorbent assay,ELISA)检测IL-6蛋白的表达水平。6.免疫印迹(Western Blot)技术检测OPG、RANKL、IL-6Rα及gp130蛋白的表达水平。7.采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)分别对MG-63细胞的雌激素受体(estrogen receptor ,ER)α和ERβ基因进行沉默,G418筛选出阳性单克隆,扩大培养后用Western Blot技术分别鉴定出ERα或ERβ高、中抑制表达克隆用于研究LC对ER两种亚型的亲和力是否存在差异。8.